【摘要】：應(yīng)激條件下葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白94(Glucose-regulated protein 94,GRP94)如何參與肝臟損傷的機(jī)制尚不清楚,本論文擬從以下五個(gè)方面進(jìn)行研究:試驗(yàn)一持續(xù)高溫應(yīng)激下生長(zhǎng)豬GRP94與IGF-1表達(dá)規(guī)律研究試驗(yàn)選取27頭體重相近(40.8±2.7 kg)的大白閹公豬,隨機(jī)分為3個(gè)組:適溫對(duì)照組(Thermal neutral,TN)、高溫應(yīng)激組(Heat stress,HS)和采食量配對(duì)組(Pair-fed thermal neutral,PFTN),試驗(yàn)期21 d。結(jié)果發(fā)現(xiàn):與TN組比,HS組肝臟GRP94和胰島素樣生長(zhǎng)因子(Insulin like growth factor1,IGF-1)表達(dá)顯著升高(P0.05),血漿IGF-1:IGFBP-3比值極顯著升高(P0.01)。持續(xù)高溫下GRP94蛋白表達(dá)與IGF-1水平呈中等相關(guān),相關(guān)系數(shù)為0.69。結(jié)果表明,HS誘發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(Endoplasmic reticulum stress,ERS),并使IGF-1升高,且IGF-1含量與GRP94表達(dá)呈中等相關(guān)。試驗(yàn)二豬肝臟永生化細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激模型構(gòu)建試驗(yàn)分別采用濃度為1、2、5、10和15μg/mL的衣霉素(Tunicamycin,TM)處理豬肝星狀細(xì)胞系(Hepatic stellate cell,HSC),培養(yǎng)2、4、8、16、24和36 h。根據(jù)檢測(cè)的細(xì)胞抑制率、細(xì)胞周期和ERS相關(guān)基因和蛋白表達(dá),確定5μg/mL TM處理24 h可成功構(gòu)建細(xì)胞ERS模型。試驗(yàn)三內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激條件下GRP94低表達(dá)對(duì)豬肝細(xì)胞損傷、IGF-1表達(dá)及泛素化的影響試驗(yàn)構(gòu)建GRP94基因沉默慢病毒,用其轉(zhuǎn)染豬HSC 72 h后,加入5μg/mL TM繼續(xù)培養(yǎng)24 h,收集細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),GRP94低表達(dá)在ERS下顯著抑制p-IRE1蛋白表達(dá)(P0.01)。GRP94低表達(dá)在ERS下促進(jìn)HSC凋亡,顯著降低HSC泛素蛋白及IGF-1表達(dá)(P0.05)。試驗(yàn)表明,抑制GRP94表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞損傷,降低IGF-1表達(dá)。試驗(yàn)四仔豬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激模型的構(gòu)建及細(xì)胞損傷、泛素化檢測(cè)試驗(yàn)選取21頭35日齡、體重9.34±0.3 kg的杜長(zhǎng)大仔公豬,隨機(jī)分成三組,分別腹腔注射:(1)對(duì)照組(DMSO);(2)TM-低劑量(Low dosage,LD;0.1 mg/kg);(3)TM-高劑量(High dosage,HD;0.3 mg/kg)。48 h后屠宰。結(jié)果發(fā)現(xiàn):與對(duì)照組比,LD和HD組肝臟ERS相關(guān)蛋白和基因極顯著升高(P0.01),血漿炎癥因子和補(bǔ)體因子均顯著升高(P0.05),對(duì)肝細(xì)胞凋亡率及凋亡相關(guān)基因蛋白表達(dá)未有顯著性影響。此外,LD組肝臟泛素蛋白表達(dá)顯著上調(diào)(P=0.04),泛素化相關(guān)基因表達(dá)也顯著升高(P0.05)。結(jié)果表明,兩種劑量TM均可成功誘導(dǎo)仔豬肝臟ERS,且HD組ERS更為顯著。試驗(yàn)五內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激下豬肝臟蛋白組學(xué)分析及GRP94與IGF-1關(guān)系探索試驗(yàn)利用iTRAQ技術(shù)分析高劑量TM處理引起的ERS對(duì)仔豬肝臟差異表達(dá)蛋白的影響。試驗(yàn)共篩選出311個(gè)差異表達(dá)蛋白。通過(guò)生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)差異蛋白主要參與炎癥反應(yīng)和免疫系統(tǒng)調(diào)控,富集于代謝、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白、補(bǔ)體凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)等信號(hào)通路。GRP94和IGF-1在ERS下表達(dá)均顯著升高(P0.05),通過(guò)String network分析發(fā)現(xiàn)GRP94通過(guò)PDIA3與IGF-1發(fā)生相互作用。綜上,體內(nèi)外應(yīng)激下,IGF-1隨GRP94變化發(fā)生正向變化。 【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S858.28

