【摘要】：雞毒支原體(Mycoplasma gallisepticum,MG)可以引起雞的慢性呼吸道疾病(Chronic respiratory disease,CRD),臨床主要表現(xiàn)為咳嗽、流漿液性鼻液、呼吸困難、濕性Up音,剖檢可見到鼻道、氣管卡他性滲出物和嚴重的氣囊炎。該病病程長,發(fā)展緩慢,若無其他病原協(xié)同感染時,其死亡率較低,與新城疫病毒、傳染性支氣管炎病毒和大腸桿菌等病原交叉感染時可引起較高的發(fā)病率和死亡率,是目前困擾我國規(guī)�；u只養(yǎng)殖的一大難題。閩北地區(qū)是福建省最大的白羽肉雞養(yǎng)殖地區(qū),但該地區(qū)尚未見MG感染病原學調(diào)查的相關(guān)報道,給該地區(qū)有效防制MG感染造成極大的盲目性。因此,本研究對閩北肉雞養(yǎng)殖區(qū)開展MG感染調(diào)查,同時進行流行菌株的分離鑒定,通過分離菌株的藥物敏感性試驗和pvpA基因序列的測序分析比較,為其防制工作提供參考依據(jù)。方法:本實驗首先采用Real-time PCR對閩北地區(qū)白羽肉雞MG感染情況開展調(diào)查;其次,選擇適宜的支原體培養(yǎng)基從臨床疑似CDR病雞喉氣管黏液棉拭子中分離培養(yǎng)及鑒定MG,并對臨床分離株進行序列測定與比較分析;最后,選擇臨床常用的7種抗菌藥物進行最低抑菌濃度試驗(MIC)篩選臨床MG分離株敏感的藥物。結(jié)果如下:(1)比較Real-time PCR檢測喉氣管拭子及肺臟組織樣品的MG陽性率,結(jié)果顯示喉氣管拭子和肺臟組織樣品的陽性檢出率分別為28.12%和3.12%,表明喉氣管拭子樣品更適宜MG Real-time PCR檢測。(2)自2017年3月至2017年11月期間,從閩北地區(qū)對不同免疫背景及不同用途的90個白羽肉雞養(yǎng)殖場采集1800份喉氣管拭子樣品,采用Real-time PCR進行MG檢測,結(jié)果顯示:進行過MG免疫的祖代場和父母代場種雞場均未受到MG感染,未進行MG疫苗免疫的商品代白羽肉雞場的MG感染陽性場的比率為33.33%,樣本陽性率為13.17%,其中陽性場的陽性樣本率最高為100%,最低為5%,平均值為39%。(3)從臨床樣本中成功分離培養(yǎng)了 2株支原體,經(jīng)鑒定為MG,命名為MX分離株和HY分離株。(4)通過pvpA基因部分核苷酸序列比對結(jié)果顯示,MX和HY分離株的該段序列完全一致,與F株的核苷酸序列同源性為96.7%,有10處堿基不一致并且出現(xiàn)一處缺失3個堿基,推測的氨基酸序列同源性為92.2%,有10個氨基酸差異,其中缺失一個蘇氨酸;與R株的核苷酸序列同源性為98.9%,推測的氨基酸序列同源性為98.0%,缺失DR1、DR2之間77個氨基酸序列;與CG5株的核苷酸序列同源性為90.9%,推測的氨基酸序列同源性為86.3%。遺傳進化分析表明MX分離株和HY分離株與R株親緣關(guān)系最近。(5)動物回歸試驗結(jié)果顯示,接種MX分離株液體培養(yǎng)液和HY分離株液體培養(yǎng)液的兩組雞只均出現(xiàn)明顯的呼吸道癥狀,氣囊均不同程度地表現(xiàn)出混濁、增厚和產(chǎn)生泡沫的病理變化;接種F疫苗株的組和空白對照組的雞只生長發(fā)育良好,均未表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀。(6)根據(jù)體外藥物敏感性試驗結(jié)果顯示,泰妙菌素均對MX分離株和HY分離株的抑菌效果最好,其次為泰樂菌素和氟苯尼考。結(jié)論:閩北地區(qū)商品代白羽肉雞MG感染的情況較為嚴重;從此地區(qū)分離的MX和HY分離株均具有一定的致病性;泰妙菌素、泰樂菌素和氟苯尼考為此地區(qū)防治CRD的首選藥物。
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３．２臨床分離株的實時熒光ＰＣＲ結(jié)果逡逑將兩株純化后的分離株進行增菌培養(yǎng)，后對其進行ＤＮＡ提取并進行ＭＧ和逡逑ＭＳ邋Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ邋ＰＣＲ檢測，ＭＧ熒光檢測擴增圖譜顯示ＭＧ標準陽性樣本、ＭＸ分逡逑離株和ＨＹ分離株在ＦＡＭ通道擴增曲線有明顯對數(shù)增長，ＭＧ陰性對照樣本在逡逑ＦＡＭ通道擴增曲線無對數(shù)增長（圖３－５），并結(jié)合Ｃｔ值（表３－６）判斷ＭＸ分離逡逑株和ＨＹ分離株均為ＭＧ陽性；ＭＳ熒光檢測擴增圖譜顯示ＭＳ標準陽性樣本在逡逑ＦＡＭ通道擴X椙哂忻饗遠允齔�，ＭＳ阴羞h哉昭盡ⅲ停胤擲脛旰停齲俜擲脲義現(xiàn)暝冢疲粒屯ǖ覽┰鑾呶薅允齔ぃㄍ跡常叮⒔岷希茫糝擔ū恚常叮┡卸希停劐義戲擲脛旰停齲俜擲脛昃停右跣�。蛹喫判定ＭＸ窋S脛旰停齲俜擲脛昃停恰ｅ義希玻跺義，

本文編號：2685458