【摘要】：免疫應(yīng)答是機(jī)體正常的生理性反應(yīng),必須通過負(fù)調(diào)控分子調(diào)控使免疫應(yīng)答在適當(dāng)范圍內(nèi)進(jìn)行,以維持體內(nèi)正常的生理平衡。某些病原,如口蹄疫病毒(FMDV)在進(jìn)化中利用負(fù)調(diào)控系統(tǒng)進(jìn)行免疫規(guī)避或逃逸宿主的免疫應(yīng)答,造成持續(xù)性感染或使動物長期帶毒。實驗室前期的研究表明,FMDVVP1蛋白能夠與胞漿蛋白可溶性耐藥相關(guān)鈣結(jié)合蛋白(Sorcin)相互作用,并招募下游的STAT3,抑制宿主細(xì)胞NF-κB和Ⅰ型干擾素的轉(zhuǎn)錄激活,表明Sorcin是免疫信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的一個負(fù)調(diào)控因子。然而,Sorcin在動物體內(nèi)的作用仍然不清楚。本研究利用急性炎癥反應(yīng)疾病模型,探究Sorcin在動物體內(nèi)免疫應(yīng)答中的作用及分子機(jī)理。通過 RT-qPCR 方法發(fā)現(xiàn),THP-1 和 Raw264.7 細(xì)胞在 TNF-α、LPS 或 Poly(I:C)刺激下,Sorcin的含量都保持一個較為穩(wěn)定的水平。同時,發(fā)現(xiàn)小鼠的腦、睪丸、腎、胸腺、心臟等器官中Sorcin的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他臟器,說明Sorcin的表達(dá)與組織類型相關(guān)。為揭示Sorcin在動物體內(nèi)的作用,對129品系Sorcin基因敲除小鼠(Sorcin-/-)進(jìn)行遺傳背景替換,經(jīng)過十個代次以上的遺傳背景替換,獲得C57BL/6 Sorcin-/-和BALB/c Sorcin-/-小鼠。此外,以不同的T細(xì)胞刺激劑(αCD3、αCD28和ConA)刺激體外培養(yǎng)的小鼠脾細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)Sorcin-/-小鼠脾細(xì)胞比WT(Sorcin+/+)小鼠脾細(xì)胞增殖情況更顯著,并且分泌更多的IL-2、IL-4、IL-17A和IFN-γ,但分泌的IL-10則明顯減少,這說明Sorcin在調(diào)控脾細(xì)胞活化和細(xì)胞因子表達(dá)中發(fā)揮了作用。為探索Sorcin在炎癥反應(yīng)中的作用,首先以ConA誘導(dǎo)的急性肝炎為模型分析Sorcin-/-小鼠的表型變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與WT小鼠相比,Sorcin-/-小鼠肝臟腫脹、出血和壞死灶更明顯,脾臟淤血腫脹更嚴(yán)重;肝組織HE染色結(jié)果表明,Sorcin-/-小鼠肝臟組織出現(xiàn)更明顯的壞死并有大量的炎性細(xì)胞浸潤,血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平明顯升高,免疫沉淀證實肝組織中Sorcin與STAT3是相互作用的,這些結(jié)果說明Sorcin在ConA誘導(dǎo)的急性肝炎中可能通過STAT3發(fā)揮負(fù)調(diào)控作用。進(jìn)一步以￡.coli/LPS誘導(dǎo)的急性敗血癥模型分析Sorcin-/-小鼠的表型變化,發(fā)現(xiàn)以5×107 CFU E.coli(0119)感染小鼠后,Sorcin-/-小鼠比WT小鼠更易發(fā)生敗血癥,感染后96小時WT小鼠存活率為67%,而Sorcin-/-小鼠存活率為20%,差異顯著(p0.05),而且Sorcin-/-小鼠血液中的促炎反應(yīng)細(xì)胞因子(IL-1、IL-6、IL-12、TNF-α以及IL-17A)顯著增加。Sorcin-/-小鼠肝臟和脾臟中的巨噬細(xì)胞對￡.coli的吞噬明顯增強,STAT3的磷酸化減弱,而NF-κB的磷酸化和核轉(zhuǎn)移顯著增強。進(jìn)一步以E.coli毒力因子LPS注射小鼠分析Sorcin-/-小鼠表型變化,研究結(jié)果與E.coli感染模型一致,即Sorcin-/-小鼠比WT對照組小鼠對LPS更敏感,而且血m械拇傺紫赴蜃酉災(zāi)哂赟orcin+/+組小鼠。這些結(jié)果說明Sorcin在E.coli/LPS誘導(dǎo)的NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起負(fù)調(diào)控作用,抑制促炎細(xì)胞因子的表達(dá),從而抑制細(xì)胞因子風(fēng)暴引起的急性敗血癥。綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)Sorcin在ConA誘導(dǎo)的急性肝炎、E.coli以及LPS誘導(dǎo)的急性炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要的負(fù)調(diào)控作用,避免免疫應(yīng)答因過度反應(yīng)而失控,這些研究結(jié)果為深入研究Sorcin在免疫應(yīng)答中的分子機(jī)理提供重要參考。
【圖文】：

