【摘要】：豬繁殖與呼吸綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRS virus,PRRSV)引起的一種重要傳染病,給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失,其主要臨床表現(xiàn)為妊娠母豬的繁殖障礙和各年齡階段豬的呼吸道癥狀。PRRSV為RNA病毒,其基因組在復(fù)制過程中容易發(fā)生突變,產(chǎn)生PRRSV變異株,并伴隨著病毒生物學(xué)特性的改變。我國自1996年首次報道PRRSV后,相繼出現(xiàn)一系列的PRRSV變異株,比如2006年爆發(fā)的高致病性藍耳病變異株、近年來出現(xiàn)的NADC30-like PRRSV和GM-like PRRSV,毒株的多樣性給PRRS的防控帶來了很大的困難。為了解我國PRRSV的分子流行病學(xué)和遺傳變異特征,本研究從臨床樣品中測得217條ORF5序列,以及從GenBank中獲取的我國自1996年首次報道PRRSV以來至2016年12月的所有ORF5基因序列(n=2213,來自全國32個省份),并進行了系統(tǒng)分型和地理分布分析。結(jié)果表明我國北美洲型PRRSV可分為5個分支(lineage),分別為L1分支、L3分支、L5分支、L8分支和L9分支,各分支之間氨基酸同源性不超過90%。其中L8分支(HP-PRRSV)為我國PRRSV的主要分支,占所有毒株數(shù)量的85.6%;近年新出現(xiàn)的L1分支(NADC30-like PRRSV)與L3分支(GM-like PRRSV)毒株所占比例有明顯的上升趨勢。在L8分支(HP-PRRSV)中出現(xiàn)了與JXA1和HuN4等早期高致病性藍耳病變異株差異較大的毒株,參照進化樹拓?fù)浣Y(jié)構(gòu),本研究以氨基酸同源性不超過96.5%為依據(jù),將L8分支細(xì)分為7個亞分支(L8.1-L8.7),以便今后更好地監(jiān)測HP-PRRSV的遺傳變異情況。在此基礎(chǔ)上,繪制出各省份出現(xiàn)的PRRSV分支情況,以及各分支PRRSV在各省總毒株中所占比例。同時參考毒株分離時間、遺傳親緣關(guān)系、豬只貿(mào)易等因素,繪制出不同分支PRRSV的可能的跨省傳播路線。目前我國歐洲型PRRSV均為歐洲型L1分支。通過對北美洲型PRRSV全基因組序列(n=204)分析發(fā)現(xiàn)HP-PRRSV和經(jīng)典PRRSV之間存在兩個規(guī)律性的氨基酸突變,分別位于NSP9的第519位和第544位�；贖P-PRRSV HuN4株和經(jīng)典PRRSV CH-1a株感染性克隆,構(gòu)建了一系列的第519位或第544位氨基酸互換和缺失的突變病毒。發(fā)現(xiàn)缺失任何一個氨基酸都不能拯救出子代病毒。在Marc-145和PAM細(xì)胞上的復(fù)制動力學(xué)表明,以HuN4為骨架的突變病毒較其親本復(fù)制效率明顯降低,而以CH-1a骨架的突變病毒的復(fù)制效率明顯提高。突變病毒的噬斑大小與其親本病毒之間也存在明顯差異。在仔豬感染實驗中,通過感染突變病毒與親本病毒的仔豬的臨床癥狀、血清病毒載量、組織病理學(xué)和胸腺萎縮等指標(biāo)檢測,發(fā)現(xiàn)以HuN4為骨架的突變病毒對仔豬的致病性較其親本明顯降低。結(jié)果表明,NSP9中第519位和第544位的氨基酸是決定HP-PRRSV高復(fù)制效率以及高致病性的關(guān)鍵氨基酸。本研究較為系統(tǒng)地分析了我國1996年首次報道PRRS以來我國PRRSV的遺傳變異情況,制定了高致病性PRRSV亞分支的分類標(biāo)準(zhǔn),基本摸清了各省PRRSV本底,為我國PRRS的防控提供了理論支撐。首次鑒定出高致病性PRRSV的致病相關(guān)氨基酸位點,有助于了解高致病性PRRSV的分子致病機制。
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S852.65
【圖文】：

業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第二章 我國PRRSV遺傳變異分析及NSP9氨基酸突變對PRRSV致現(xiàn)。還有一些省份，例如河南省和吉林省，有的分支病毒經(jīng)由該省份傳播至多個份發(fā)散出很多條傳播路線），這也能反應(yīng)這些省份是病毒傳播的一個主要地區(qū)。除發(fā)現(xiàn)病毒的傳播不完全依賴于地域的相鄰性，例如 L9 分支病毒是直接由新疆省，這中間的其它省份并沒有分離到 L9 分支的病毒。有文獻報道，PRRS 可以通過生液以及空氣甚至旅行乘客的衣服、鞋或其他物品上攜帶病毒等方式在全世界范圍bina, 1997）。

圖 3 我國北美洲型 PRRSV 各分支毒株的地理分布Fig 3. Geographical distribution of PRRSVs in China

【參考文獻】

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本文編號：2721554