【摘要】：本論文對豬日糧內(nèi)源代謝葡萄糖評定方法進行了研究。首先,利用“穩(wěn)定性同位素示蹤法”向豬回腸末端瘺管灌注~(13)C-VFA(乙酸、丙酸和丁酸同位素)示蹤豬大腸產(chǎn)生的揮發(fā)性脂肪酸的各個去路,得到血液、腸壁組織和大腸內(nèi)容物樣品,通過GC-MS(氣相質(zhì)譜儀)建立測定豬血液、大腸組織和大腸內(nèi)容物中乙酸、丙酸和丁酸以及各自同位素含量的方法;再進行正式動物飼養(yǎng)試驗,采用“回腸末端灌注法”和“動-靜脈濃度差法”,結(jié)合同位素示蹤,計算出大腸丙酸吸收量和門靜脈乳酸凈吸收量,根據(jù)豬日糧內(nèi)源代謝葡萄糖的計算公式,得到三種不同代謝葡萄糖水平的豬日糧內(nèi)源代謝葡萄糖含量;最后將上述三種日糧通過體外模擬“胃-小腸”消化后,進行體外模擬大腸微生物發(fā)酵,測定丙酸和乳酸的產(chǎn)生量,將體外丙酸和乳酸的產(chǎn)生量分別與體內(nèi)大腸丙酸吸收量和門靜脈乳酸凈吸收量進行回歸分析,通過它們之間的回歸方程,建立體外估測日糧內(nèi)源代謝葡萄糖的方法,并通過此方法估測玉米、豆粕、大豆皮和小麥麩四種原料中內(nèi)源代謝葡萄糖值。論文分為3個部分:試驗一、GC-MS測定~(13)C標(biāo)記的揮發(fā)性脂肪酸方法的研究選取1頭體重為30 kg左右的健康生長豬,飼喂以玉米、豆粕為基礎(chǔ)的日糧。預(yù)飼3天后,對試驗豬安裝回腸末端“T”型瘺管,股動脈、門靜脈血管瘺管。手術(shù)恢復(fù)后,從回腸“T”型瘺管處灌注同位素~(13)C標(biāo)記的乙酸、丙酸、丁酸。灌注結(jié)束后,采集血液,并將豬屠宰,采集盲腸、結(jié)腸和直腸整段腸道并稱重,收集這三段腸道的內(nèi)容物。通過設(shè)定并調(diào)整GC-MS條件,建立氣相質(zhì)譜儀測定血液、腸道組織和腸道內(nèi)容物中~(13)C標(biāo)記的和未標(biāo)記的乙酸、丙酸、丁酸含量的方法。結(jié)果表明,6種VFA在對應(yīng)的濃度范圍內(nèi),線性關(guān)系良好;批內(nèi)精密度和批間精密度及準(zhǔn)確度較好。本研究可作為一種簡單、快速且準(zhǔn)確分析豬血液、大腸組織和大腸內(nèi)容物中~(13)C穩(wěn)定性同位素標(biāo)記的揮發(fā)性脂肪酸含量的方法。試驗二、體內(nèi)法評定生長豬三種日糧內(nèi)源代謝葡萄糖水平選取15頭平均體重為30 kg左右的健康生長豬,隨機分為3個處理組,每個處理組5個重復(fù),飼喂以玉米、豆粕為基礎(chǔ)的等氮、代謝葡萄糖水平不同的3種日糧。預(yù)飼3天后,給試驗豬安裝回腸末端“T”型瘺管,股動脈、門靜脈和腸系膜血管瘺管。術(shù)后至采食量恢復(fù)正常后,從腸系膜血管瘺管遠端灌注對氨基馬尿酸,同時從回腸“T”型瘺管處灌注同位素~(13)C標(biāo)記的丙酸。采集門靜脈和股動脈血樣。灌注結(jié)束后,將豬屠宰,采集盲腸、結(jié)腸和直腸整段腸道并稱重,通過試驗一中的方法,測定血液和腸壁中丙酸和丙酸同位素的含量,并用試劑盒測定血液中乳酸含量。