【摘要】：近年來,H5Nx禽流感病毒遺傳進(jìn)化迅速,不斷通過基因突變和基因重排產(chǎn)生新的亞型,嚴(yán)重威脅家禽養(yǎng)殖業(yè)和人類健康,對H5亞型禽流感的防控帶來新的挑戰(zhàn)。野生動物在H5Nx禽流感病毒的進(jìn)化、流行與傳播過程中扮演了重要角色。一方面,野鳥是禽流感病毒的天然儲存庫,禽流感病毒可隨候鳥在全球范圍內(nèi)長距離遷徙而獲得與各地區(qū)流行病毒重組和重配的機(jī)會。另一方面,致死性H5N1禽流感病毒跨種傳播至果子貍、虎、獅等野生哺乳動物,威脅野生哺乳動物的生命安全和生物多樣性。監(jiān)測H5Nx流感病毒野生動物中的流行趨勢,解析野生動物攜帶H5Nx流感病毒的遺傳進(jìn)化規(guī)律及其對家禽、哺乳動物致病性和傳染性改變趨勢,對于及時進(jìn)行H5Nx禽流感病毒流行預(yù)警、評價野生動物攜帶的H5Nx流感病毒有無跨種傳播風(fēng)險至關(guān)重要。本研究通過對野鳥及野生哺乳動物感染H5Nx禽流感病毒進(jìn)行主動預(yù)警監(jiān)測和緊急疫情檢測明晰了野生動物攜帶H5Nx禽流感病毒情況;利用病毒全基因組測序、系統(tǒng)發(fā)育及關(guān)鍵氨基酸位點分析解析了野生動物源H5Nx禽流感病毒遺傳進(jìn)化情況,進(jìn)而通過體外和體內(nèi)復(fù)制動力學(xué)、受體結(jié)合特性檢測、豚鼠間傳播實驗等方法,評價了不同野生動物源H5Nx禽流感病毒致病性與傳播能力。首先,本研究進(jìn)行了野鳥及野生哺乳動物的主動預(yù)警監(jiān)測和緊急疫情檢測。2015年8月份至2017年5月份,選取候鳥遷徙路線上重要的繁殖與停歇地作為野鳥樣品采集點,采集咽拭子、肛拭子、糞便等樣品共計9082份,分離獲得不同亞型的低致病性禽流感病毒53株,包括:H3N8(7株)、H4N6(12株)、H9N2(8株)、H6N5(6株)H7N8(14株)、H10N4(1株),H10N7(4株)、H12N5(1株),未分離到H5亞型禽流感病毒。在緊急疫情檢測方面,本研究從死亡野鳥體內(nèi)分離獲得3株clade 2.3.4.4 H5N6及H5N8亞型禽流感病毒,從死亡東北虎及獅子體內(nèi)分離到3株clade 2.3.2.1c H5N1亞型禽流感病毒,繼而對分離到的H5Nx AIVs毒株進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析,明確了其遺傳進(jìn)化情況,并對決定其相關(guān)生物學(xué)特性的關(guān)鍵氨基酸位點進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)不同譜系野生動物源H5Nx禽流感病毒重配情況復(fù)雜,既存在H5亞型之間的重配,又存于低致病禽流感病毒的重配。氨基酸突變位點分析顯示H5Nx分離株不同程度攜帶哺乳動物致病性增強(qiáng)的氨基酸突變位點。在上述研究的基礎(chǔ)上,將虎源H5N1、獅源H5N1、野鳥源H5N8(斑頭雁)、H5N6(孔雀)亞型禽流感病毒野毒株分別感染MDCK細(xì)胞和BALB/c小鼠,評價與分析野生動物源H5Nx分離株的體內(nèi)外復(fù)制能力、組織嗜性、小鼠半數(shù)致死量、受體結(jié)合能力、致病性及傳播能力。實驗結(jié)果表明,clade 2.3.2.1c H5N1禽流感病毒在體內(nèi)外表現(xiàn)出更強(qiáng)復(fù)制能力,對小鼠具有廣泛的組織嗜性及高度致病性。Clade2.3.4.4野鳥源H5亞型禽流感病毒可以不經(jīng)適應(yīng)直接感染小鼠并在呼吸系統(tǒng)內(nèi)復(fù)制,其中野鳥源H5N8對小鼠呈低致病性,野鳥源H5N6對小鼠呈中度致病性。與野生哺乳動物源clade 2.3.2.1c H5N1禽流感病毒相比,其在體內(nèi)外復(fù)制能力較低,表現(xiàn)出有限的組織嗜性;保持結(jié)合禽樣受體的能力,且不能在豚鼠間傳播。綜上所述,本研究加深了對野生動物攜帶H5Nx禽流感病毒的認(rèn)識和理解,對野生動物源H5Nx禽流感病毒生物學(xué)特性的評價,為預(yù)測野生動物源H5Nx禽流感病毒遺傳進(jìn)化趨勢及其生物安全風(fēng)險評估提供借鑒和參考。
【學(xué)位授予單位】：軍事科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S852.65
【圖文】：

圖 1.1 樣品采集地點分布我國地域遼闊，豐富多樣的生態(tài)環(huán)境為野生動物的繁衍棲息提供了必要的物礎(chǔ)。全球八條候鳥遷徙路線中的三條經(jīng)過我國，分別為東亞-澳大利亞遷徙路東非-西亞遷徙線和中亞遷徙線。2015 年 8 月份至 2017 年 5 月份，分別選取東亞-澳大利亞遷徙路線上的重要的候鳥繁殖與停歇地如圖牧吉自然保護(hù)區(qū)，江三湖自然保護(hù)區(qū)、渤海灣灘涂濕地（河北南大港濕地自然保護(hù)區(qū)、黃燁古堤自然保護(hù)區(qū)及海興濕地）作為野鳥樣品采集點，選取位于中亞遷徙線上的東洞庭湖自然保護(hù)區(qū)作為野鳥樣品采集點（圖 1.1），采集樣品類型包括咽拭

圖 1.2 樣品采集數(shù)量及毒株分離情況通過特異性 RT-PCR 鑒定、病毒分離，共分離到禽流感病毒 53 株，其中 H3N8株)、H4N6（12 株）、H9N2（8 株）、H6N5（6 株）H7N8（14 株）、H10N4（株），H10N7(4 株)、H12N5（1 株），病毒總體分離率為 0.584%。不同監(jiān)測點病毒分離率不同，圖牧吉保護(hù)區(qū)及周邊分離率最高，為 1.59%。渤海灣灘涂濕地病毒分離率最低，為 0.22%�？傮w而言，雁鴨類的病毒分離率為 0.85%，遠(yuǎn)高于

本文編號：2714471