【摘要】：禽腺病毒(Fowl Adenovirus,FAdV)屬于腺病毒科禽腺病毒屬,是雞、鴨等禽體內(nèi)常見的傳染性病毒。根據(jù)不同的特異性抗原將FAdV分為3個(gè)群,目前雞群中主要流行Ⅰ亞群FAdV。2013年以來,在我國(guó)山東、河南等省的部分地區(qū)雞群中發(fā)生了以心包積液和包涵體肝炎為特征的雞心包積液-肝炎綜合征,大量流行病學(xué)調(diào)查證實(shí)該病病原為Ⅰ亞群血清4型的FAdV(FAdV-4)。究竟是什么原因造成了FAdV-4的在我國(guó)的流行和爆發(fā)目前還沒有確切的定論,本實(shí)驗(yàn)前期研究在雞新城疫弱毒中鑒定到FAdV-4的污染,推測(cè)疫苗污染可能是該病傳播的重要原因之一。那么弱毒疫苗中污染的FAdV-4與流行毒株是否一致?其基因組特點(diǎn)是怎樣的?FAdV廣泛存在于多種禽類的消化道和呼吸道中,可保持潛伏感染,一般情況下不表現(xiàn)發(fā)病,但是當(dāng)受到應(yīng)激或者有其他病原存在時(shí)便很容易出現(xiàn)癥狀,在生產(chǎn)中我們發(fā)現(xiàn)某些疑似感染FAdV的雞群在免疫雞新城疫弱毒疫苗等疫苗后反而出現(xiàn)發(fā)病,弱毒疫苗免疫對(duì)FAdV在體內(nèi)的發(fā)病存在何種影響?針對(duì)上述問題,本研究在解析FAdV-4疫苗污染株基因組基礎(chǔ)上通過系統(tǒng)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察了新城疫弱毒疫苗LaSota株與FAdV在雞體內(nèi)的協(xié)同致病作用。為了研究弱毒疫苗中污染的FAdV-4分離株的全基因組特點(diǎn),本研究通過擴(kuò)增測(cè)序得到了全基因組序列后,應(yīng)用MEGA、Editseq等生物信息學(xué)軟件對(duì)FAdV-N22分離株的遺傳進(jìn)化關(guān)系以及編碼區(qū)部分序列進(jìn)行分析。結(jié)果顯示,該毒株共有43段蛋白質(zhì)編碼區(qū)(CDS),全基因組遺傳進(jìn)化樹顯示與血清4型屬于同一分支,并且分析Hexon、Fiber 1、Fiber 2和Penton這些基因和其他毒株之間的差異。其中,Hexon的基因同源性為98.5%-99.9%,Fiber 1的基因同源性為95.9%-99.8%,Fiber 2的基因同源性為96.8%-99.7%,Penton的基因同源性達(dá)到了99.2%-99.6%,并且系統(tǒng)進(jìn)化樹分析顯示,該毒株與國(guó)內(nèi)流行的SD1601、NIVD2、GX-1等毒株具有極高的同源性,同時(shí)處于同一進(jìn)化分支。為觀察垂直傳播感染的FAdV-4和新城疫弱毒疫苗在體內(nèi)存的協(xié)同致病作用,本研究隨機(jī)選擇50枚SPF雞胚通過卵黃囊接種模擬FAdV-4垂直傳播感染,同時(shí)選取等量SPF雞胚通過相同方式接種PBS用作對(duì)照。待孵化出雛后,于接毒組和對(duì)照組各取20只SPF雞于7日齡免疫新城疫IV系弱毒疫苗(LaSota株),同時(shí)各組其余雞以相同方式接種等量PBS作為對(duì)照。結(jié)果顯示FAdV-4感染的雛雞在免疫LaSota株后更容易發(fā)生嚴(yán)重的生長(zhǎng)抑制和免疫器官損傷,造成了更高的死亡率,說明免疫LaSota株能顯著提升垂直傳播感染的FAdV-4致病性。本研究證明免疫LaSota弱毒疫苗后疫苗株與垂直傳播感染的FAdV-4在雞體內(nèi)的協(xié)同作用不僅增強(qiáng)了FAdV-4對(duì)SPF雞的致病力,對(duì)LaSota疫苗的免疫保護(hù)力也產(chǎn)生了一定的不良影響,提示我們對(duì)于疾病的控制不能僅僅依賴疫苗免疫,還要加強(qiáng)對(duì)種源的疾病凈化。
【圖文】：

生物學(xué)特點(diǎn)形態(tài)學(xué)特點(diǎn)為 20 面體對(duì)稱結(jié)構(gòu)，無囊膜，其直徑約為 70-90nm。腺病 個(gè)六鄰體構(gòu)成，中間包著直徑 60-65nm 的髓芯，252 個(gè)殼粒列在三角形的面上。稱為纖絲的纖突附在頂點(diǎn)殼粒上（毒有兩根纖絲，一般情況下，兩根纖絲的長(zhǎng)度相近，并且抗的血清型纖絲長(zhǎng)度相近而存在關(guān)聯(lián)。電鏡下觀察病毒粒子呈因?yàn)?DNA 含量和病毒蛋白存在差異，一共發(fā)現(xiàn)了 4 種類型均不相同。一般通過免疫組化或者細(xì)胞化學(xué)的方法可以在細(xì)的組織上觀察到可以用于禽腺病毒診斷的大核內(nèi)包涵體。病個(gè)病毒粒子的 11.3%-13.5%。

蛋白則與病毒免疫逃避機(jī)制存在關(guān)聯(lián)；位于早四區(qū)的 E4 產(chǎn)物則與核酸復(fù)制、宿主細(xì)生物拼接與合成、基因表達(dá)和轉(zhuǎn)錄子拼接終止等活動(dòng)與有關(guān)。但是，禽腺病毒因?yàn)槠浞?E3 結(jié)構(gòu)，不會(huì)編碼相關(guān)蛋白，主要原因是因?yàn)?pⅧ蛋白基因的結(jié)束號(hào)信號(hào)與 L5 開信號(hào)之間只有大約 200 個(gè)脫氧核糖核苷酸，兩者等同于直接相連，不過仍然能發(fā)現(xiàn) 退化留下的保守 PolyA 和 TATABox 序列痕跡（Chiocca et al., 1996），CELO 也同樣沒有發(fā)現(xiàn) E3 區(qū)域（Chiocca et al., 1996）腺病毒 8 型經(jīng)過測(cè)序后發(fā)現(xiàn)沒有 E1,E2 和 區(qū)域（Corredor et al., 2008）通過相互比較 FAdV-1、FAdV-2、FAdV-4、FAdV-8、FAdV和 FAdV-10 發(fā)現(xiàn)他們的基因組處于左端點(diǎn)位置的具有較高的氨基酸同源性，說明 OR之間功能性狀十分相似。同時(shí)對(duì)右端的序列進(jìn)行比較的時(shí)候發(fā)現(xiàn)它們之間有高達(dá) 85%右的核苷酸和氨基酸同源性（Corredor et al., 2008）。FAdV 還有兩個(gè) fiber 基因，fibe對(duì)腺病毒在機(jī)體內(nèi)復(fù)制起著至關(guān)重要的作用，fiberⅡ缺失會(huì)造成病毒自身的復(fù)制能力減弱，使得感染的宿主變少。同時(shí)，，fiberⅡ基因?qū)ο俨《驹鲋称鸬搅吮夭豢缮俚淖饔茫ㄋ妓嫉龋?012）。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2661539