【摘要】：驢是具有很高經(jīng)濟(jì)價(jià)值的家畜之一。驢肉是美味營養(yǎng)食品、驢奶成分最接近人乳,是人奶最佳替代品,驢皮是制作阿膠的主要原料。但驢自然繁育周期長、繁殖速率低,制約了驢產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。人工繁育技術(shù)可提高優(yōu)良畜種的繁殖率,卵母細(xì)胞冷凍保存是家畜人工繁育技術(shù)基礎(chǔ)之一,也是保存優(yōu)質(zhì)家畜遺傳資源的有效途徑。有關(guān)驢卵母細(xì)胞凍存的研究鮮有報(bào)道。為此本研究采用玻璃化冷凍技術(shù)凍存驢不同發(fā)育階段(未成熟生發(fā)泡期GV期、體外成熟期IVM-MⅡ)卵母細(xì)胞,分析凍存前后卵母細(xì)胞成熟率、發(fā)育率和亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化;對(duì)冷凍前后卵母細(xì)胞進(jìn)行單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,同時(shí)檢測(cè)與卵母細(xì)胞發(fā)育密切相關(guān)的三種母源基因Nlrp5、Nlrp2和Padi6的表達(dá)變化,分析玻璃化冷凍對(duì)卵母細(xì)胞成熟及發(fā)育的影響。研究結(jié)果如下:1.冷凍GV期卵母細(xì)胞形態(tài)正常率與對(duì)照比沒有顯著差異;成熟率和卵裂率顯著低于對(duì)照組(18.34%VS 52.67%,20.83%VS 41.38%);冷凍IVM-MⅡ期卵裂率顯著低于對(duì)照組(16.36%VS 41.38%),且卵裂后細(xì)胞發(fā)育受到阻滯。GV期卵母細(xì)胞更適于玻璃化冷凍保存。2.新鮮GV期(對(duì)照)、冷凍GV期、冷凍IVM-MⅡ卵母細(xì)胞微絲正常率分別為73.07%、40.00%和28.20%;線粒體正常率分別為70.00%、35.16%和25.71%。冷凍卵母細(xì)胞微絲出現(xiàn)異常分布的數(shù)目增多,線粒體數(shù)量也明顯減少。凍存后卵母細(xì)胞微絲與線粒體分布異常現(xiàn)象GV期較IVM-MII期輕,發(fā)育狀態(tài)也好。3.GV期冷凍卵母細(xì)胞皮質(zhì)顆粒分布正常率顯著低于對(duì)照(47.22%VS76.60%),IVM-MⅡ期(GV期冷凍處理)卵母細(xì)胞皮質(zhì)顆粒分布正常率相比于對(duì)照具有顯著差異(24.24%VS 53.85%)。冷凍后卵母細(xì)胞皮質(zhì)顆粒數(shù)量與密度明顯低于新鮮卵,且皮質(zhì)顆粒遷移受到阻滯。4.正常卵母細(xì)胞成熟過程中(GV、MⅠ、MⅡ)母源基因Nlrp5、Nlrp2和Padi6在MI期上調(diào)表達(dá),MII期下調(diào)表達(dá);冷凍后卵母細(xì)胞母源基因隨成熟過程一直呈下調(diào)表達(dá)趨勢(shì),進(jìn)而影響了卵母細(xì)胞的正常發(fā)育。以上結(jié)果表明GV期為驢卵母細(xì)胞玻璃化冷凍的最佳時(shí)期,玻璃化冷凍影響了驢卵母細(xì)胞亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)并造成母源基因表達(dá)下調(diào),可能因此降低了其成熟與發(fā)育潛能。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S822

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2663034