【摘要】：精液冷凍保存能延長精子的保存時間,但用凍精人工授精導致分娩率低且產(chǎn)仔數(shù)減少,這主要是由于低溫導致的低溫損傷。豬精液的保存方法分為液態(tài)(17℃)保存、超低溫保存(-196℃)保存2種。液態(tài)形式做短期保存,冷凍形式做長期保存。豬精子對冷刺激,特別從體溫急劇降溫至10-0℃，，會使精子發(fā)生不可逆的冷休克現(xiàn)象。因此,在稀釋液中須添加抗冷凍劑,提高精子抗冷能力。本試驗的主要目的是檢測冷凍保護劑甘露醇對豬精液液態(tài)和超低溫保存后精子質(zhì)膜的完整性、頂體膜的完整性、精子內(nèi)凋亡基因的表達以及精-卵結(jié)合能力的影響。試驗結(jié)果如下:1、在液態(tài)保存過程中,在稀釋液中添加甘露醇(0,0.3,0.6和0.9 mg/ml)保存5d后,精子的活力、質(zhì)膜完整率和頂體膜的完整率有不同程度的減弱,但添加0.3和0.6mg/ml的處理組與Control組相比有顯著的提高(P0.05)。檢測精子內(nèi)凋亡基因Caspase-3、Caspase-8及TNF-α的表達量與精液品質(zhì)檢測結(jié)果相同,均有不同程度的改善(P0.05),因此,在常溫保存過程中添加甘露醇可以明顯改善保存后精液的質(zhì)量,提高受精率。2、在冷凍保存過程中,溫度急速下降,對精子的質(zhì)量造成的損傷相對較大,在冷凍保護劑中添加1mg/ml、2mg/ml(39.31%、43.89%)甘露醇的處理組精液冷凍解凍后,精子的活力與對照組(39.89%)相比有顯著改善(P0.05),同時,1mg/ml處理組精子的質(zhì)膜完整率為43.10%,2mg/ml處理組的紙膜完整性為46.08%,均顯著高于對照組(42.23%),且有顯著差異(P0.05),精子頂體膜完整性試驗結(jié)果與質(zhì)膜完整率結(jié)果相同,處理組精子的品質(zhì)高于對照組。此外,對解凍后精子內(nèi)凋亡基因的表達量進行檢測,實驗結(jié)果表明添加2mg/ml處理組的精子內(nèi)凋亡基因表達量最少,說明精子凋亡程度較其他組相比較低,綜上所述,添加甘露醇在冷凍過程中會保護精子免受打擊損傷,提高精子質(zhì)量。3、甘露醇對精子的保存具有保護作用,在常溫保存過程中的最佳濃度為0.6mg/ml,在冷凍保存過程中最佳濃度為2mg/ml。
【圖文】：

圖２－１甘露醇對液體保存五天后凋亡基因ｍＲＮＡ表達量的影響逡逑表２－５甘露醇對液體保存５天后基因的表達量

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【學位授予單位】：延邊大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S828

【參考文獻】

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1 郝向陽,況建國,鄒安琪;甘露醇臨床應(yīng)用進展[J];江西醫(yī)藥;2003年02期

本文編號：2690102