【摘要】：豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS),又被稱(chēng)為藍(lán)耳病,是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRS Virus,PRRSV)引起的一種危害養(yǎng)豬業(yè)的病毒性傳染病,主要引起母豬的繁殖障礙、公豬的精液品質(zhì)下降、初生仔豬的死亡以及其它年齡豬的呼吸系統(tǒng)疾病。天然免疫是宿主抵抗病毒感染的第一道防線,但在與宿主的共進(jìn)化過(guò)程中,病毒往往會(huì)發(fā)展各種機(jī)制抵抗宿主的天然免疫,達(dá)到成功感染的目的。以前的研究表明,PRRSV感染能夠拮抗I型干擾素(Interferons,IFNs)的產(chǎn)生,而且PRRSV編碼的多種蛋白,包括非結(jié)構(gòu)蛋白nsp1,nsp2,nsp4,nsp11和結(jié)構(gòu)蛋白N蛋白,具有拮抗干擾素產(chǎn)生的能力,但其分子機(jī)制尚不完全清楚。N蛋白是PRRSV編碼的核衣殼蛋白,也是PRRSV的主要結(jié)構(gòu)蛋白,在PRRSV的感染、致病和免疫調(diào)節(jié)中扮演著十分重要的作用。本研究針對(duì)PRRSV N蛋白,探討其拮抗IFN-β產(chǎn)生的分子機(jī)制,主要研究?jī)?nèi)容如下:1.超表達(dá)PRRSV N蛋白抑制IFN-β產(chǎn)生和IRF3激活將PRRSV N蛋白的真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞,在仙臺(tái)病毒(Se V)的刺激下,采用IFN-β啟動(dòng)子的雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)IFN-β的產(chǎn)生,發(fā)現(xiàn)超表達(dá)PRRSV N蛋白顯著抑制IFN-β的啟動(dòng)子激活。IRF3是干擾素信號(hào)通路中最關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子,我們采用同樣的策略分析了N蛋白對(duì)IRF3的影響,發(fā)現(xiàn)超表達(dá)N蛋白也顯著抑制IRF3激活,并且呈劑量依賴(lài)性。2.PRRSV N蛋白作用于RIG-I/MDA5信號(hào)通路的靶點(diǎn)分析RIG-I/MDA5信號(hào)通路在RNA病毒激活干擾素產(chǎn)生中具有十分重要的作用。為了研究PRRSV N蛋白是否拮抗RIG-I/MDA5信號(hào)通路以及其作用的靶點(diǎn),通過(guò)共轉(zhuǎn)染PRRSV N蛋白的真核表達(dá)質(zhì)粒和RIG-I/MDA5通路中各受體分子(RIG-I、MDA5)、接頭蛋白(IPS-1)、蛋白激酶(TBK-1、IKKε)和轉(zhuǎn)錄因子(IRF3)的真核表達(dá)質(zhì)粒,利用雙熒光素酶系統(tǒng)檢測(cè)IFN-β的啟動(dòng)子活性。結(jié)果表明,PRRSV N蛋白可以拮抗RIG-I、MDA5、IPS-1、TBK-1、IKKε和IRF3介導(dǎo)的IFN-β啟動(dòng)子激活。更重要的是,PRRSV N蛋白還可以拮抗IRF3顯性突變體IRF3-5D介導(dǎo)的IFN-β啟動(dòng)子激活,提示PRRSV作用RIG-I/MDA5通路的靶點(diǎn)在IRF3或IRF3下游。通過(guò)間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步分析了N蛋白的亞細(xì)胞定位,發(fā)現(xiàn)PRRSV N蛋白呈現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核穿梭分布,表明其具有在細(xì)胞核內(nèi)靶向IRF3的可能。3.PRRSV N蛋白抑制IFN-β產(chǎn)生的關(guān)鍵功能域分析為了確定PRRSV N蛋白抑制IFN-β產(chǎn)生的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域,通過(guò)IFN-β啟動(dòng)子的雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng),分別檢測(cè)了N蛋白的不同區(qū)域缺失突變體(6個(gè)N-端缺失突變體和5個(gè)C-端缺失突變體)抑制IFN-β產(chǎn)生的能力。結(jié)果顯示:PRRSV N蛋白的aa37-57和aa69-123是抑制Se V誘導(dǎo)的IFN-β激活的關(guān)鍵區(qū)域,而aa37-57正好包含N蛋白的核定位信號(hào)序列。
【圖文】：

2圖 1-2 PRRSV N 蛋白結(jié)構(gòu)圖解 (Music and Gagnon, 2010)Fig. 1-2 Schematic presentation of PRRSV nucleocapsid (N) proteinPRRSV N 蛋白的 C 端被認(rèn)為是二聚體結(jié)構(gòu)域 (Dimerization domain) (Spilm

圖 1-1 PRRSV 基因組組成 (Castelo et al., 2015)Fig. 1-1 PRRSV genome organization1.2 PRRSV N 蛋白簡(jiǎn)介
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S855.3

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 吳國(guó)平;郭川;曹敏杰;劉冰心;梁銀龍;蘇文金;;原核高效表達(dá)豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白的特性及應(yīng)用[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2007年02期

2 張林吉;任士飛;李明義;杜元釗;劉秀梵;;豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白的高效表達(dá)及鑒定[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2009年02期

3 趙曉巖;劉長(zhǎng)軍;;反轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增雞傳染性支氣管炎病毒核衣殼蛋白基因[J];中國(guó)畜禽傳染病;1993年05期

