【摘要】：肌肉組織是畜禽機體重要的組成部分之一,探究肌肉生長發(fā)育的調控機制,對于提高畜禽品種的肌肉產量和改善畜禽生長性狀等都具有重要意義。肌肉生長抑制素(Myostatin,MSTN)又稱GDF8(Growth differentiation factor 8,GDF8),是一種負調控骨骼肌生長和分化的主效基因。MSTN基因的超量表達會導致動物肌肉萎縮,而抑制或敲出MSTN基因會導致動物的肌肉肥大,產生“雙肌”現象。肌細胞增強因子2(Myocyte enhancer factor 2,MEF2)屬于MADS超基因家族,主要由(MEF2A、MEF2B、MEF2C、MEF2D)4個成員構成。MEF2家族轉錄因子能特異性的識別并結合與肌肉調控相關的啟動子,從而調節(jié)動物肌肉的生長發(fā)育。本文試圖通過研究MSTN啟動子和轉錄因子間的相互作用,闡明MSTN基因表達的調控機制。本研究以貴州地方黃牛為研究對象,采用實時熒光定量PCR檢測MSTN基因在4個貴州地方黃牛(心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、脂肪、背最長肌)7個組織中的表達量;將成功構建的pGL3-Basic-MSTN和pcDNA3.1(+)-MEF2A(M EF2B、MEF2C、MEF2D)真核表達載體分別共轉染至小鼠C2C12細胞,24 h后,檢測其雙熒光素酶活性;重新構建的以啟動子核心片段MSTN-P1替代(C MV)區(qū)的pEGFP-N3-MSTN-P1-MEF2C重組真核表達載體轉染小鼠C2C12細胞和大鼠下頜腺上皮細胞,12~24小時后,觀察細胞所發(fā)出綠色熒光的情況,初步驗證MSTN-P1核心啟動子片段啟動MEF2C基因在細胞中的表達水平。48 h后,采用qRT-PCR檢測MEF2C基因在小鼠C2C12細胞和大鼠下頜腺上皮細胞中的表達量,進一步驗證MSTN基因啟動子對MEF2C基因在轉錄水平的調控作。研究結果如下:(1)MSTN基因在4種貴州地方黃牛7個組織中均有表達,在背最長肌中表達量最高,在部分組織中的表達因品種不同而存在差異。(2)MSTN啟動子有啟動活性,且MEF2C能明顯增強MSTN啟動子活性,而MEF2A、MEF2B、MEF2D對MSTN啟動子活性影響不大。(3)MSTN-P1啟動子片段對MEF2C基因在小鼠C2C12細胞和大鼠下頜腺上皮細胞中mRNA表達量有正向調控作用,說明MSTN啟動子能啟動MEF2C基因在細胞中的表達。(4)MEF2C基因能正向調控MSTN啟動子的轉錄活性。
【學位授予單位】：貴州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S823.2

【參考文獻】

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1 馬麗娜;李穎康;于洋;馬青;;MSTN基因在不同月齡灘羊不同肌肉組織中的定量表達研究[J];畜牧與飼料科學;2015年08期

2 吐來力江·哈木太;安外爾·熱合曼;馬曉燕;依明·蘇來曼;決肯·阿尼瓦什;;阿勒泰羊羔羊MSTN/Smad信號通路基因在不同組織的表達研究[J];新疆農業(yè)科學;2014年09期

3 劉敏;許厚強;陳偉;陳祥;李飛;;關嶺黃牛MSTN啟動子真核報告載體的構建與啟動活性研究[J];廣東農業(yè)科學;2013年17期

4 祁艷霞;張小輝;龐有志;王玉琴;廖輝;;南陽黃牛肌肉發(fā)育過程中的MyoD和MEF2基因的表達變化研究[J];河南農業(yè)大學學報;2012年05期

5 郭新軍;;利用生物信息學方法對人類(Homo sapiens)肌肉增強因子2(MEF2)的特性比較及進化分析[J];遺傳;2011年09期

6 周艷;劉益平;蔣小松;杜華銳;朱慶;;優(yōu)質雞MEF2A基因的SNPs檢測及其與屠體性狀的相關研究[J];畜牧獸醫(yī)學報;2009年08期

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1 程波;山羊MEF2基因家族的克隆及其組織表達規(guī)律的研究[D];四川農業(yè)大學;2012年

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本文編號：2669644