【摘要】：乳鐵蛋白是一種天然免疫蛋白,普遍存在于奶牛乳汁等外分泌液中。奶牛不僅整個生產周期都受到乳腺炎和子宮內膜炎等感染性炎癥的威脅;同時在奶牛特殊的過渡時期——圍產期,機體經歷能量負平衡,發(fā)生代謝應激和全身性的持續(xù)性亞急性炎癥刺激,給奶牛的健康和生產性能帶來巨大影響。本文通過研究乳鐵蛋白對LPS誘導的奶牛肝原代細胞炎性反應的抑制作用及其可能的分子機制,為乳鐵蛋白的臨床抗炎應用提供理論依據(jù)和技術支持。本文以改良的膠原酶兩步灌流法分離得到的奶牛原代肝細胞為實驗材料。通過MTT法檢測LPS對奶牛原代肝細胞活力的影響,利用熒光定量PCR技術檢測LPS誘導細胞后特征炎性因子基因的表達,篩選了誘導奶牛原代肝細胞炎癥損傷模型的條件;在炎癥損傷模型的基礎上,加入乳鐵蛋白共培養(yǎng)。利用熒光定量PCR及Western Blot技術檢測了對相關炎癥信號通路中關鍵蛋白和炎性因子基因的表達。研究結果如下:1000 ng/mL LPS作用于奶牛原代肝細胞24 h,對細胞活性沒有顯著影響,但可顯著提高細胞炎性因子TNF-α與IL-1β基因表達。選擇1000 ng/mL LPS刺激奶牛原代肝細胞24 h,建立LPS誘導奶牛原代肝細胞炎癥反應模型。乳鐵蛋白(1,10,100μg/mL)對促炎性細胞因子的基因表達有抑制作用,對抗炎細胞因子基因表達有刺激增強作用,同時對奶牛原代肝細胞AST與ALT的分泌有抑制作用。乳鐵蛋白(1,10,100μg/mL)對LPS誘導的奶牛原代肝細胞TLR4信號通路上TLR4、CD14、MyD88、TICAM1、TICAM2蛋白分子基因表達有抑制作用。同時,乳鐵蛋白對LPS誘導的奶牛原代肝實質細胞IκBα的降解和NF-κB p65磷酸化有抑制作用。表明其抗炎作用可能的分子機制是通過抑制TLR4信號通路的MyD88依賴通路和MyD88獨立通路(TRIF依賴通路),抑制NF-κB信號通路的激活。
【學位授予單位】：西北農林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S858.23

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 周萍;樊靜;梁椺;;一種簡易小鼠原代肝細胞分離方法[J];成都大學學報(自然科學版);2016年04期

2 楊清皓;唐世剛;;還原型谷胱甘肽及多烯磷脂酰膽堿對成人原代肝細胞培養(yǎng)的增殖影響[J];人人健康;2017年06期

3 楊文蘭;韓春春;王繼文;劉丹丹;萬火福;劉賀賀;潘志雄;;胰島素對鵝原代肝細胞增殖及蛋白合成的影響[J];生物學雜志;2014年02期

4 蔡大偉;侯艷寧;;原代肝細胞培養(yǎng)技術研究現(xiàn)狀及其新藥研發(fā)中的應用[J];解放軍藥學學報;2009年03期

5 劉烈剛,姚平,章錫平,郝麗萍,楊雪鋒,孫秀發(fā);急性乙醇暴露對人原代肝細胞血紅素氧化酶的影響[J];衛(wèi)生研究;2004年05期

6 李陽;張斌斌;彭青;高毅;;體外人原代肝細胞分離與培養(yǎng)及凍存研究[J];現(xiàn)代醫(yī)院;2017年06期

7 楊天燕;賴靜;韋錦斌;;小鼠原代肝細胞的分離與培養(yǎng)[J];內科;2011年05期

8 余瑩;張日華;朱自強;王林濤;;改良的小鼠原代肝細胞分離純化方法[J];南京醫(yī)科大學學報(自然科學版);2008年11期

9 魯鑫焱;蔣惠娣;曾蘇;;黃酮類化合物在原代肝細胞上的代謝和藥物相互作用研究進展[J];藥學學報;2006年12期

10 羅丹;劉華鋼;;原代肝細胞的分離培養(yǎng)及其在藥物研發(fā)中的應用[J];廣西科學;2006年04期

相關會議論文 前10條

1 徐菁;代娜;程國富;胡薛英;張萬坡;谷長勤;;雛鴨原代肝細胞的培養(yǎng)與鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)病理學分會第二十一次學術研討會暨中國病理生理學會動物病理生理專業(yè)委員會第二十次學術研討會論文集[C];2015年

2 張煒;陳文芳;齊浩;劉淼;屈穎;任兆玉;;紫外輻射對小鼠原代肝細胞細胞內鈣離子濃度的影響[A];第六屆全國光生物學學術研討會論文集[C];2004年

3 張丁丁;辛永寧;羅兵;姜曼;劉昊剛;宣世英;;一種易于推廣的分離與培養(yǎng)小鼠原代肝細胞的方法[A];中華醫(yī)學會第十六次全國病毒性肝炎及肝病學術會議論文匯編[C];2013年

