發(fā)布時(shí)間：2020-05-28 07:14

【摘要】：乳鐵蛋白是一種天然免疫蛋白,普遍存在于奶牛乳汁等外分泌液中。奶牛不僅整個(gè)生產(chǎn)周期都受到乳腺炎和子宮內(nèi)膜炎等感染性炎癥的威脅;同時(shí)在奶牛特殊的過(guò)渡時(shí)期——圍產(chǎn)期,機(jī)體經(jīng)歷能量負(fù)平衡,發(fā)生代謝應(yīng)激和全身性的持續(xù)性亞急性炎癥刺激,給奶牛的健康和生產(chǎn)性能帶來(lái)巨大影響。本文通過(guò)研究乳鐵蛋白對(duì)LPS誘導(dǎo)的奶牛肝原代細(xì)胞炎性反應(yīng)的抑制作用及其可能的分子機(jī)制,為乳鐵蛋白的臨床抗炎應(yīng)用提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。本文以改良的膠原酶兩步灌流法分離得到的奶牛原代肝細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料。通過(guò)MTT法檢測(cè)LPS對(duì)奶牛原代肝細(xì)胞活力的影響,利用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)LPS誘導(dǎo)細(xì)胞后特征炎性因子基因的表達(dá),篩選了誘導(dǎo)奶牛原代肝細(xì)胞炎癥損傷模型的條件;在炎癥損傷模型的基礎(chǔ)上,加入乳鐵蛋白共培養(yǎng)。利用熒光定量PCR及Western Blot技術(shù)檢測(cè)了對(duì)相關(guān)炎癥信號(hào)通路中關(guān)鍵蛋白和炎性因子基因的表達(dá)。研究結(jié)果如下:1000 ng/mL LPS作用于奶牛原代肝細(xì)胞24 h,對(duì)細(xì)胞活性沒(méi)有顯著影響,但可顯著提高細(xì)胞炎性因子TNF-α與IL-1β基因表達(dá)。選擇1000 ng/mL LPS刺激奶牛原代肝細(xì)胞24 h,建立LPS誘導(dǎo)奶牛原代肝細(xì)胞炎癥反應(yīng)模型。乳鐵蛋白(1,10,100μg/mL)對(duì)促炎性細(xì)胞因子的基因表達(dá)有抑制作用,對(duì)抗炎細(xì)胞因子基因表達(dá)有刺激增強(qiáng)作用,同時(shí)對(duì)奶牛原代肝細(xì)胞AST與ALT的分泌有抑制作用。乳鐵蛋白(1,10,100μg/mL)對(duì)LPS誘導(dǎo)的奶牛原代肝細(xì)胞TLR4信號(hào)通路上TLR4、CD14、MyD88、TICAM1、TICAM2蛋白分子基因表達(dá)有抑制作用。同時(shí),乳鐵蛋白對(duì)LPS誘導(dǎo)的奶牛原代肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞IκBα的降解和NF-κB p65磷酸化有抑制作用。表明其抗炎作用可能的分子機(jī)制是通過(guò)抑制TLR4信號(hào)通路的MyD88依賴通路和MyD88獨(dú)立通路(TRIF依賴通路),抑制NF-κB信號(hào)通路的激活。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S858.23

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