【摘要】：空腸彎曲菌(Campylobacter jejuni,C.jejuni)作為在世界范圍內(nèi)廣泛流行的重要食源性致病菌和共生菌,主要導(dǎo)致人或動(dòng)物胃腸炎、心內(nèi)膜炎、敗血癥等,能引發(fā)其免疫損傷性疾病(反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、肝炎和格林-巴利綜合征(GBS)等)�？股乜剐曰�(ARGs)能借助抗性元件進(jìn)行遷移而被人體正常菌群、機(jī)會(huì)致病菌和病原菌所捕獲,而攜帶有ARGs的病原菌感染人體,將可能難以被治療,甚至無(wú)藥可救。當(dāng)前對(duì)多重耐藥的空腸彎曲桿菌研究十分有必要。基于課題組前期對(duì)華中地區(qū)家禽空腸彎曲菌流行病學(xué)的研究,表明空腸彎曲桿菌菌株(ST464CCs克隆群)形成生物膜的能力最強(qiáng),且對(duì)各類抗生素的耐藥性整體偏高。然而,多重耐藥的空腸彎曲桿菌在感染臟器后的慢性感染過(guò)程中,引起抗生素抗性基因(ARGs)是否傳遞給機(jī)體內(nèi)其他細(xì)菌的過(guò)程不清楚。本研究提出假設(shè):多重耐藥的空腸彎曲桿菌感染肝臟慢性感染過(guò)程中,可引起ARGs傳遞給肝臟中的細(xì)菌,并引起微生物群落結(jié)構(gòu)改變。設(shè)計(jì)試驗(yàn)如下:將80只昆明鼠隨機(jī)分成A、B、C、D四組,依次接種6×10~9CFU/ml、3×10~9 CFU/ml、1.5×10~9CFU/ml的菌液和布什肉湯,整個(gè)感染性試驗(yàn)持續(xù)八周。通過(guò)觀察臨床癥狀、統(tǒng)計(jì)臨床積分、計(jì)算臟器指數(shù)、剖檢病理變化、病理切片、病理積分等相關(guān)性分析及致病性資料來(lái)有效評(píng)估自身免疫性病理?yè)p傷模型,探究肝臟損傷的特征性變化;通過(guò)微生物qPCR DNA芯片檢測(cè)ARGs的種類;構(gòu)建intI1、tnpA、16S rRNA克隆文庫(kù),結(jié)合qPCR對(duì)ARGs進(jìn)行豐度定量,探究ARGs在肝臟呈現(xiàn)出的時(shí)空分布特征;利用16S rRNA巢式PCR擴(kuò)增及高通測(cè)序技術(shù)手段對(duì)肝臟樣品中微生物群落進(jìn)行分析,揭示ARGs在機(jī)體肝臟內(nèi)的遷移方式和ARGs分布特征。主要的研究結(jié)果如下:(1)空腸彎曲桿菌感染昆明鼠自身免疫性損傷病理模型的建立。據(jù)實(shí)驗(yàn)所得最佳建模條件,實(shí)驗(yàn)設(shè)定每周一到周天上午八點(diǎn)和下午六點(diǎn)對(duì)各組鼠觀察,A組高濃度、B組中濃度菌液劑量感染昆明鼠后,表現(xiàn)出活動(dòng)力減弱、呼吸出現(xiàn)急促、身體略微顫抖、雙后肢行動(dòng)弱、腹部皮毛凌亂等臨床上的癥狀,比C組的低劑量濃度感染的臨床癥狀明顯,臨床癥狀評(píng)分可達(dá)4-5分。低劑量組的昆明鼠輕微脫毛現(xiàn)象,未見(jiàn)明顯活動(dòng)異常,臨床癥狀評(píng)分為0分。每周二上午八點(diǎn)定時(shí)對(duì)各濃度組昆明鼠剖檢,其剖檢主要病變是在腸系膜處,小腸有積液;肝、脾臟與對(duì)照組對(duì)比有明顯腫大,有炎癥,與臨床上感染癥狀是相符合的;組織病理切片顯示在肝上的中央靜脈排列不規(guī)整,肝細(xì)胞內(nèi)有損傷病變,盲腸區(qū)域,黏膜有輕微的壞死脫落,其固有層顯示充血。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明空腸彎曲桿菌ST464對(duì)昆明鼠進(jìn)行腹腔接種不同劑量后,引起不同時(shí)間點(diǎn)臟器指數(shù)顯著的特征性變化,特別脾臟及肝臟表現(xiàn)出的明顯特征性變化,小腸的特征性輕微明顯;而心臟、肺、腎臟等沒(méi)有表現(xiàn)出明顯的特征性變化,這極可能與各器官的功能作用有很大關(guān)系。通過(guò)免疫損傷性病理模型,引起了昆明鼠肝臟的彌散性慢性感染。(2)空腸彎曲桿菌感染肝臟中抗生素抗性基因在不同濃度和不同時(shí)間點(diǎn)的分布特征。在實(shí)驗(yàn)室條件下,根據(jù)高中低三個(gè)濃度的菌液和布什肉湯(對(duì)照組)對(duì)昆明鼠攻毒且連續(xù)八周時(shí)間取樣分析。利用微生物qPCR DNA芯片共檢測(cè)出10種耐藥基因,分屬為β-內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、氟喹諾酮類三大類抗生素的抗性基因,占比分別是73.97%、23.25%、2.77%。由Sperman相關(guān)系數(shù)分析,int/tnpA豐度呈現(xiàn)正向顯著性關(guān)系,p0.05;整合子intI1基因和tnpA在ARGs的傳播過(guò)程中,對(duì)ARGs捕獲及其水平轉(zhuǎn)移的起關(guān)鍵性的作用;抗性基因ermB與肝臟指數(shù)(Liver index)呈現(xiàn)正向顯著性關(guān)系,p0.05;即分析ermB基因在慢性感染過(guò)程中,對(duì)肝臟的病理變化有明顯的作用。放線菌門(mén)(Actinobacteria)與SHV(β-內(nèi)酰胺類抗生素抗性基因)呈現(xiàn)正向顯著性關(guān)系。通過(guò)Adonis分析,R~2=0.49531表示分組對(duì)差異的解釋度越高;P0.02,說(shuō)明本次檢驗(yàn)的可信度高,大多數(shù)相近的樣品之間微生物群落結(jié)構(gòu)相似度是相對(duì)較高的。由16S rRNA Miseq高通量測(cè)序結(jié)果表明,在三組高中低濃度多重耐藥的空腸彎曲桿菌感染過(guò)程中,在微生物群落的門(mén)水平上物種類別,變形菌門(mén)(Proteobacteria)、放線菌門(mén)(Acidobacteria)和厚壁菌門(mén)(Firmicutes)在微生物群落中作為最主要的菌群,其豐度分別是38.73%、33.23%、19.7%,占微生物總量的91.66%,其他物種的差異不是很明顯;在微生物群落的屬水平上,紅球菌屬(Rhodococcus)、無(wú)色桿菌屬(Achromobacter)、葡萄球菌(Staphylococcus)有表明是作為共同的優(yōu)勢(shì)屬類,除了優(yōu)勢(shì)屬類外,其他物種變化有一定差異。高濃度組的多重耐藥的空腸彎曲桿菌對(duì)機(jī)體的慢性感染過(guò)程中,會(huì)在一定程度上降低其微生物的多樣性和豐度,這可能就是在微生物群落中一定程度上能對(duì)抗性優(yōu)勢(shì)菌群的生長(zhǎng)繁殖有促進(jìn)作用。綜上,本研究對(duì)多重耐藥的空腸彎曲桿菌ST464感染肝臟的慢性過(guò)程中,肝臟上的3大類抗生素10種ARGs在時(shí)空上的特征,初步表明了動(dòng)物有機(jī)體中肝臟指數(shù)和微生物群落對(duì)ARGs的影響,引起了ARGs傳遞給肝臟中的細(xì)菌及對(duì)微生物群落結(jié)構(gòu)改變起到促進(jìn)作用,為今后控制ARGs的傳播在一定程度上提供更多可能的數(shù)據(jù)支撐。
【圖文】：

