【摘要】：禽心包積液-肝炎綜合征(Hydropericardium hepatitis syndrome,HHS)是由血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype-4,FAdV-4)引起的禽高度接觸性傳染病。該病1987年首次在巴基斯坦安哥拉地區(qū)爆發(fā),因此又稱為禽“安卡拉病”,目前該病在匈牙利、印度、美國、巴西、波蘭等多國均曾發(fā)生。FAdV-4感染能夠引發(fā)機(jī)體免疫抑制,導(dǎo)致其他疾病繼發(fā)感染性增強(qiáng)。家禽感染后,以心包積液和肝臟壞死為主要病理變化,但是目前關(guān)于FAdV-4對禽類肝組織氧化損傷的影響尚不明確。本試驗(yàn)將探討FAdV-4對SPF雞胚肝組織造成的氧化損傷情況。本研究利用實(shí)驗(yàn)室保存的FAdV-4撫順株,接種11日齡SPF雞胚尿囊腔,感染7d后剖檢,觀察其損傷情況,同時(shí)采取雞胚肝組織。一部肝組織用10%福爾馬林固定,制作石蠟切片,HE染色后進(jìn)行組織病理學(xué)觀察;另一部分肝組織,用于肝組織氧化損傷研究:一是肝組織氧化損傷相關(guān)指標(biāo):利用試劑盒檢測雞胚肝臟中丙二醛(MDA)含量、總超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活力;二是探討肝組織氧化損傷Nrf2/HO-1通路:運(yùn)用熒光定量PCR方法檢測Nrf2、HO-1的mRNA水平;采用蛋白免疫印跡技術(shù)判斷肝細(xì)胞中細(xì)胞漿、細(xì)胞核內(nèi)Nrf2蛋白表達(dá)情況,從而探討FAdV-4對SPF雞胚肝臟氧化損傷機(jī)理。結(jié)果:雞胚感染FAdV-4后可見雞胚發(fā)育遲緩,剖檢可見肝臟呈現(xiàn)黃綠色,表面有出血斑點(diǎn)。組織病理學(xué)結(jié)果顯示,感染雞胚肝細(xì)胞發(fā)生嚴(yán)重的水泡變性,細(xì)胞核碎裂、溶解,中央靜脈和竇狀隙擴(kuò)張,充滿大量紅細(xì)胞。與對照組相比,試驗(yàn)組MDA含量極顯著升高(p0.01),SOD活力極顯著下降(p0.01),說明FAdV-4能夠破壞雞胚肝臟氧化還原穩(wěn)態(tài)。細(xì)胞漿中Nrf2蛋白表達(dá)量顯著下降(p0.05),細(xì)胞核中Nrf2蛋白表達(dá)量顯著升高(p0.05),試驗(yàn)組Nrf2及HO-1 mRNA表達(dá)量極顯著下降(p0.01),該結(jié)果表明FAdV-4能夠激活Nrf2,發(fā)生了核轉(zhuǎn)位,但抑制了肝細(xì)胞中Nrf2/HO-1通路關(guān)鍵因子Nrf2和HO-1的表達(dá)。綜上所述,SPF雞胚感染撫順株FAdV-4后,能夠引起明顯眼觀病理變化和組織病理學(xué)損傷,并誘發(fā)肝臟發(fā)生氧化損傷反應(yīng)。Nrf2/HO-1通路中關(guān)鍵因子的表達(dá)情況表明,FAdV-4可能通過下調(diào)Nrf2/HO-1通路,從而誘導(dǎo)SPF雞胚肝臟發(fā)生氧化損傷。本試驗(yàn)結(jié)果為揭示FAdV-4感染SPF雞胚肝組織氧化損傷的機(jī)制提供了理論依據(jù),同時(shí)為有效防治心包積液-肝炎綜合征、針對Nrf2/HO-1通路中關(guān)鍵分子藥物的研發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
【圖文】：

圖 1 尿囊液 PCR 擴(kuò)增結(jié)果Fig.1 The PCR amplification result of allantoic flui注: M:D5000 標(biāo)記物 1:試驗(yàn)組尿囊液Note: M:D5000 marker 1. Test group allantoic fluid織學(xué)變化試驗(yàn)結(jié)果長實(shí)驗(yàn)的結(jié)果為陰性，表明撫順株 FAdV-4 在結(jié)果株 FAdV-4 后 7d 經(jīng) 4oC 冷藏 5h 后進(jìn)行剖檢。，左側(cè)試驗(yàn)組雞胚蜷縮，個(gè)體小，發(fā)育受阻。，肝臟呈嚴(yán)重黃綠色病變，肝臟表面有細(xì)小出心包積液。

（3）組織病理學(xué)結(jié)果圖 2 試驗(yàn)組雞胚與對照組雞胚對比Fig.2 Comparison of chicken embryos betweenexperimental group and control group圖 3 試驗(yàn)組雞胚肝臟與對照組雞胚肝臟對比Fig.3 Comparison of chicken embryoliver between experimental group and controlgroup圖 4 對照組肝臟（HE 染色，200×）Fig.4 The normal hepatocyte(HE stain，200x)圖 5 試驗(yàn)組肝臟組織學(xué)損傷(HE 染色，200×)1. 竇狀隙淤血 2.水泡變性 3.中央靜脈淤血Fig.5 Hepatocyte histological damage in theexperimental group(HE stain，，200x)1.Sinusoidal congestion 2. Vacuolar degeneration3. Central venous
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S858.31

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本文編號(hào)：2711008