采用“動-靜脈濃度差法”計算門靜脈丙酸和乳酸的凈吸收量。根據(jù)乳酸門靜脈凈吸收量和丙酸大腸吸收量來計算日糧內(nèi)源代謝葡萄糖水平。結(jié)果表明,丙酸門靜脈凈吸收量日糧Ⅰ組最低,日糧Ⅱ組最高,三組之間差異不顯著(P0.05)。丙酸大腸沉積量日糧Ⅰ組最高,日糧Ⅲ組最低且顯著低于日糧Ⅰ組(P0.05)。丙酸大腸吸收量日糧Ⅲ組最低,日糧Ⅰ組最高且顯著高于日糧Ⅲ組(P0.05)。乳酸門靜脈凈吸收量日糧Ⅲ組最高,Ⅱ組最低且顯著低于Ⅲ組(P0.05)。生長豬三種日糧內(nèi)源代謝葡萄糖含量日糧Ⅱ組最低,Ⅰ組最高且顯著高于Ⅱ組(P0.05)。生長豬三種日糧內(nèi)源代謝葡萄糖含量日糧Ⅰ組最高,Ⅱ組最低且顯著低于Ⅰ組(P0.05)。本試驗條件下,三種日糧丙酸大腸吸收量分別為15.21、13.33和8.13 g/d,乳酸門靜脈凈吸收量分別為7.57、3.17和12.04 g/d,內(nèi)源代謝葡萄糖水平分別為61.07、44.22和55.10 g/kg;通過結(jié)合~(13)C丙酸示蹤,研究大腸丙酸吸收量,提高了日糧內(nèi)源代謝葡萄糖測定方法的準(zhǔn)確度。試驗三、體外法評定生長豬三種日糧內(nèi)源代謝葡萄糖水平將試驗二中的日糧粉碎過篩作為底物,體外模擬“胃-小腸消化”后,收集殘渣并烘干粉碎,再進行體外發(fā)酵產(chǎn)氣法的研究,測定發(fā)酵產(chǎn)生的丙酸和乳酸的含量,將體外丙酸和乳酸的產(chǎn)生量分別與體內(nèi)大腸丙酸吸收量和門靜脈乳酸凈吸收量進行回歸分析,通過它們之間的回歸方程,建立體外估測日糧內(nèi)源代謝葡萄糖的方法,并測定玉米、豆粕、大豆皮和小麥麩四種飼料原料內(nèi)源代謝葡萄糖的含量。結(jié)果表明,48 h時,體內(nèi)大腸丙酸吸收量與體外發(fā)酵丙酸產(chǎn)生量之間、體內(nèi)乳酸門靜脈凈吸收量與體外發(fā)酵乳酸產(chǎn)生量之間,線性關(guān)系較好。本試驗條件下,體外發(fā)酵48 h時,三種日糧體內(nèi)大腸丙酸吸收量與體外發(fā)酵丙酸產(chǎn)生量之間的關(guān)系為Y=3.8268X-6.8329,R~2=0.9683;體內(nèi)乳酸門靜脈凈吸收量與體外發(fā)酵乳酸產(chǎn)生量之間的關(guān)系為Y=0.5900X+3.1967,R~2=0.9666,根據(jù)這兩個表達式建立了測定日糧內(nèi)源代謝葡萄糖水平的體外估測方法。并通過此方法估測了四種常用飼料原料玉米、豆粕、大豆皮和小麥麩中內(nèi)源代謝葡萄糖含量分別為177.55、32.83、58.02和14.83 mg/g。
【圖文】：

葡萄糖化學(xué)結(jié)構(gòu)示意圖

六種揮發(fā)性脂肪酸混合標(biāo)樣提取的乙酸和丁酸色譜圖
【學(xué)位授予單位】：武漢輕工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S828.5

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本文編號：2669961