株菌間進(jìn)行轉(zhuǎn)移，使接受菌獲得抗生素抗性的過(guò)程[47]。Luo 等已經(jīng)證RGs 存在于質(zhì)粒上，攜帶 ARGs 的質(zhì)粒經(jīng)接合作用可進(jìn)行轉(zhuǎn)移，在間及不同種屬細(xì)菌間進(jìn)行相互傳遞，甚至有些轉(zhuǎn)移也可發(fā)生在細(xì)菌。Rhodes 等的研究有發(fā)現(xiàn)，四環(huán)素抗性基因能夠被質(zhì)粒等移動(dòng)元件播，如可在微生物群落中的產(chǎn)氣單胞菌和大腸桿菌間相互轉(zhuǎn)移[49]。P 等基于其試驗(yàn)研究表明，在自然界中的微生物，其 DNA 會(huì)因微生亡，進(jìn)一步細(xì)胞壁出現(xiàn)破裂而被釋放，直接進(jìn)入環(huán)境中并在一定自然存留[50][51]。因此，ARGs 也可以在不依賴環(huán)境中微生物宿主的轉(zhuǎn)移釋放出來(lái)，，污染環(huán)境并造成危害。整合子若位于染色體上，可由垂直著，其本身在不借助移動(dòng)元件的條件下不能進(jìn)行移動(dòng)的，正是借著這傳給子代細(xì)菌[52]。

