【摘要】：H9N2亞型禽流感病毒是一種低致病性禽流感,這類病毒一般不會(huì)導(dǎo)致禽類發(fā)病或死亡,但H9N2亞型禽流感病毒可以使患病家禽生產(chǎn)性能降低,嚴(yán)重時(shí)H9N2亞型禽流感病毒可以混合其他病毒或細(xì)菌感染,造成禽類死亡。H9N2亞型禽流感病毒會(huì)和H5、H7等其他亞型禽流感毒株之間發(fā)生基因重配,是新發(fā)流感病毒重要的基因供體病毒,H9N2亞型禽流感染人類的事件也頻繁發(fā)生,所以對(duì)于H9N2亞型禽流感病毒的防控顯得尤為重要。由于各類亞型的流感病毒所導(dǎo)致疾病的治療和防控策略不同,建立快速的分型檢測方法,對(duì)于流感的早期診斷和防控有重要意義。本論文首先建立H5、H7和H9亞型流感病毒的分型鑒定PCR方法,利用該方法檢測在活禽市場采集到的禽類咽拭子、肛拭子樣品,鑒定出11份H9N2亞型禽流感病毒陽性樣品。對(duì)11份陽性樣品進(jìn)行病毒純化、分離、增殖,將獲得的H9N2病毒命名為A/Chicken/Liaoning/01/2017(H9N2)-A/Chic ken/Liaoning/11/2017(H9N2)。比對(duì)11株病毒的HA和NA序列,發(fā)現(xiàn)2株病毒A/C hicken/Liaoning/05/2017(H9N2)和A/Chicken/Liaoning/06/2017(H9N2)的HA蛋白在100、221、250、315位點(diǎn)處與其他9株病毒不同。利用H9N2亞型禽流感病毒標(biāo)準(zhǔn)血清分析11株病毒的抗原性,發(fā)現(xiàn)A/Chicken/Liaoning/05/2017(H9N2)和A/Chicken/Liao ning/06/2017(H9N2)2株病毒的抗原性發(fā)生較大變異,與標(biāo)準(zhǔn)血清結(jié)合的血凝抑制價(jià)低,推測HA100、221、250、315這四個(gè)位點(diǎn)影響了病毒的抗原性。將這2株毒株感染SPF雞,制備高免血清,經(jīng)血凝抑制實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),高免血清與其它9株病毒結(jié)合良好,因此這兩株H9N2病毒可能成為遼寧省H9N2亞型禽流感病毒的后備疫苗株。
【圖文】：

第二章 H5、H7、H9 亞型禽流感病毒分型檢測方法建立及流行病學(xué)樣品檢測。5）向制備管中加入 600 μL Buffer GW，12000 g離心 1min，將 2 mL EP中重復(fù)加入 600 μL Buffer GW，靜置 2 min。6）取一干凈的 1.5 mLEP管，將制備管轉(zhuǎn)移其中，往制備管中間加入 20水，靜置 5 min，12000 g離心 2min收集DNA，-20℃保存即可。7）瓊脂糖凝膠電泳檢測回收結(jié)果。結(jié)果分型引物檢測電泳圖H5、H7 和H9 的標(biāo)準(zhǔn)陽性質(zhì)粒做PCR，產(chǎn)物經(jīng)過電泳檢測，結(jié)果如下圖 分別為 420 bp、501 bp、488 bp，，目的片段與預(yù)期大小一致，且條帶單一，證明H5、H7 和H9 這 3 對(duì)分型引物是可靠的。

圖 2-2 H5 分型引物檢測 11 株分離 H9N2 樣品電泳圖ig.2-2 Electrophoresis of 11 isolated H9N2 samples was detected by H5 typing prim注：M:2000 DNA Marker1：陽性對(duì)照2-11:11 株分離 H9N2 樣品Note: M：2000 DNA Marker1：Positive control2-11:H9N2 samples isolated from 11 strains
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S852.65

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8 劉秀梵;;加強(qiáng)監(jiān)測,從源頭控制和根除家禽流感病毒[J];北方牧業(yè);2018年15期

9 孫燕;李治;;禽流感病毒 跨越物種傳播的研究[J];中學(xué)生物教學(xué);2005年12期

10 王路;惠永華;趙建東;衛(wèi)陸梅;王偉杰;燕素萍;;不同禽流感病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR試劑盒的比較[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2016年24期

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7 王志宇;張議文;劉桂林;;禽流感病毒的分子生物學(xué)研究進(jìn)展[A];全國動(dòng)物生理生化第十一次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2010年

8 王志宇;劉桂林;張議文;梁仲;張珊珊;衛(wèi)吉蕓;;禽流感病毒的分子診斷技術(shù)[A];全國動(dòng)物生理生化第十二次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2012年

9 劉麗玲;王秀榮;陳化蘭;;real-time RT-PCR檢測禽流感病毒的初步探討[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第六屆全國會(huì)員代表大會(huì)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2005年

10 李艷華;佟恒敏;于康震;;抗禽流感病毒中草藥的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2003年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2003年

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