發(fā)布時間：2020-05-18 11:26

【摘要】：肌肉組織是畜禽機(jī)體重要的組成部分之一,探究肌肉生長發(fā)育的調(diào)控機(jī)制,對于提高畜禽品種的肌肉產(chǎn)量和改善畜禽生長性狀等都具有重要意義。肌肉生長抑制素(Myostatin,MSTN)又稱GDF8(Growth differentiation factor 8,GDF8),是一種負(fù)調(diào)控骨骼肌生長和分化的主效基因。MSTN基因的超量表達(dá)會導(dǎo)致動物肌肉萎縮,而抑制或敲出MSTN基因會導(dǎo)致動物的肌肉肥大,產(chǎn)生“雙肌”現(xiàn)象。肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2(Myocyte enhancer factor 2,MEF2)屬于MADS超基因家族,主要由(MEF2A、MEF2B、MEF2C、MEF2D)4個成員構(gòu)成。MEF2家族轉(zhuǎn)錄因子能特異性的識別并結(jié)合與肌肉調(diào)控相關(guān)的啟動子,從而調(diào)節(jié)動物肌肉的生長發(fā)育。本文試圖通過研究MSTN啟動子和轉(zhuǎn)錄因子間的相互作用,闡明MSTN基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制。本研究以貴州地方黃牛為研究對象,采用實(shí)時熒光定量PCR檢測MSTN基因在4個貴州地方黃牛(心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、脂肪、背最長肌)7個組織中的表達(dá)量;將成功構(gòu)建的pGL3-Basic-MSTN和pcDNA3.1(+)-MEF2A(M EF2B、MEF2C、MEF2D)真核表達(dá)載體分別共轉(zhuǎn)染至小鼠C2C12細(xì)胞,24 h后,檢測其雙熒光素酶活性;重新構(gòu)建的以啟動子核心片段MSTN-P1替代(C MV)區(qū)的pEGFP-N3-MSTN-P1-MEF2C重組真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染小鼠C2C12細(xì)胞和大鼠下頜腺上皮細(xì)胞,12~24小時后,觀察細(xì)胞所發(fā)出綠色熒光的情況,初步驗證MSTN-P1核心啟動子片段啟動MEF2C基因在細(xì)胞中的表達(dá)水平。48 h后,采用qRT-PCR檢測MEF2C基因在小鼠C2C12細(xì)胞和大鼠下頜腺上皮細(xì)胞中的表達(dá)量,進(jìn)一步驗證MSTN基因啟動子對MEF2C基因在轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控作。研究結(jié)果如下:(1)MSTN基因在4種貴州地方黃牛7個組織中均有表達(dá),在背最長肌中表達(dá)量最高,在部分組織中的表達(dá)因品種不同而存在差異。(2)MSTN啟動子有啟動活性,且MEF2C能明顯增強(qiáng)MSTN啟動子活性,而MEF2A、MEF2B、MEF2D對MSTN啟動子活性影響不大。(3)MSTN-P1啟動子片段對MEF2C基因在小鼠C2C12細(xì)胞和大鼠下頜腺上皮細(xì)胞中mRNA表達(dá)量有正向調(diào)控作用,說明MSTN啟動子能啟動MEF2C基因在細(xì)胞中的表達(dá)。(4)MEF2C基因能正向調(diào)控MSTN啟動子的轉(zhuǎn)錄活性。
【學(xué)位授予單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S823.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2669644