【摘要】：目的:LPS作為G~-菌的重要致病因子之一,常常引起動物疾病的發(fā)生,目前已在哺乳動物方面有大量研究,能導(dǎo)致動物急性肺損傷以及肝、腎等組織功能障礙進而引起內(nèi)毒素血癥造成動物死亡;但在禽類的研究少有報道且主要圍繞引起動物體溫變化及局部組織病變和炎性因子的影響。而導(dǎo)致禽類致炎甚至死亡的研究報道就更少,是禽類對LPS的耐受,還是不敏感?為此本試驗嘗試建立LPS致雛雞的炎癥模型,探究LPS對禽類的致病性及致炎條件。方法:取1日齡肉公雛180只,分為空白對照組(K)、LPS組(L)、血凝酶組(N)、血凝酶+LPS組(N+L),每組15只并設(shè)3個重復(fù)。K組腹腔注射無菌生理鹽水;N組頸靜脈注射250 U·kg~(-1)血凝酶;L組腹腔注射10 mg·kg~-11 LPS;N+L組頸靜脈注射250U·kg~(-1)血凝酶15 min后腹腔注射10 mg·kg~-11 LPS,0.2 mL/只。實時觀察注射后24h內(nèi)各組雛雞的臨床癥狀;分別測量0、1、3、6、12、24 h的直腸溫度;于24 h后收集血液作白細胞計數(shù)和細胞因子(TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、IL-8、NO)檢測;頸部放血處死后觀察雛雞解剖病理變化,同時取心、肝、脾、肺、腎組織固定制作病理切片觀察病理學(xué)變化,綜合評價炎癥模型。并應(yīng)用市售抗炎藥地塞米松對動物模型進行治療,從臨床癥狀和組織病變等指標(biāo)進行療效評價。結(jié)果:24 h內(nèi)K、N組雛雞狀態(tài)無明顯變化;L組部分雛雞在6 h內(nèi)飲食下降、精神沉郁等,6h后恢復(fù)正常;N+L組雛雞在12 h內(nèi)飲食明顯下降甚至無飲食欲,精神沉郁、扎堆、嗜睡等,24 h內(nèi)有20%左右雛雞死亡,剖解變化主要是腹腔有大量紅黑色組織液滲出。24 h內(nèi)K、N組雛雞溫度維持平衡,L、N+L組于注射后1 h溫度下降,3 h上升達最大值后逐漸下降至正常。白細胞計數(shù)顯示K組顯著高于N、L、N+L組(P0.05)。ELISA檢測結(jié)果顯示,N、L、N+L組雛雞分泌的TNF-α、IL-6、IL-8含量均極顯著高于K組(P0.01);N、N+L組雛雞分泌的IL-1β含量顯著或極顯著高于K組(P0.05,P0.01),L與K組差異不顯著(P0.05);L、N+L組雛雞分泌的NO含量極顯著高于K組(P0.01),N組含量低于K組且無顯著性差異(P0.05)。剖解結(jié)果顯示N+L組雛雞的肝臟及部分其他組織呈明顯出血現(xiàn)象,其他組未見異常。HE染色結(jié)果顯示:N+L組雛雞的心、肝、脾、肺、腎組織間均可見明顯血細胞增多且有溶血現(xiàn)象,組織內(nèi)有少量滲出物浸潤。模型應(yīng)用結(jié)果顯示:注射后24 h內(nèi)與K組相比M組出現(xiàn)了明顯臨床癥狀,72 h炎性因子含量增加,剖解見腹腔及肝臟等的出血癥狀;而Y組較M組均有好轉(zhuǎn)。結(jié)論:用LPS單獨刺激雛雞未能建立理想的炎癥感染模型,但在血凝酶的輔助下刺激雛雞可獲得重復(fù)性較好的病理模型,用陽性藥地塞米松治療模型顯示癥狀有所改善,提示血凝酶在雛雞炎癥方面具有重要作用,但LPS和血凝酶對雛雞的具體作用機制有待進一步深入研究和驗證。
【學(xué)位授予單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S858.31
【圖文】：

組別 TNF-α IL-1β IL-6 IL-8 NOK 118.71±1.04 846.39±29.20 24.48±0.85 108.18±3.24 24.14±0.92N 258.40±11.61**1080.88±44.51*105.71±3.38**382.80±13.58**17.37±0.87L 158.14±3.77**918.60±16.66 94.55±0.83**405.42±1.97**88.38±0.75**N+L 205.63±4.44**1565.81±0.98**112.49±1.29**427.37±3.94**136.82±1.86**3.3.5.1 血漿 TNF-α檢測結(jié)果將 0，5，10，20，40，80 pg·mL-1雞 TNF-α標(biāo)準(zhǔn)溶液的檢測結(jié)果以標(biāo)準(zhǔn)物濃度為橫坐標(biāo)，測得的吸光值△OD 為縱坐標(biāo)，制作雞炎癥因子 TNF-α標(biāo)準(zhǔn)曲線（見圖 9A），得到直線回歸方程：y=0.0116x+0.0234，R2=0.9968。由標(biāo)準(zhǔn)曲線計算雞血漿中炎性因子 TNF-α含量，結(jié)果顯示：與 K 組相比，N、L、N+L 組雛雞分泌的 TNF-α含量均極顯著升高（P<0.01），但 N 組分泌量顯著高于 L、N+L組（P<0.05），見圖 9 B。AB

貴州大學(xué) 2019 屆專業(yè)碩士研究生學(xué)位論文3.3.5.2 血漿 IL-1β檢測結(jié)果將 0，40，80，160，320，640 pg·mL-1雞 IL-1β標(biāo)準(zhǔn)溶液的檢測結(jié)果以標(biāo)準(zhǔn)物濃度為橫坐標(biāo)，測得的吸光值△OD 為縱坐標(biāo)，制作雞炎癥因子 IL-1β標(biāo)準(zhǔn)曲線（見圖 10A），得到直線回歸方程：y=0.002x+0.0706，R2=0.9941。由標(biāo)準(zhǔn)曲線計算雞血漿中炎性因子 IL-1β含量，結(jié)果顯示：與 K 組相比，N 組雛雞分泌的IL-1β顯著升高（P<0.05），N+L 組分泌量極顯著升高（P<0.01），L 組無顯著性差異（P>0.05），見圖 10 B。AB

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本文編號：2714413