圖１－３邋ＣｏｎＡ誘導(dǎo)Ｔ細(xì)胞激活肝損傷的機(jī)制逡逑（引自文獻(xiàn)＿）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－３邋Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ邋ｏｆ邋ＣｏｎＡ邋ｉｎｄｕｃｅｄ邋Ｔ邋ｃｅｌｌ邋ａｃｔｉｖａｔｅｄ邋ｌｉｖｅｒ邋ｉｎｊｕｒｙ逡逑ｎＡ介導(dǎo)的肝損傷主要產(chǎn)生ＩＦＮ－ｙ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６和ＴＮＦ－ａ，而且主要ｎ＜）－１１２］。在血漿中，ＴＮＦ－ａ和ＩＬ－１０在注射后ｌｈ達(dá)到峰值，ＩＬ－４在２ｈ達(dá)到峰ＩＬ－６在３ｈ達(dá)到峰值，隨后是ＩＬ－１２１１１３，１１４］。然而，在肝臟里，ＴＮＦ－ａ、ＩＦＮ－ｙ達(dá)到峰值，隨后是ＩＬ－１２和ＩＬ－２，而ＩＬ－６和ＩＬ－１０在肝臟中沒有明顯的變化丨１Ｕ中的ＩＬ－１０比血漿中低很多，這意味著ＩＬ－１０可能來源于其他組織，例如脾臟道ＩＬ－１０在肝臟中的表達(dá)比脾臟中高Ｉ１１４］。因此，至今ｉＬ＿１０的來源仍然不清ＣｏｎＡ誘導(dǎo)的急性炎癥模型中，以ＩＬ－１０為標(biāo)準(zhǔn)，ＴＮＦ－ａ、ＩＦＮ－ｙ和ＩＬ－１２的水．９２和８．３倍。而在注射ＣｏｎＡ前先注射重組蛋白ＩＬ－１０，邋ＴＮＦ－ａ、ＩＦＮ－丫和ＩＬ－１下降４７％、４７％和８０％。ＩＬ－１０被認(rèn)為是一個在ＣｏｎＡ誘導(dǎo)的急性模型中抑因子⑴５］。Ｋａｔｏ等的研究表明，ＩＬ－１０的水平在注射（：0１１八１２１１后增高［１１６］。在用腹腔注射中和后，谷丙轉(zhuǎn)氨酶的水平顯著高于對照組。這些研究表明，傷動物模型中發(fā)揮著抑制作用，并且內(nèi)源的和外源的ＩＬ－１０都能保護(hù)肝臟免

Ｔｃｅ＂邐ＬｉｖｅＬｊｕｒｙ逡逑圖１－３邋ＣｏｎＡ誘導(dǎo)Ｔ細(xì)胞激活肝損傷的機(jī)制逡逑（引自文獻(xiàn)＿）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－３邋Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ邋ｏｆ邋ＣｏｎＡ邋ｉｎｄｕｃｅｄ邋Ｔ邋ｃｅｌｌ邋ａｃｔｉｖａｔｅｄ邋ｌｉｖｅｒ邋ｉｎｊｕｒｙ逡逑ＣｏｎＡ介導(dǎo)的肝損傷主要產(chǎn)生ＩＦＮ－ｙ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６和ＴＮＦ－ａ，而且主要是ＩＦＮ－丫和逡逑ＴＮＦ－ａ｜ｎ＜）－１１２］。在血漿中，ＴＮＦ－ａ和ＩＬ－１０在注射后ｌｈ達(dá)到峰值，ＩＬ－４在２ｈ達(dá)到峰值，ＩＦＮ－丫、逡逑ＩＬ－２和ＩＬ－６在３ｈ達(dá)到峰值，隨后是ＩＬ－１２１１１３，１１４］。然而，在肝臟里，，ＴＮＦ－ａ、ＩＦＮ－ｙ和ＩＬ－４在注逡逑射后ｌｈ達(dá)到峰值，隨后是ＩＬ－１２和ＩＬ－２，而ＩＬ－６和ＩＬ－１０在肝臟中沒有明顯的變化丨１Ｕ’Ｕ４］。特別逡逑是肝臟中的ＩＬ－１０比血漿中低很多，這意味著ＩＬ－１０可能來源于其他組織，例如脾臟中。但是也逡逑有文獻(xiàn)報道ＩＬ－１０在肝臟中的表達(dá)比脾臟中高Ｉ１１４］。因此，至今ｉＬ＿１０的來源仍然不清楚。逡逑在ＣｏｎＡ誘導(dǎo)的急性炎癥模型中，以ＩＬ－１０為標(biāo)準(zhǔn)，ＴＮＦ－ａ、ＩＦＮ－ｙ和ＩＬ－１２的水平分別增加逡逑２．１１、１．９２和８．３倍。而在注射ＣｏｎＡ前先注射重組蛋白ＩＬ－１０
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S852.4

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本文編號：2671290