【摘要】：雞傳染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)引起的主要危害雛雞的一種急性、致死性、高度接觸性傳染病。IBDV先后演化出了經(jīng)典毒株(classic IBDV,cIBDV)、變異毒株(ariant IBDV,vIBDV)以及超強(qiáng)毒株(very virulent IBDV,vv IBDV),vvIBDV的高致死率給世界養(yǎng)禽業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。vvIBDV感染能夠引起典型的炎癥反應(yīng),造成法氏囊等免疫器官出血、損傷甚至萎縮,以及導(dǎo)致肌肉、腺胃等組織的不同程度炎癥,但當(dāng)前對(duì)vvIBDV觸發(fā)炎癥甚至導(dǎo)致死亡的過程和分子基礎(chǔ)尚不明確。本研究首先從臨床、病理和分子水平檢測(cè)了vvIBDV觸發(fā)的炎癥反應(yīng)。vv IBDV Gx毒株感染SPF雞后,臨床癥狀明顯,發(fā)病迅速,感染后3-5天呈現(xiàn)死亡高峰,此時(shí)期的剖檢病變最為典型,表現(xiàn)為多器官炎癥,以法氏囊炎癥最為嚴(yán)重,出血、黃染、萎縮,有炎性滲出。顯微組織病理學(xué)檢查顯示,感染雞的法氏囊濾泡結(jié)構(gòu)完整性受損,有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),B細(xì)胞崩解為細(xì)胞碎片并被巨噬細(xì)胞吞噬。在分子水平上,熒光定量RT-PCR檢測(cè)出感染后脾臟中炎癥因子IL-1β和IL-18表達(dá)上調(diào),ELISA檢測(cè)出血清中IL-1β和IL-18含量上升。以上結(jié)果表明,炎癥是vvIBDV致病的重要過程。損傷相關(guān)分子模式(damage associated moleculer pattern,DAMP)與炎癥關(guān)系密切。本研究進(jìn)一步建立了熒光定量RT-PCR方法,并檢測(cè)了vvIBDV感染在觸發(fā)炎癥的同時(shí)對(duì)六種DAMP分子的影響。研究發(fā)現(xiàn),多數(shù)DAMP分子在脾臟中呈上調(diào)表達(dá),在法氏囊中呈下調(diào)表達(dá),這與IL-1β和IL-18的表達(dá)變化情況呈正相關(guān)。這提示,DAMP可能與IBDV致炎密切相關(guān)。進(jìn)而,作為DAMP的重要成員,重點(diǎn)檢測(cè)了高遷移率蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)在vvIBDV致炎過程中的變化:HMGB1在血清中以及法氏囊炎性滲出液中均呈現(xiàn)上調(diào)。同步做的另一個(gè)不同毒力IBDV的感染試驗(yàn)也證實(shí)了上述數(shù)據(jù)。據(jù)此我們推測(cè),HMGB1在vvIBDV致炎過程中可能發(fā)揮重要作用。為證實(shí)這一假說,本研究建立了vvIBDV體外感染B淋巴細(xì)胞(DT40細(xì)胞)的模型。在此基礎(chǔ)上,研究發(fā)現(xiàn),vvIBDV Gx株感染DT40,導(dǎo)致HMGB1在細(xì)胞內(nèi)含量減少,大量釋放到細(xì)胞外。細(xì)胞內(nèi)HMGB1發(fā)揮了抗IBDV復(fù)制的作用,HMGB1的上調(diào)表達(dá)、敲低、功能被抑制對(duì)IBDV復(fù)制的影響均證明了這一點(diǎn)。釋放到細(xì)胞外的HMGB1作為炎癥介質(zhì)發(fā)揮了促炎作用。HMGB1蛋白體外刺激雞巨噬細(xì)胞系HD11后,細(xì)胞上清中IL-1β和IL-18增多;同時(shí),HMGB1顯著提高了HD11細(xì)胞的NLRP3炎癥小體中casepase-1激酶活性。這提示了vvIBDV觸發(fā)炎癥的可能機(jī)制,vvIBDV感染法氏囊B淋巴細(xì)胞觸發(fā)了HMGB1的釋放,提高了HMGB1在局部組織和血液中的含量,HMGB1進(jìn)而參與激活巨噬細(xì)胞的NLRP3炎癥小體,提高了casepase-1激酶活性,促進(jìn)了IL-1β和IL-18的成熟,進(jìn)而促進(jìn)了炎癥反應(yīng)。本研究多角度檢測(cè)和證明了vv IBDV感染導(dǎo)致了炎癥發(fā)生,揭示了HMGB1在vvIBDV感染中抗病毒和促炎的的重要作用,并進(jìn)一步探索了HMGB1促炎的分子機(jī)制。本研究對(duì)深入認(rèn)知IBDV的致病過程以及探索更有效的疫病防控策略具有重要意義。
【圖文】：

論文 第二章 IBDV 超強(qiáng)表 2-8 vvIBDV Gx 感染 SPF 雞的非淋巴組織剖檢變化mmon organs' anatomicopathological changes of SPF chicks infected wi肝臟 腎臟 腺胃 — — — 呈土黃色 —內(nèi)部黏膜表面點(diǎn)狀出血大，呈土黃色腫大，呈大理石斑樣病變內(nèi)部黏膜表面出血，腺泡腫脹，擠壓有紅黃色膿性液體流出表— 腫大，呈土黃色 — — — — — — — — — — 器官病變。感染雞的法氏囊萎縮情況超強(qiáng)毒 Gx 感染雞的 BBIX 進(jìn)行計(jì)算和統(tǒng)計(jì)，結(jié)果表明，從；4-7 d p.i.，BBIX 降至 0.7 以下，法氏囊完全萎縮（圖 2-

空白對(duì)照；B，感染后第 12h；C，感染后第 24h；D，感染后第 36h；E，感染后第 48h；F，感染后第 72hA. Negative control; B. 12 h p.i.; C. 24 h p.i.; D. 36 h p.i.; E. 48h p.i.; F. 72 h p.i.圖 2-3 vvIBDV Gx 感染雞法氏囊病理切片F(xiàn)ig.2-3 Pathological section of bursa of Fabricius of chicks infected with vvIBDV Gx2.2.1.3 vvIBDV Gx 在法氏囊中的復(fù)制動(dòng)力學(xué)曲線法氏囊中 Gx 株的增殖曲線表明，1 d p.i.時(shí)可以在法氏囊中檢測(cè)到病毒；2 d p.i.，病毒達(dá)到增殖高峰；3-4 d p.i.仍保持較高的病毒拷貝數(shù)；隨后，病毒拷貝數(shù)下降（圖 2-4）。結(jié)果表明，Gx感染 SFP 雞后，，增殖迅速，5 d p.i.開始出現(xiàn)的下降趨勢(shì)可能是由于天然免疫和炎癥反應(yīng)對(duì)病毒的抵抗作用。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S858.31

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 譚中良;;雞傳染性法氏囊炎的防治[J];畜牧與飼料科學(xué);2008年02期

2 畢英佐;廣東地區(qū)雞傳染性囊病的研究[J];華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);1985年01期

3 周蛟,劉福致,陳麗永,王淑娟;北京地區(qū)雞傳染性法氏囊病病原分離[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;1982年07期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 馮雪瑩;小鼠巨噬細(xì)胞吞噬凋亡細(xì)胞的炎癥調(diào)節(jié)及性別差異[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 李湘波;HMGB1與自噬信號(hào)Beclin1在急性胰腺炎中的相關(guān)性研究[D];中南大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2653882