【摘要】：腸道病毒(Enterovirus,EV)屬于小RNA病毒科(Picornaviridae)腸道病毒屬的成員,是引起人類與動物臨床上以消化道、呼吸道、神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂為特征疫病的病原體。腸道病毒屬共含有12個腸道病毒種(A-L)及3個鼻病毒種(A-C)。其中EV-E和EV-F的易感動物主要是牛,EV-G的易感動物主要是豬。腸道病毒感染動物后,引起機體呈現(xiàn)出消化道和呼吸道病變與癥狀,對畜牧養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展造成嚴重的危害。2012年本實驗室從吉林省某發(fā)病牛群中分離出BEV HY12病毒株,首次確認國內(nèi)牛群存在E種腸道病毒感染。2014年本實驗室又從吉林省某嚴重腹瀉山羊群中分離出G種腸道病毒CEV-JL14,目前被收錄為G種腸道病毒的新血清型EV-G20的代表種。牛腸道病毒(Bovine enterovirus,BEV)和山羊腸道病毒(Caprine enterovirus,CEV)均為國內(nèi)近年來新發(fā)傳染病,目前有關它們感染的相關報道雖然逐年增加,但有關病毒的遺傳變異等相關研究缺乏。因此,研究吉林省牛腸道病毒的分子遺傳變異與進化,比較牛、羊兩種腸道病毒之間抗原性的差異,不僅為臨床上腸道病毒感染的防治提供理論依據(jù),而且對于闡明腸道病毒的遺傳變異規(guī)律等研究打下基礎。本研究應用雙抗體夾心ELISA方法,檢測了2012年至2016年采自吉林省不同地區(qū)的326份疑似牛腸道病毒感染的糞便樣品。結果發(fā)現(xiàn),吉林省不同地區(qū)的牛群均存在不同程度的腸道病毒感染,其感染率為10.5%-20.4%。應用病毒分離培養(yǎng)技術將檢測結果為陽性的糞便樣品,接種Vero細胞,共獲得8株牛腸道病毒毒株。以RT-PCR方法,擴增BEV 5'UTR基因組序列,通過生物信息學軟件比對分析擴增出的21株毒株基因序列與GenBank現(xiàn)有的BEV代表毒株的相應核苷酸序列,發(fā)現(xiàn)分離出的BEV毒株與BEV HY12的核苷酸同源性為79.3%-98.2%,存在一定的遺傳分子差異。遺傳進化樹分析發(fā)現(xiàn),分離出的BEV毒株均屬于E種腸道病毒。此外,基于制備的抗BEV HY12(E種)腸道病毒和抗羊腸道病毒CEV JL14的高免血清,應用交叉中和試驗和交叉免疫熒光試驗方法,首次對BEV HY12和CEV JL14間的抗原交叉性進行了研究,確定出BEV HY12與CEV JL14之間存在一定的抗原交叉性,但仍屬于不同的血清型,該結果為今后腸道病毒感染的診斷與防控的深入研究打下基礎。
【圖文】：

5圖 1-1 腸道病毒粒子及其基因組結構圖（引自 Eun-Je Yi 2016）結構蛋白 VP1、VP2、VP3 位于病毒粒子衣殼的外表面，是最先編碼的 3個蛋白，它們含有中和抗體的特異性結合位點，與病毒血清型分類以及病毒與宿主細胞結合感染有關[19-21]。VP4 蛋白較小位于病毒粒子衣殼的內(nèi)表面，與病毒粒子的 RNA 緊密結合，主要功能是參與病毒基因組脫殼[22-24]。腸道病毒基因組的 P2、P3 區(qū)域主要轉錄合成非結構蛋白，2A、3C 蛋白能夠影響宿主細胞功能，其中 2A 蛋白不僅可以參與阻斷、抑制宿主機體細胞的轉錄過程，還可以通過裂解細胞的骨架相關因子，從而導致細胞出現(xiàn)病變現(xiàn)象[25]。3C 蛋白上有一個核定位序列（NLS），能夠進入細胞核[20]。同時還具有裂解調(diào)節(jié)蛋白和細胞因子的能力，，從而阻斷宿主機體細胞的轉錄過程，導致細胞病變。2A、3C 蛋白

圖 2-1 病毒的細胞分離培養(yǎng)結果A.正常細胞對照； B、C 分離株代表毒株（分別為 GZL-6、HY68 毒株）接種 Vero 細胞引起的細胞病變；D.病毒粒子的電鏡觀察圖2.3.2 病毒毒力及理化學性質(zhì)鑒定采用 Reed -Muench 兩氏法測定分離的 BEV 毒株的 TCID50，并進行理化學特性鑒定，分別進行酸性、脂溶性、熱敏性處理，測定毒株在不同處理方式下 TCID50的差異，檢測分離的毒株的毒力和理化學性質(zhì)。其毒力檢測結果如圖2-2，8 個新分離的 BEV 毒株的毒力效價與 2012 年分離的 BEV HY12 的 TCID50值 10-10相比較低，但其 TCID50值在 10-6.5-10-7.67仍具有較高的毒力效價，最高的是 HY59（10-7.67），最低的是 GZL6（10-6.5）。對分離出的 8 株 BEV 毒株的理化學性質(zhì)進行鑒定如圖 2-3、2-4、2-5 所示，在經(jīng)過 pH3.0 和 pH5.0 酸性環(huán)境對病毒液處理后，測定其毒力與沒有處理的病毒液的毒力滴度沒有發(fā)生明顯差異，
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S852.65

【參考文獻】

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本文編號：2676755