【摘要】：雞毒支原體(Mycoplasma gallisepticum,MG)可以引起雞的慢性呼吸道疾病(Chronic respiratory disease,CRD),臨床主要表現(xiàn)為咳嗽、流漿液性鼻液、呼吸困難、濕性Up音,剖檢可見到鼻道、氣管卡他性滲出物和嚴(yán)重的氣囊炎。該病病程長(zhǎng),發(fā)展緩慢,若無(wú)其他病原協(xié)同感染時(shí),其死亡率較低,與新城疫病毒、傳染性支氣管炎病毒和大腸桿菌等病原交叉感染時(shí)可引起較高的發(fā)病率和死亡率,是目前困擾我國(guó)規(guī)模化雞只養(yǎng)殖的一大難題。閩北地區(qū)是福建省最大的白羽肉雞養(yǎng)殖地區(qū),但該地區(qū)尚未見MG感染病原學(xué)調(diào)查的相關(guān)報(bào)道,給該地區(qū)有效防制MG感染造成極大的盲目性。因此,本研究對(duì)閩北肉雞養(yǎng)殖區(qū)開展MG感染調(diào)查,同時(shí)進(jìn)行流行菌株的分離鑒定,通過(guò)分離菌株的藥物敏感性試驗(yàn)和pvpA基因序列的測(cè)序分析比較,為其防制工作提供參考依據(jù)。方法:本實(shí)驗(yàn)首先采用Real-time PCR對(duì)閩北地區(qū)白羽肉雞MG感染情況開展調(diào)查;其次,選擇適宜的支原體培養(yǎng)基從臨床疑似CDR病雞喉氣管黏液棉拭子中分離培養(yǎng)及鑒定MG,并對(duì)臨床分離株進(jìn)行序列測(cè)定與比較分析;最后,選擇臨床常用的7種抗菌藥物進(jìn)行最低抑菌濃度試驗(yàn)(MIC)篩選臨床MG分離株敏感的藥物。結(jié)果如下:(1)比較Real-time PCR檢測(cè)喉氣管拭子及肺臟組織樣品的MG陽(yáng)性率,結(jié)果顯示喉氣管拭子和肺臟組織樣品的陽(yáng)性檢出率分別為28.12%和3.12%,表明喉氣管拭子樣品更適宜MG Real-time PCR檢測(cè)。(2)自2017年3月至2017年11月期間,從閩北地區(qū)對(duì)不同免疫背景及不同用途的90個(gè)白羽肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)采集1800份喉氣管拭子樣品,采用Real-time PCR進(jìn)行MG檢測(cè),結(jié)果顯示:進(jìn)行過(guò)MG免疫的祖代場(chǎng)和父母代場(chǎng)種雞場(chǎng)均未受到MG感染,未進(jìn)行MG疫苗免疫的商品代白羽肉雞場(chǎng)的MG感染陽(yáng)性場(chǎng)的比率為33.33%,樣本陽(yáng)性率為13.17%,其中陽(yáng)性場(chǎng)的陽(yáng)性樣本率最高為100%,最低為5%,平均值為39%。(3)從臨床樣本中成功分離培養(yǎng)了 2株支原體,經(jīng)鑒定為MG,命名為MX分離株和HY分離株。(4)通過(guò)pvpA基因部分核苷酸序列比對(duì)結(jié)果顯示,MX和HY分離株的該段序列完全一致,與F株的核苷酸序列同源性為96.7%,有10處堿基不一致并且出現(xiàn)一處缺失3個(gè)堿基,推測(cè)的氨基酸序列同源性為92.2%,有10個(gè)氨基酸差異,其中缺失一個(gè)蘇氨酸;與R株的核苷酸序列同源性為98.9%,推測(cè)的氨基酸序列同源性為98.0%,缺失DR1、DR2之間77個(gè)氨基酸序列;與CG5株的核苷酸序列同源性為90.9%,推測(cè)的氨基酸序列同源性為86.3%。遺傳進(jìn)化分析表明MX分離株和HY分離株與R株親緣關(guān)系最近。(5)動(dòng)物回歸試驗(yàn)結(jié)果顯示,接種MX分離株液體培養(yǎng)液和HY分離株液體培養(yǎng)液的兩組雞只均出現(xiàn)明顯的呼吸道癥狀,氣囊均不同程度地表現(xiàn)出混濁、增厚和產(chǎn)生泡沫的病理變化;接種F疫苗株的組和空白對(duì)照組的雞只生長(zhǎng)發(fā)育良好,均未表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀。(6)根據(jù)體外藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果顯示,泰妙菌素均對(duì)MX分離株和HY分離株的抑菌效果最好,其次為泰樂(lè)菌素和氟苯尼考。結(jié)論:閩北地區(qū)商品代白羽肉雞MG感染的情況較為嚴(yán)重;從此地區(qū)分離的MX和HY分離株均具有一定的致病性;泰妙菌素、泰樂(lè)菌素和氟苯尼考為此地區(qū)防治CRD的首選藥物。
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３．２臨床分離株的實(shí)時(shí)熒光ＰＣＲ結(jié)果逡逑將兩株純化后的分離株進(jìn)行增菌培養(yǎng)，后對(duì)其進(jìn)行ＤＮＡ提取并進(jìn)行ＭＧ和逡逑ＭＳ邋Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ邋ＰＣＲ檢測(cè)，ＭＧ熒光檢測(cè)擴(kuò)增圖譜顯示ＭＧ標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性樣本、ＭＸ分逡逑離株和ＨＹ分離株在ＦＡＭ通道擴(kuò)增曲線有明顯對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，ＭＧ陰性對(duì)照樣本在逡逑ＦＡＭ通道擴(kuò)增曲線無(wú)對(duì)數(shù)增長(zhǎng)（圖３－５），并結(jié)合Ｃｔ值（表３－６）判斷ＭＸ分離逡逑株和ＨＹ分離株均為ＭＧ陽(yáng)性；ＭＳ熒光檢測(cè)擴(kuò)增圖譜顯示ＭＳ標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性樣本在逡逑ＦＡＭ通道擴(kuò)X椙哂忻饗遠(yuǎn)允齔�，ＭＳ阴羞h(yuǎn)哉昭盡ⅲ停胤擲脛旰停齲俜擲脲義現(xiàn)暝冢疲粒屯ǖ覽┰鑾呶薅允齔ぃㄍ跡常叮⒔岷希茫糝擔(dān)ū恚常叮┡卸希停劐義戲擲脛旰停齲俜擲脛昃停右跣�。蛹喫判定ＭＸ窋S脛旰停齲俜擲脛昃停�。辶x希玻跺義，

本文編號(hào)：2685458