【摘要】：胚胎期以及剛出殼的雛雞處于其生命最脆弱的時(shí)期,該階段發(fā)育還不完善,抵抗力較差,容易受到外界各種因素影響而導(dǎo)致疾病發(fā)生,造成孵化率低、健雛率低,對(duì)孵化場(chǎng)和種雞場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益產(chǎn)生很大影響。因此,調(diào)查研究目前導(dǎo)致雛雞胚胎病的主要病原菌的種類,對(duì)雛雞胚胎病和提高雛雞的成活率具有重要的意義。1、為調(diào)查病、弱感染雛雞胚胎的主要病原菌,采集了90只剛出殼的病、弱雛雞。解剖觀察其病理變化,從肝臟分離細(xì)菌,觀察細(xì)菌的菌落菌體形態(tài),提取分離菌株的DNA、進(jìn)行16SrDNA基因序列的擴(kuò)增并測(cè)序,再將測(cè)序結(jié)果與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)的標(biāo)準(zhǔn)株序列比對(duì),最終將比對(duì)結(jié)果與菌落菌體形態(tài)相結(jié)合,對(duì)分離菌株進(jìn)行鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)病、弱雛雞腹圍較大;解剖發(fā)現(xiàn)皮下膠凍樣,卵黃吸收不良,肝呈土黃色;顯微鏡下顯示肝充血,脂肪變性。從病、弱雛雞的肝臟分離出菌株56株,分離率為62.2%(56/90)。其中糞腸球菌分離率為46.4%(26/56),大腸桿菌為16.1%(9/56),金色葡萄球菌為14.3%(8/56),奇異變形桿菌為8.9%(5/56),鮑氏不動(dòng)桿菌為5.3%(3/56),沼澤考克氏菌為3.6%(2/56),檸檬酸細(xì)菌屬為1.8%(1/56),無色桿菌為1.8%(1/56),地衣芽胞桿菌為1.8%(1/56)。結(jié)果提示剛出殼雛雞感染的細(xì)菌有9種,主要有糞腸球菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌,為雛雞胚胎細(xì)菌感染的防治奠定了基礎(chǔ)。2、為探究糞腸球菌毒力的大小及耐藥性,本試驗(yàn)測(cè)定了糞腸球菌對(duì)雞胚的半數(shù)致死量,并對(duì)糞腸球菌做了8類抗生素15種藥物的藥敏試驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)10倍系列濃度梯度糞腸球菌液,尿囊絨毛膜接種后,雞胚的存活時(shí)間和死亡率呈明顯的劑量依賴,糞腸球菌對(duì)雞胚半數(shù)致死量為3.03×10~3cfu/mL;藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)雞源糞腸球菌對(duì)頭孢類藥物有較強(qiáng)的耐藥性,對(duì)青霉素和萬古霉素較敏感。成功建立了糞腸球菌雞胚毒力模型,同時(shí)篩選出糞腸球菌有效藥物。3、為建立一種快速檢測(cè)雞源糞腸球菌的方法,參照GenBank中已發(fā)表的雞糞腸球菌全基因組,采用Primer Express 5.0軟件設(shè)計(jì)了一對(duì)特異引物,進(jìn)行了敏感性、特異性、重復(fù)性試驗(yàn),并通過臨床組織樣品檢測(cè)評(píng)價(jià)其臨床實(shí)用性。結(jié)果顯示所建立的方法標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)R~2=0.955;該方法靈敏度高,可檢測(cè)糞腸球菌的最低限度可達(dá)10~1 cfu/mL;特異性強(qiáng),不與其他雞源致病菌發(fā)生交叉反應(yīng);重復(fù)性試驗(yàn)中變異系數(shù)小于5%,比較穩(wěn)定。將患雛肝臟組織塊提取的DNA作模板,經(jīng)建立的SYBR GreenⅠLC-PCR方法檢測(cè),結(jié)果出現(xiàn)了特異性擴(kuò)增曲線。此方法可用于臨床上糞腸球菌的檢測(cè)。
【圖文】：

2-1-1 皮下膠胨樣物質(zhì) 2-1-2 肝臟土黃色 2-1-3 卵黃吸收不良圖 2-1 剖檢病變Fig.2-1 Biopsy lesion.2 顯微鏡病變竇狀隙明顯，充滿紅細(xì)胞（圖 2-2-1），肝細(xì)胞腫脹，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大小不，細(xì)胞索紊亂，竇狀隙不明顯（圖 2-2-2）。2-2-1 肝臟充血 2-2-2 水泡變性圖 2-2 肝臟 HE 染色 40×Fig.2-2 HE staining of Liver 40×

剖觀察到的癥狀大致相同：皮下有膠胨樣物質(zhì)（圖 2-1-1），肝臟呈土-1-2），卵黃吸收不良（圖 2-1-3）。2-1-1 皮下膠胨樣物質(zhì) 2-1-2 肝臟土黃色 2-1-3 卵黃吸收不良圖 2-1 剖檢病變Fig.2-1 Biopsy lesion2 顯微鏡病變竇狀隙明顯，充滿紅細(xì)胞（圖 2-2-1），，肝細(xì)胞腫脹，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大小，細(xì)胞索紊亂，竇狀隙不明顯（圖 2-2-2）。
【學(xué)位授予單位】：河北工程大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S852.61

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