【摘要】：H9亞型禽流感為低致病性禽流感,其感染禽類會(huì)引起呼吸困難、采食下降,就、產(chǎn)蛋率下降等臨床癥狀。且易繼發(fā)其他疾病,危害極大。H9亞型禽流感因其病原的特性,在新的宿主環(huán)境和免疫壓力下已發(fā)生突變,這使得其難得到有效的防控。而且,H9亞型禽流感病毒其基因可以作為多種高致病型流感基因的基因載體,通過(guò)基因重組后能夠產(chǎn)生對(duì)人有致病作用的新型病毒,威脅公共衛(wèi)生安全。對(duì)H9亞型AIV的流行病學(xué)調(diào)查和對(duì)其致病性進(jìn)化的掌握,可有助于我們更好的預(yù)防和控制H9亞型低致病性禽流感。本研究通過(guò)對(duì)河北地區(qū)禽流感病毒進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查,了解H9亞型在河北地區(qū)的流行現(xiàn)狀,并對(duì)H9亞型禽流感病毒進(jìn)行分離,研究其遺傳進(jìn)化和致病性,為該病的防控提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。2017年~2018年收集河北地區(qū)各地方疑似H9亞型禽流感共計(jì)139份,通過(guò)檢測(cè),139份病料中有84份為禽流感,約占總病料的64.43%,通過(guò)血凝抑制試驗(yàn)進(jìn)行分型,H9亞型65份,約占77.38%。H9亞型AIV發(fā)病季節(jié)主要在1、2、3、4和12月,發(fā)病日齡分布較廣,蛋雞集中在1月齡,肉雞集中在3周齡。選取SPF雞胚分離病毒,傳至5代,分離得到兩株禽流感病毒,命名為ZD5和SD。測(cè)定血凝價(jià)ZD5為9log2,SD為8log2,EID_(50)為10~(-8.75)和10~(-7.25),通過(guò)HA基因設(shè)計(jì)引物,目的片段為550bp,與27株河北省參考株進(jìn)行比對(duì),兩株分離株之間同源性為95.8%,ZD5與A-chicken-hebei-0822-2007、A-chicken-hebei-C6-2007同源性最高,為967%;SD與A-chicken-hebei-C6-2007、A-chicken-hebei-0822-2007同源性最高,為90.1%。兩株分離株都與2007年參考株親緣關(guān)系較近。通過(guò)人工感染試驗(yàn),將ZD5肌注21日齡SPF雞,使其發(fā)病。臨床癥狀為流鼻涕,打噴嚏,張口呼吸。剖檢可見(jiàn)氣管有粘液,肺部病變,腺胃乳頭腫大出血,盲腸扁桃體出血。組織學(xué)觀察可見(jiàn)氣管黏膜脫落,部分管腔有漿液性滲出物及炎性細(xì)胞;肺部血管有炎性滲出物,肺泡內(nèi)充斥紅細(xì)胞,肺泡輪廓不完整。分離株ZD5的潛伏期大約為3天。攻毒后第5天采集棉拭子通過(guò)SPF雞胚分離,其分離率達(dá)到90%,尿囊液可凝集1%雞紅細(xì)胞。將ZD5作為制備疫苗的毒株,將其滅活配制水相,再與油相按油水比為3:1的比例混勻乳化,制備成油乳劑滅活苗。根據(jù)獸醫(yī)藥典規(guī)程檢測(cè)疫苗的劑型、穩(wěn)定性、粘度、無(wú)菌、安全性和效力,檢測(cè)結(jié)果表明:制備的滅活苗其劑型為油包水型,穩(wěn)定性良好,粘度符合標(biāo)準(zhǔn),無(wú)菌,注射動(dòng)物體內(nèi)無(wú)不良反應(yīng),免疫SPF雞后,雞的HI抗體水平顯著提升,免疫21 d后攻毒,其保護(hù)率為100%。
【學(xué)位授予單位】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S852.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2669639