4 張春嵋,吳祖建,林奇英,謝聯(lián)輝;水稻草矮病毒核衣殼蛋白基因克隆及在大腸桿菌中的表達(dá)[J];中國(guó)病毒學(xué);2000年02期

5 姜騫;劉懷然;張齡;朱洪偉;曲連東;;仙臺(tái)病毒核衣殼蛋白基因的克隆與原核表達(dá)[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào);2006年02期

6 劉成倩;肖長(zhǎng)峰;易建中;關(guān)平原;吳雙林;陳斌;張?zhí)鞈c;;豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白基因的克隆與原核表達(dá)[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年22期

7 王星星;張中文;王晶;郭瑋;趙劍利;吳國(guó)娟;;豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白刺激小鼠產(chǎn)生抗體的研究[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2010年07期

8 周繼勇,丁紅梅,程麗琴,Jimmy Kwang;傳染性支氣管炎病毒核衣殼蛋白基因變異及在大場(chǎng)桿菌中的表達(dá)(英文)[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版);2003年01期

9 邱德新,陳煥春,萬(wàn)紹貴;豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白基因的克隆與原核表達(dá)研究[J];中國(guó)病毒學(xué);2003年02期

10 楊葉民;林剛;孫濤;;雞傳染性支氣管炎病毒核衣殼蛋白基因的克隆、表達(dá)及應(yīng)用[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)科學(xué)版);2006年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 陳義平;盛祖勛;趙永剛;王寶安;王志亮;;印第安納型水泡性口炎病毒核衣殼蛋白基因在畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)[A];全國(guó)人畜共患病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

2 王星星;郭瑋;王晶;王彥英;張中文;陸彥;吳國(guó)娟;;豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白的表達(dá)、純化和單抗的制備[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)藥理毒理學(xué)分會(huì)第十次研討會(huì)論文摘要集[C];2009年

3 譚菲菲;張榮;韋祖樟;袁世山;;豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白翻譯起始位點(diǎn)的研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第四次豬病防控學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

4 程安春;汪銘書(shū);文明;周偉光;郭宇飛;賈仁勇;徐超;袁桂萍;劉一塵;;鴨病毒性腸炎病毒基因文庫(kù)的構(gòu)建及其核衣殼蛋白基因的發(fā)現(xiàn)、克隆與鑒定[A];第三屆第八次全國(guó)學(xué)術(shù)研討會(huì)暨動(dòng)物微生態(tài)企業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略論壇論文集[C];2006年

5 譚菲菲;韋祖樟;孫志;莊金山;袁世山;;豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白末端序列在病毒復(fù)制過(guò)程中的作用分析[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2009學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2009年

6 楊利峰;;PRRSV重組核衣殼蛋白在大腸桿菌中的高效表達(dá)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十四次學(xué)術(shù)研討會(huì)、中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病理生理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

7 智海東;王云峰;張晶;童光志;劉娣;;表達(dá)豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白重組禽痘病毒的構(gòu)建[A];科技、工程與經(jīng)濟(jì)社會(huì)協(xié)調(diào)發(fā)展——中國(guó)科協(xié)第五屆青年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2004年

8 車(chē)小燕;丘立文;郝衛(wèi);溫坤;王亞娣;潘玉先;廖志勇;;核衣殼蛋白在SARS早期診斷中的意義[A];第6次全國(guó)微生物學(xué)與免疫學(xué)大會(huì)論文摘要匯編[C];2004年

9 閆曉紅;劉默;郝茜;慕永新;朱應(yīng);吳建國(guó);;SARS病毒核衣殼蛋白調(diào)控COX-2的機(jī)理研究[A];2006中國(guó)微生物學(xué)會(huì)第九次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2006年

10 譚菲菲;韋祖樟;孫志;莊金山;袁世山;;豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白末端序列在病毒復(fù)制過(guò)程中的作用分析[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 陳義平;豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白基因的高效可溶性表達(dá)和檢測(cè)血清抗體的間接ELISA方法的建立[D];揚(yáng)州大學(xué);2003年

2 婁忠子;豬圓環(huán)病毒2型核衣殼蛋白抗原表位的篩選與鑒定[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2010年

3 文明;DEV基因文庫(kù)構(gòu)建、核衣殼蛋白基因的發(fā)現(xiàn)及克隆與表達(dá)[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 蔡沂東;PRRSV核衣殼蛋白抑制IFN-β產(chǎn)生的機(jī)制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 朱希旺;豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白誘導(dǎo)豬肺泡巨噬細(xì)胞白介素-10表達(dá)的分子機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

3 李玉軍;豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白基因的表達(dá)及其特性[D];揚(yáng)州大學(xué);2008年

4 邵烈剛;豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白單克隆抗體的制備[D];西南大學(xué);2009年

5 陳春燕;豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒核衣殼蛋白中間區(qū)域功能研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2012年

6 姜麗英;豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白基因的原核表達(dá)及其單克隆抗體的研制[D];揚(yáng)州大學(xué);2008年

7 彭長(zhǎng)凌;豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白單克隆抗體的制備與初步應(yīng)用[D];揚(yáng)州大學(xué);2004年

8 姚瑤;基于HPPRRSV N蛋白的快速免疫檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用[D];河北師范大學(xué);2012年

9 石達(dá);豬流行性腹瀉病毒核衣殼蛋白亞細(xì)胞定位信號(hào)的鑒定[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2012年

10 黃燦平;豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白基因在原核和真核系統(tǒng)中的表達(dá)與鑒定[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2002年

，

本文編號(hào)：2653061