【摘要】：腸道病毒(Enterovirus,EV)屬于小RNA病毒科(Picornaviridae)腸道病毒屬的成員,是引起人類(lèi)與動(dòng)物臨床上以消化道、呼吸道、神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂為特征疫病的病原體。腸道病毒屬共含有12個(gè)腸道病毒種(A-L)及3個(gè)鼻病毒種(A-C)。其中EV-E和EV-F的易感動(dòng)物主要是牛,EV-G的易感動(dòng)物主要是豬。腸道病毒感染動(dòng)物后,引起機(jī)體呈現(xiàn)出消化道和呼吸道病變與癥狀,對(duì)畜牧養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展造成嚴(yán)重的危害。2012年本實(shí)驗(yàn)室從吉林省某發(fā)病牛群中分離出BEV HY12病毒株,首次確認(rèn)國(guó)內(nèi)牛群存在E種腸道病毒感染。2014年本實(shí)驗(yàn)室又從吉林省某嚴(yán)重腹瀉山羊群中分離出G種腸道病毒CEV-JL14,目前被收錄為G種腸道病毒的新血清型EV-G20的代表種。牛腸道病毒(Bovine enterovirus,BEV)和山羊腸道病毒(Caprine enterovirus,CEV)均為國(guó)內(nèi)近年來(lái)新發(fā)傳染病,目前有關(guān)它們感染的相關(guān)報(bào)道雖然逐年增加,但有關(guān)病毒的遺傳變異等相關(guān)研究缺乏。因此,研究吉林省牛腸道病毒的分子遺傳變異與進(jìn)化,比較牛、羊兩種腸道病毒之間抗原性的差異,不僅為臨床上腸道病毒感染的防治提供理論依據(jù),而且對(duì)于闡明腸道病毒的遺傳變異規(guī)律等研究打下基礎(chǔ)。本研究應(yīng)用雙抗體夾心ELISA方法,檢測(cè)了2012年至2016年采自吉林省不同地區(qū)的326份疑似牛腸道病毒感染的糞便樣品。結(jié)果發(fā)現(xiàn),吉林省不同地區(qū)的牛群均存在不同程度的腸道病毒感染,其感染率為10.5%-20.4%。應(yīng)用病毒分離培養(yǎng)技術(shù)將檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的糞便樣品,接種Vero細(xì)胞,共獲得8株牛腸道病毒毒株。以RT-PCR方法,擴(kuò)增BEV 5'UTR基因組序列,通過(guò)生物信息學(xué)軟件比對(duì)分析擴(kuò)增出的21株毒株基因序列與GenBank現(xiàn)有的BEV代表毒株的相應(yīng)核苷酸序列,發(fā)現(xiàn)分離出的BEV毒株與BEV HY12的核苷酸同源性為79.3%-98.2%,存在一定的遺傳分子差異。遺傳進(jìn)化樹(shù)分析發(fā)現(xiàn),分離出的BEV毒株均屬于E種腸道病毒。此外,基于制備的抗BEV HY12(E種)腸道病毒和抗羊腸道病毒CEV JL14的高免血清,應(yīng)用交叉中和試驗(yàn)和交叉免疫熒光試驗(yàn)方法,首次對(duì)BEV HY12和CEV JL14間的抗原交叉性進(jìn)行了研究,確定出BEV HY12與CEV JL14之間存在一定的抗原交叉性,但仍屬于不同的血清型,該結(jié)果為今后腸道病毒感染的診斷與防控的深入研究打下基礎(chǔ)。
【圖文】：

5圖 1-1 腸道病毒粒子及其基因組結(jié)構(gòu)圖（引自 Eun-Je Yi 2016）結(jié)構(gòu)蛋白 VP1、VP2、VP3 位于病毒粒子衣殼的外表面，是最先編碼的 3個(gè)蛋白，它們含有中和抗體的特異性結(jié)合位點(diǎn)，與病毒血清型分類(lèi)以及病毒與宿主細(xì)胞結(jié)合感染有關(guān)[19-21]。VP4 蛋白較小位于病毒粒子衣殼的內(nèi)表面，與病毒粒子的 RNA 緊密結(jié)合，主要功能是參與病毒基因組脫殼[22-24]。腸道病毒基因組的 P2、P3 區(qū)域主要轉(zhuǎn)錄合成非結(jié)構(gòu)蛋白，2A、3C 蛋白能夠影響宿主細(xì)胞功能，其中 2A 蛋白不僅可以參與阻斷、抑制宿主機(jī)體細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄過(guò)程，還可以通過(guò)裂解細(xì)胞的骨架相關(guān)因子，從而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)病變現(xiàn)象[25]。3C 蛋白上有一個(gè)核定位序列（NLS），能夠進(jìn)入細(xì)胞核[20]。同時(shí)還具有裂解調(diào)節(jié)蛋白和細(xì)胞因子的能力，，從而阻斷宿主機(jī)體細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄過(guò)程，導(dǎo)致細(xì)胞病變。2A、3C 蛋白

