【摘要】：建立了飼料中8種脂溶性著色劑(對位紅、蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ、蘇丹紅7B、蘇丹紅G、蘇丹黃)含量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。飼料樣品中脂溶性著色劑經(jīng)乙腈提取,離心后上清液采用分散固相萃取凈化,凈化液稀釋后進(jìn)行LC-MS/MS分析。樣品測定時(shí)采用Acquity BEH C18色譜柱進(jìn)行色譜分離,以0.2%甲酸溶液-乙腈作為流動相進(jìn)行梯度洗脫,電噴霧正離子(ESI+)模式電離,多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式檢測,同位素稀釋內(nèi)標(biāo)法定量。8種脂溶性著色劑在1.0~200μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)(r~2)均大于0.998;在飼料中的方法檢出限為5.0μg/kg,定量下限為10μg/kg。在10,50,500μg/kg加標(biāo)濃度下8種脂溶性著色劑的回收率為102%~111%,批內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為2.8%~8.0%,批間RSD為2.8%~7.8%。該方法能滿足飼料樣品中脂溶性著色劑監(jiān)控的需要。
【圖文】：

*2230SudanⅡ－D6(蘇丹紅Ⅱ－D6)283.0162.0*2222SudanⅢ－D6(蘇丹紅Ⅲ－D6)359.076.9*2436SudanⅣ－D6(蘇丹紅Ⅳ－D6)387.091.0*4038SudanredG－D3(蘇丹紅G－D3)282.0156.0*2026SudanyellowD5(蘇丹黃－D5)231.0120.9*1228*quantitativeion1.4加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)樣品處理同“1.2”，加標(biāo)濃度為10，50，500μg/kg，內(nèi)標(biāo)物的濃度為200μg/kg。稱樣后加入標(biāo)準(zhǔn)溶液，渦旋混勻放置0.5h后進(jìn)行樣品處理。2結(jié)果與討論2.1質(zhì)譜條件的優(yōu)化圖1空白飼料中蘇丹紅Ⅳ3個(gè)子離子(A)及蘇丹紅Ⅱ－D62個(gè)子離子(B)的MＲM色譜圖Fig.1MＲMchromatogramsofsudanⅣ(A)andsudanⅡ－D6(B)inblankfeed由于蘇丹紅和對位紅分子中含有氮原子，易帶正電荷，因此選擇ESI+離子模式。為優(yōu)化質(zhì)譜條件，配制含8種著色劑濃度均為100ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液(同時(shí)配制相同濃度的6種內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液)。利用該標(biāo)準(zhǔn)溶液在全掃描方式下，優(yōu)化毛細(xì)管電壓、錐孔電壓、裂解溫度、脫溶劑氣流速等參數(shù)，，得到待測物最強(qiáng)的分子離子峰。在上述質(zhì)譜條件下，對選定的母離子進(jìn)行子離子掃描，優(yōu)化碰撞能量等參數(shù)。再經(jīng)儀器自帶Intellistart軟件優(yōu)化和空白樣品測定后，確定8種脂溶性著色劑和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)譜條件(見表1)。其中蘇丹紅Ⅳ根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［13，16］及自帶Intellistart軟件優(yōu)化后起初選擇m/z381.0＞91.0和m/z381.0＞106.0兩個(gè)離子對，但在分析時(shí)，m/z381.0＞106.0離子對有一定的干擾峰存在(圖1A)，對低濃度(添加10μg/kg)樣品的定性定量會造成較大誤差，因此本文使用靈敏度能達(dá)到要求且無干擾的m/z381.0＞224.5離子。對于6個(gè)內(nèi)標(biāo)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液采用同樣的方法優(yōu)化質(zhì)譜條件，優(yōu)化后蘇丹紅

(含0.2%甲酸溶液)－乙腈的比例為5∶95。結(jié)果顯示，采用乙腈提取液直接上樣或經(jīng)N-丙基乙二胺(PSA)凈化后直接上樣時(shí)，8種著色劑的抑制基質(zhì)效應(yīng)均非常強(qiáng)，如對位紅直接上樣和50mgPSA凈化后的抑制率分別達(dá)80%和50%。為減少基質(zhì)抑制效應(yīng)，同時(shí)簡化提取凈化步驟，實(shí)驗(yàn)嘗試?yán)脙煞矫娲胧└纳苹|(zhì)效應(yīng):①用梯度洗脫增加洗脫時(shí)間，減少單位時(shí)間雜質(zhì)量;②在上樣液中加入一定的甲酸溶液，減少雜質(zhì)總量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)基質(zhì)效應(yīng)得到改善，其中對位紅直接上樣和50mgPSA凈化后的抑制率分別下降至50%和20%，實(shí)驗(yàn)最終確定的梯度洗脫條件見“1.3”。圖2不同PSA用量下8種脂溶性著色劑的基質(zhì)效應(yīng)Fig.2MatrixeffectsofeightfatsolublecolorantsunderdifferentamountsofPSA2.3前處理?xiàng)l件的選擇對于食品中的蘇丹紅和對位紅，通常采用在樣品中加入乙腈、正己烷、甲醇、乙醇、二氯甲烷、丙醇、正己烷－丙酮等有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，其中前2種溶劑最為常用。而當(dāng)使用乙腈提取時(shí)，溶劑與組織樣品的相容性較好，滲透力強(qiáng)，兼有去蛋白和一定的脫脂功能，同時(shí)考慮到方法最終用同位素內(nèi)標(biāo)定量，為節(jié)省溶劑用量，采用5g飼料樣品(加標(biāo)濃度1.0mg/kg)考察了25mL乙腈條件下8種脂溶性色素的提取效率(以外標(biāo)法定量)。結(jié)果顯示，極性越低的色素回收率相對較低，但所有著色劑的回收率均在70%以上，因此最終采用25mL乙腈對5g樣品進(jìn)行提齲經(jīng)提取后未經(jīng)基質(zhì)分散固相萃取凈化及加入不同PSA量凈化的基質(zhì)效應(yīng)結(jié)果見圖2，從圖2可知未凈化時(shí)各著色劑的基質(zhì)抑制效應(yīng)較強(qiáng)，當(dāng)PSA用量達(dá)到50mg及以上時(shí)，飼料的基質(zhì)抑制效應(yīng)已降到可接受的范圍(斜率比值介于0.8～1.2之間)，因此最終確定PSA的用量為50mg。2.4線性實(shí)驗(yàn)取10μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，用0.2%甲酸－乙腈(15∶85)混合溶液逐級稀釋配制濃度分別?

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