那么樣本中大量的基因就能同時(shí)被快速檢測(cè)出來(lái)圖 1-2。在生物體中，基因被轉(zhuǎn)錄并拼接（在真核生物A 轉(zhuǎn)錄本（圖中紅色標(biāo)記）。mRNA 從生物體中提取、穩(wěn)定的 ds-cDNA 中（圖中藍(lán)色標(biāo)記）。在微陣列中，ds記（圖中橙色標(biāo)記）。這些被標(biāo)記的片段與一組有序的起，并測(cè)量陣列中的熒光強(qiáng)度，熒光強(qiáng)度代表了一組預(yù)序列通常被選為目標(biāo)基因組的報(bào)道序列。
【學(xué)位授予單位】：長(zhǎng)江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S852.61

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 吳忠亮;朱建國(guó);;空腸彎曲桿菌檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2008年07期

2 高曉平,徐榮軍,龍福慶;空腸彎曲桿菌對(duì)動(dòng)物的危害及研究進(jìn)展[J];河南畜牧獸醫(yī);2001年11期

3 于培南;;從蒼蠅中分離出空腸彎曲桿菌[J];預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào);1985年04期

4 卓安山;小兒空腸彎曲桿菌腸炎[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(兒科學(xué)分冊(cè));1988年05期

5 周南南;賴東耀;廖筑華;黃淑云;萬(wàn)秋華;;空腸彎曲桿菌的血清學(xué)分型[J];江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1988年02期

6 張騰飛;詹麗超;羅玲;羅青平;汪宏才;楊峻;邵華斌;;鴿源空腸彎曲桿菌的分離鑒定及毒力因子分析[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年24期

7 于少軍;安憲全;李微微;倪宏波;;牛空腸彎曲桿菌的分離與鑒定[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2007年07期

8 趙月蘭,秦建華;空腸彎曲桿菌對(duì)動(dòng)物性食品的污染及檢測(cè)[J];貴州畜牧獸醫(yī);1996年01期

9 楊錫強(qiáng);水源污染引起的空腸彎曲桿菌胃腸炎[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(兒科學(xué)分冊(cè));1984年02期

10 龔振華;張康;王麗萍;王娟;隋兆峰;王洪偉;羅青平;王建琳;徐建義;邵華斌;;肉雞空腸彎曲桿菌的監(jiān)測(cè)與分析[J];中國(guó)家禽;2014年10期

相關(guān)會(huì)議論文 前3條

1 李凡飛;何小麗;張凱;程成;王文佳;;牛奶中空腸彎曲桿菌二重PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[A];中國(guó)獸醫(yī)病理學(xué)2017年學(xué)術(shù)研討會(huì)暨獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第九次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)論文集[C];2017年

2 郝海紅;戴夢(mèng)紅;王玉蓮;彭大鵬;劉振利;袁宗輝;;空腸彎曲桿菌大環(huán)內(nèi)酯類耐藥產(chǎn)生機(jī)制和適應(yīng)性分析[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)藥理毒理學(xué)分會(huì)第十次研討會(huì)論文摘要集[C];2009年

3 海泉;張煥容;楊發(fā)龍;岳華;;空腸彎曲桿菌耐藥機(jī)制研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)成立大會(huì)暨第一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 李亞森（Yassir Ali Almofti Ahmed）;大環(huán)內(nèi)脂類耐藥性對(duì)空腸彎曲桿菌毒力和適應(yīng)性的影響[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

2 秦曉慶;空腸彎曲桿菌生物膜的形成及其特性的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 劉夢(mèng)杰;空腸彎曲桿菌感染肝臟中抗生素抗性基因的時(shí)空分布[D];長(zhǎng)江大學(xué);2019年

2 隨寶斌;空腸彎曲桿菌中與粘附侵染有關(guān)基因的功能研究[D];天津科技大學(xué);2018年

3 鐘顯;食品中空腸彎曲桿菌風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別及菌株特性研究[D];廣東工業(yè)大學(xué);2016年

4 齊詩(shī)蕊;通過(guò)環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)快速檢測(cè)空腸彎曲桿菌和幽門(mén)螺桿菌[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2017年

5 任妮;臨床雞源致病性耐藥空腸彎曲桿菌的基因組學(xué)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

6 趙煜;具有拮抗空腸彎曲桿菌功效的乳酸菌的研究[D];江南大學(xué);2012年

7 姜毅;空腸彎曲桿菌耐藥性及其主要相關(guān)基因的初步分析[D];上海交通大學(xué);2008年

8 侯建軍;空腸彎曲桿菌培養(yǎng)檢測(cè)方法的建立及上海地區(qū)畜禽感染狀況調(diào)查[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

9 潘劍平;動(dòng)物源性空腸彎曲桿菌耐藥性流行分布研究[D];上海交通大學(xué);2008年

10 王媚;一種禽用微生態(tài)制劑的制備及其功能研究[D];華南農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

本文編號(hào)：2663379