圖 2-1 病毒的細(xì)胞分離培養(yǎng)結(jié)果A.正常細(xì)胞對(duì)照； B、C 分離株代表毒株（分別為 GZL-6、HY68 毒株）接種 Vero 細(xì)胞引起的細(xì)胞病變；D.病毒粒子的電鏡觀察圖2.3.2 病毒毒力及理化學(xué)性質(zhì)鑒定采用 Reed -Muench 兩氏法測(cè)定分離的 BEV 毒株的 TCID50，并進(jìn)行理化學(xué)特性鑒定，分別進(jìn)行酸性、脂溶性、熱敏性處理，測(cè)定毒株在不同處理方式下 TCID50的差異，檢測(cè)分離的毒株的毒力和理化學(xué)性質(zhì)。其毒力檢測(cè)結(jié)果如圖2-2，8 個(gè)新分離的 BEV 毒株的毒力效價(jià)與 2012 年分離的 BEV HY12 的 TCID50值 10-10相比較低，但其 TCID50值在 10-6.5-10-7.67仍具有較高的毒力效價(jià)，最高的是 HY59（10-7.67），最低的是 GZL6（10-6.5）。對(duì)分離出的 8 株 BEV 毒株的理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行鑒定如圖 2-3、2-4、2-5 所示，在經(jīng)過(guò) pH3.0 和 pH5.0 酸性環(huán)境對(duì)病毒液處理后，測(cè)定其毒力與沒(méi)有處理的病毒液的毒力滴度沒(méi)有發(fā)生明顯差異，
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 張海麗;周萍萍;高明春;王君偉;;一株牛腸道病毒的分離與鑒定[J];中國(guó)奶牛;2015年05期

2 邢澤黎;朱利塞;王新平;李蘇靖;郭昌明;楊麗;;從吉林省肉牛場(chǎng)新發(fā)疫病分離出E種腸道病毒[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年03期

3 彭小薇;董浩;吳丹;張鶴曉;吳清民;呂艷麗;;牛腸道病毒2型的分離與鑒定[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2013年05期

4 衛(wèi)海燕;許玉玲;黃學(xué)勇;馬宏;;腸道病毒分子分型研究進(jìn)展[J];中國(guó)病毒病雜志;2012年01期

5 李英利;常繼濤;于力;;牛腸道病毒的分離鑒定[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2011年05期

6 趙曉光;郭金鵬;諶志強(qiáng);李君文;李援;趙虹;鄭洪;郭軍巧;;腸道病毒檢測(cè)及其抗病毒藥物研究進(jìn)展[J];中國(guó)公共衛(wèi)生;2007年03期

7 侯文俊;楊健洋;胡燕;孫穎;貌盼勇;;人類(lèi)腸道病毒分子生物學(xué)分型鑒定方法的建立及應(yīng)用[J];中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志;2006年02期

8 何寬其;中草藥抗柯薩奇病毒實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展[J];中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志;2003年09期

9 周宜強(qiáng);孫宏新;毛樹(shù)章;;Chinese Herbal Enema for Treatment of Tumors at the Middle and Late Stage[J];Journal of Traditional Chinese Medicine;2001年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 朱彤;趙貴民;沈付嬈;侯佩莉;王洪梅;李杰;何洪彬;;牛腸道病毒實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2015年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 朱利塞;E種腸道病毒HY12準(zhǔn)種與進(jìn)化及VP1基因突變對(duì)病毒復(fù)制的影響[D];吉林大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 魯海冰;雙抗體夾心ELISA檢測(cè)羊腸道病毒抗原方法的建立與應(yīng)用及病毒VP1蛋白抗原表位的篩選[D];吉林大學(xué);2017年

本文編號(hào)：2676755