發(fā)布時間：2020-05-20 15:26

【摘要】：豬流行性腹瀉(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一種急性高接觸性腸道傳染病。不同品種和年齡的豬都有明顯易感性,但危害最為嚴重的是哺乳仔豬,其發(fā)病率高達100%,死亡率30%~80%不等,臨床表現(xiàn)以病豬急性水樣腹瀉、嘔吐和脫水為特征。目前,該病防制主要以疫苗免疫防控為主,但由于該病病原在我國經(jīng)多年流行變異,國內(nèi)現(xiàn)有疫苗在不同地區(qū)使用時的免疫保護效果存在很大差異。另外,豬場養(yǎng)殖管理水平的差異,僅依靠單次免疫不能完全保證疫苗免疫后產(chǎn)生整齊度高的抗體。因此,豬場迫切需要更高安全性及保護率的豬流行性腹瀉疫苗,以保護仔豬免受流行PEDV的侵害,進而控制該病的爆發(fā)與傳播。本研究采集甘肅省發(fā)病豬的小腸組織及內(nèi)容物進行PEDV的分離鑒定并進行其滅活疫苗的研制,為PED的防控做出了新的探索。研究結(jié)果如下:1.PEDV的分離鑒定。從甘肅省某暴發(fā)仔豬腹瀉的豬場中,采集因腹瀉病死的7日齡內(nèi)的仔豬小腸組織及內(nèi)容物,經(jīng)處理后在添加10μg/mL胰酶的Vero細胞中進行病毒分離培養(yǎng)。在Vero細胞上盲傳到第5代,出現(xiàn)了明顯的細胞病變,繼續(xù)傳至第10代收獲病毒液。經(jīng)過RT-PCR檢測、病毒特異性中和試驗等鑒定,確定分離出一株豬流行性腹瀉病毒,命名為PEDV-GS10株。2.滅活疫苗的研制。在病毒培養(yǎng)過程中,用含8%新生胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基進行Vero細胞的傳代培養(yǎng)。以0.5%體積比接種PEDV-GS10株至Vero細胞中,37℃溫室培養(yǎng)48-72 h,收獲病毒。在PEDV-GS10株病毒液中加入終濃度為0.07%甲醛,2-8℃滅活48 h,經(jīng)無菌和滅活檢驗合格后,用ISA 61 VG佐劑配制疫苗。仔豬免疫實驗發(fā)現(xiàn)對仔豬安全有效。3.滅活疫苗的臨床試驗。將制備的PEDV-GS10株滅活疫苗免疫妊娠母豬,進行安全性試驗和有效性試驗。結(jié)果表明豬流行性腹瀉滅活疫苗(GS10株)對妊娠母豬是安全有效的,對妊娠母豬產(chǎn)仔數(shù)量及仔豬質(zhì)量沒有影響。哺乳仔豬被動免疫抗體至少可持續(xù)至28日齡。
【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S852.651

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