發(fā)布時間：2020-05-07 21:00

【摘要】：沙門氏菌(Salmonella)是引起食源性疾病的首要因素,被全世界認(rèn)為是首選控制的食源性致病菌之一。人和動物感染Salmonella后可引起嚴(yán)重的胃腸炎導(dǎo)致食物中毒,感染嚴(yán)重者還能導(dǎo)致其死亡,是危害人類健康的重大隱患,造成了巨大的經(jīng)濟損失。由于Salmonella表型特征并不穩(wěn)定,因此利用表型分型所能獲得的菌株之間的相關(guān)信息并不詳盡,無法鑒別生化特性、血清型相同的不同Salmonella菌株。為了能夠更好地對Salmonella進行流行病學(xué)調(diào)查和溯源,更快地應(yīng)對食品安全的緊急情況,具有高通量、靈敏度高、重復(fù)性好、便于推廣等優(yōu)點的分子分型技術(shù)將成為必需的技術(shù)。本課題利用兩種基因分型技術(shù)分別對廣西地區(qū)市售生鮮肉源的Salmonella優(yōu)勢血清型分離株進行基因分型,目的是尋找一種能夠?qū)κ称肺廴镜腟almonella進行快速溯源的分子技術(shù)。同時對近年來廣西生鮮肉源Salmonella的喹諾酮類藥物的耐藥現(xiàn)狀進行研究。本課題選取實驗室保存的2011-2016年從廣西部分地區(qū)超市及自由市場售賣的生鮮雞肉、鴨肉、豬肉、牛肉中分離的Salmonella兩個優(yōu)勢血清型S.derby和S.agona之71株和21株進行基于腸桿菌基因間重復(fù)共有序列(enterobacterial repetitive intergenic consensus,ERIC)的聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)的分析,并根據(jù)分離株的年份、地域及ERIC-PCR基因型選取13個代表菌株進行多位點序列分型(multilocus sequence typing,MLST)的分析。結(jié)果 92 株Salmonella分離株的ERIC-PCR的指紋圖譜均在250bp處得到沙門菌屬的特異性擴增條帶;71株S.derby指紋圖譜的相似系數(shù)在0.74～1.00之間,可分為6個基因型,其中Ⅰ和Ⅲ型為優(yōu)勢基因型,分別占了 54.93%(39/71)和 19.72%(14/71);21 株S.agona指紋圖譜的相似系數(shù)在0.68～1.00之間,可分為6個基因型,其中基因型A(28.57%,6/21)和B(33.33%,7/21)為優(yōu)勢基因型;進一步研究發(fā)現(xiàn),同一市場里不同種類的肉品存在同一Salmonella的污染、同一市場里同種類的肉品存在不同的Salmonella的污染、同一市場里不同采樣時間的同種類肉品存在同一Salmonella的污染等情況;MLST基因分型的研究結(jié)果表明,7株S.derby均為ST40(19-20-3-20-5-22-22)、6 株 S.agona 均為 ST13(3-3-7-4-3-3-7)。本課題還對71株S.derby進行包括萘啶酸、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、諾氟沙星、加替沙星5種常用喹諾酮類抗生素耐藥性研究。首先,通過常規(guī)藥敏紙片(K-B)法對菌株進行耐藥表型的檢測,然后對質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮類耐藥(plasmid mediated quinolone resistance,PMQR)之 qnrA、qnrB、qnrS、aac(6')-lb-cr、oqxA、oqxB、qepA共7種基因分別進行PCR檢測,并對gyrA和parC基因的喹諾酮類耐藥決定區(qū)進行測序并分析其氨基酸位點突變情況,最后將耐藥表型與耐藥基因進行關(guān)聯(lián)分析。結(jié)果顯示,71株受試S.derby對第一代的喹諾酮類藥物萘啶酸之耐藥性嚴(yán)重,耐藥率為19.72%、不敏感率為43.66%;對第三代的環(huán)丙沙星、氧氟沙星、諾氟沙星敏感(敏感率分別為71.83%、74.65%、70.42%),但其中介率也比較高(分別為23.94%、25.35%、25.35%);對第四代的加替沙星則最敏感(敏感率為84.51%),中介率為14.08%。有76.06%(54/71)的菌株檢測到了 PMQR基因,其中oqxA檢出率最高(53.52%)、oqxB檢出率次之(49.30%)、qnr與aac(6')-Ib-cr的檢出率相近,分別為 29.58%(21/71)、25.35%(18/71),qnrA與qnrB基因檢出率較低,分別為4.23%(3/71)、5.63(4/71),未檢測到qepA基因;攜帶2種PMQR基因菌株的的百分比最高,占菌株數(shù)的 32.39%(23/71),有 12.68%(9/71)、11.27%(8/71)的菌株分別攜帶3種、4種PMQR基因,oqxA和oqxB兩種基因與對萘啶酸耐藥的表型符合率較高,都達到了 70%以上,aac(6')-lb-cr和qnrS基因的符合率都在40%左右;14株對萘啶酸耐藥的菌株中,有92.86%(13/14)的菌株在gyrA或parC兩個基因共檢測到21個氨基酸突變位點,其中g(shù)yrA的D87N和S83I兩個位點突變分別有35.71%(5/14)和 21.43%(3/14),parC的主要位點突變?yōu)?T57S(42.86%,6/14)和 T57V(21.43%,3/14)。本課題研究結(jié)果證明,廣西地區(qū)生鮮肉源Salmonella基因型呈現(xiàn)多樣性,表明Salmonella的污染源廣泛;ERIC-PCR分型技術(shù)可用于生鮮肉污染的Salmonella之溯源;Salmonella對喹諾酮類的耐藥現(xiàn)象較嚴(yán)重,gyrA和parC基因的位點突變是Salmonella對喹諾酮類藥物產(chǎn)生耐藥的主要機制,而PMQR基因的攜帶也是Salmonella產(chǎn)生耐藥的一個重要機制。
【圖文】：

邐ｆ邐ＩＩ逡逑圖２－１邋７１株鮮肉源如分離株遺傳關(guān)系聚類樹狀圖逡逑Ｆｉｇ．２－１邋Ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ邋ｏｆ邋ｇｅｎｅｔｉｃ邋ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ邋ｏｆ邋７１邋５＊．邋ｄｅｒｂｙ邋ｉｓｏ

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【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S852.61

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

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6 劉U，

本文編號：2653539