【圖文】：

業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第一章。適度的 UPR 可有效地保護(hù)細(xì)胞，但如果持續(xù)的 ERS 造成未折疊蛋白大量累積，超應(yīng)的范圍，便會(huì)觸發(fā)細(xì)胞凋亡(McGuckin et al., 2010)。近期研究提示，UPR 三條信度的激活可能是導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵性因素(Tabas and Ron, 2011; Song et al., 201516; Doultsinos et al., 2017)。在 ERS 長(zhǎng)期存在的狀況下，IRE1、ATF6 兩條通路的活性減弱，而 PERK 信號(hào)通路則可持續(xù)激活，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡(Lin et al., 2007; Rozped。RS 條件下，UPR 三條信號(hào)通路之間彼此相互影響(朱旭, 2014)。IRE1 通過(guò)其核酸內(nèi)P1，是促進(jìn)應(yīng)激細(xì)胞存活的保護(hù)機(jī)制之一(Liu et al., 2015)。ATF6參與調(diào)控IRE1通路中，并與其形成異構(gòu)體，進(jìn)而加快非折疊或錯(cuò)誤折疊蛋白的降解，而未剪切的 XBP1的 ATF6 被降解(Yoshida et al., 2001)。此外，IRE1 通路及 ATF6 通路也受到 PERK 的 通過(guò)調(diào)控 miR-424(322)-503 反饋激活 IRE1 和 ATF6(Gupta et al., 2015)。此外，ATF6運(yùn)也受到 PERK 的影響(Yamamoto et al., 2007)。

科學(xué)院博士學(xué)位論文 第一程：1.將多個(gè)泛素分子共價(jià)修飾到錯(cuò)誤折疊蛋白上；2.蛋白酶系就標(biāo)記的蛋白其中泛素共價(jià)修飾底物蛋白的過(guò)程稱為細(xì)胞的泛素化，是該過(guò)程中最為關(guān)鍵的一Ubiquitination，Ub）是將 8.6KD 大小的泛素與靶蛋白連接。泛素化修飾（Ubiqation，UM）主要分為兩種，一種是與賴氨酸殘基相連，形成多聚泛素鏈，另一末端的蛋氨酸形成線性多聚泛素鏈。泛素化修飾過(guò)程是由三種限速酶催化的級(jí)聯(lián)素活化酶、E2 泛素結(jié)合酶和 E3 泛素連接酶（見(jiàn)圖 1.2）。有研究發(fā)現(xiàn)，增強(qiáng) ERS 下的錯(cuò)誤折疊蛋白，可以顯著降低 ERS 誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡 (Cybulsky, 2012)。此胞中增強(qiáng)泛素連接酶的活性，可減少細(xì)胞遭受的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(王花枝 et al., 201細(xì)胞通過(guò)將 Bcl-xL 泛素化修飾促使其降解，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡(Wu et al., 2018過(guò)將部分關(guān)鍵蛋白泛素化影響后續(xù)的代謝等功能，研究發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞在 ERS 下可以調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝(劉佳, 2015)。另有文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞處于強(qiáng)烈的 ERS 下導(dǎo)致細(xì)胞 激活，是由于 E3 連接酶 CHIP 泛素化激活 IRE1，，形成 IRE1/TRAF2/ASK1 復(fù)胞凋亡(施偉梅 et al., 2018)。

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10 李仲秋,姚興盛,王艷平;檢疫中所見(jiàn)豬肝臟的病變[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);1999年12期

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3 叢日華;品種和母豬日糧蛋白水平對(duì)仔豬肝臟膽固醇代謝的影響及其機(jī)制[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

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本文編號(hào)：2712136