4 劉爽;于東;祁振英;趙要武;張碧云;劉烈剛;;槲皮素對大鼠原代肝細胞酒精性氧化損傷的防護作用[A];湖北省、武漢市營養(yǎng)學會第十一屆學術會議論文匯編[C];2007年

5 王鳳飚;李濤;杜智;杜斌;張金卷;;大量幼豬原代肝細胞的分離與培養(yǎng)[A];天津市生物醫(yī)學工程學會2004年年會論文集[C];2005年

6 張麗芳;胡曉;;蛇床子素在大鼠原代肝細胞中代謝的研究[A];中國藥學會應用藥理專業(yè)委員會第三屆學術會議、中國藥理學會制藥工業(yè)專業(yè)委員會第十三屆學術會議暨2008生物醫(yī)藥學術論壇論文匯編[C];2008年

7 莊鵬;江元森;馬會慧;李志剛;麥麗;楊林;姚集魯;;長期培養(yǎng)的大鼠原代肝細胞功能和形態(tài)學觀察[A];中華醫(yī)學會第十二次全國病毒性肝炎及肝病學術會議論文匯編[C];2005年

8 張先杰;王瑩;宋茂民;孫家邦;段鐘平;陳煜;張晶;鄭素軍;;三明治構型大鼠原代肝細胞長期培養(yǎng)及生物學特性的研究[A];第三屆全國重型肝病及人工肝血液凈化學術年會論文集（上冊）[C];2007年

9 洪勝輝;張軍;張蕊;王來娣;邵丹;張宜輝;董飚;段修軍;龔道清;;鵝原代肝細胞的簡易、高純分離及培養(yǎng)[A];安全優(yōu)質的家禽生產——第十五次全國家禽學術討論會論文集[C];2011年

10 沈國林;莊笑梅;譚妍;原梅;李樺;高月;;異鼠李素和阿魏酸在大鼠原代肝細胞的肝攝取性質[A];2013年（第三屆）中國藥物毒理學年會暨藥物非臨床安全性評價研究論壇論文摘要[C];2013年

相關博士學位論文 前10條

1 劉振威;健康成人原代肝細胞體外實驗測定異煙肼和利福平的肝代謝和肝毒性的研究[D];復旦大學;2004年

2 許斌;鴨原代肝細胞對鴨乙型肝炎病毒易感性相關蛋白的研究[D];復旦大學;2006年

3 周龍;丙泊酚對小鼠原代肝細胞胰島素抵抗的影響[D];南方醫(yī)科大學;2014年

4 鄧清華;NEFAs對犢牛原代肝細胞糖脂代謝的調控機制[D];吉林大學;2015年

5 江淵;適宜于HBV感染的新型細胞模型的研究[D];山東大學;2009年

6 馬娜;樹鼯肝細胞永生化方法的建立及ITH6.1細胞系特性分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2016年

7 林羨屏;大鼠肝細胞IL-10及其受體的表達與作用[D];福建醫(yī)科大學;2009年

8 江青東;脂多糖誘導肝損傷時脂代謝相關基因的表達變化[D];西北農林科技大學;2014年

9 杜軒;胰島素作用下FASN基因啟動子區(qū)域組蛋白修飾在NAFLD中的作用及機制探討[D];重慶醫(yī)科大學;2017年

10 黃屹;乙型肝炎病毒在原代肝細胞共培養(yǎng)模型上的增強感染研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

相關碩士學位論文 前10條

1 沈聰;乳鐵蛋白對LPS誘導的奶牛原代肝細胞炎癥反應的抑制作用[D];西北農林科技大學;2019年

2 羅濤;基于3D打印技術構建類肝組織及體內外活性分析[D];浙江省醫(yī)學科學院;2018年

3 張少飛;大鼠原代肝細胞體外三維培養(yǎng)研究[D];甘肅農業(yè)大學;2018年

4 周萍;環(huán)丙沙星對小鼠原代肝細胞自噬的研究[D];成都學院;2017年

5 賁海靜;鴨乙肝病毒感染鴨原代肝細胞差異蛋白質組的研究及DMSO維持鴨原代肝細胞易感性差異膜蛋白組的初步研究[D];復旦大學;2010年

6 彭丹;丹參素在大鼠原代肝細胞中轉運機制的研究[D];南昌大學;2011年

7 萬小瓊;利用草魚原代肝細胞培養(yǎng)研究二惡英毒性效應[D];華中農業(yè)大學;2001年

8 張麗芳;蛇床子素在大鼠原代肝細胞中代謝的研究[D];南昌大學;2008年

9 覃玉燕;成人原代肝細胞的分離、鑒定及其蛋白質合成與P450表達[D];湖南師范大學;2015年

10 薛蘭潔;HCV對樹，

本文編號：2684907