【摘要】：沙門(mén)菌(Salmonella)是一種重要的人畜共患病致病菌,主要可經(jīng)過(guò)消化道進(jìn)行傳染,其宿主范圍廣。人、家畜、野生哺乳動(dòng)物、爬行類(lèi)動(dòng)物、鳥(niǎo)類(lèi)甚至昆蟲(chóng)等均可感染發(fā)病,其感染人會(huì)導(dǎo)致傷寒、副傷寒、急性胃腸炎、敗血癥等疾病,感染幼年及青年動(dòng)物,會(huì)使之產(chǎn)生敗血癥、胃腸炎及其他組織和局部炎癥,并且會(huì)導(dǎo)致懷孕母畜流產(chǎn)�？股氐氖褂门c耐藥性致病菌之間存在緊密關(guān)聯(lián),多重耐藥菌的出現(xiàn)對(duì)公共衛(wèi)生健康是個(gè)嚴(yán)重的威脅,尤其是對(duì)廣譜頭孢菌素和氟喹諾酮類(lèi)抗生素有耐藥性的耐藥菌。隨著第三代和第四代頭孢菌素的廣泛使用,細(xì)菌的耐藥率也逐漸上升,主要出現(xiàn)一類(lèi)能夠水解第三代、甚至第四代頭孢菌素的酶稱(chēng)之為超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(Extended Spectrump-Lactamases,ESBLs)。產(chǎn)ESBLs的沙門(mén)菌通常把抗生素耐藥質(zhì)粒、整合子和轉(zhuǎn)座子攜帶的可轉(zhuǎn)移元件作為抗生素耐藥性傳遞的供體,參與發(fā)病機(jī)制的某些ESBLs基因通常與這些抗生素耐藥基因元件一起轉(zhuǎn)移,將編碼基因ESBLs轉(zhuǎn)移到細(xì)菌宿主的基因組或質(zhì)粒中促進(jìn)了更具毒性和耐藥性的分離株的出現(xiàn),并因此導(dǎo)致更難以治療的感染。為了解重慶市部分地區(qū)動(dòng)物源沙門(mén)菌的血清型流行情況、藥物敏感性情況以及ESBLs基因的流行情況。本研究試驗(yàn)樣品為2014年3月至2019年1月采集于重慶市14個(gè)區(qū)縣的養(yǎng)殖場(chǎng)、屠宰場(chǎng)及動(dòng)物醫(yī)院,包括北碚區(qū)、渝北區(qū)、涪陵區(qū)、南川區(qū)、江津區(qū)、大足區(qū)、璧山區(qū)、合川區(qū)、榮昌區(qū)、長(zhǎng)壽區(qū)、豐都縣、墊江縣、萬(wàn)州區(qū)和彭水縣。共采集豬、羊、犬、雞、牛、兔、鴨共7種動(dòng)物的肛拭子或者心肺組織樣品1850份,并對(duì)其進(jìn)行沙門(mén)菌的分離鑒定。通過(guò)緩沖蛋白胨水(BPW)、四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB)、木糖賴(lài)氨酸Tergitol-4(XLT-4)瓊脂培養(yǎng)基、沙門(mén)菌顯色培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng),再擴(kuò)增沙門(mén)菌特異性基因invA已確定沙門(mén)菌。使用沙門(mén)菌診斷血清對(duì)鑒定為沙門(mén)菌的臨床分離株進(jìn)行血清型鑒定,以確定重慶市部分地區(qū)動(dòng)物源沙門(mén)菌的流行血清型。根據(jù)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)研究所(Clinical and Laboratory Standards Lnstitute,CLSI)所推薦的沙門(mén)菌抗菌藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn),采用K-B紙片擴(kuò)散法進(jìn)行27種藥物的敏感性試驗(yàn),以了解重慶市部分地區(qū)動(dòng)物源沙門(mén)菌的耐藥情況。使用質(zhì)粒提取試劑盒提取細(xì)菌質(zhì)粒,使用PCR方法檢測(cè)臨床分離株中11種ESBL基因的攜帶情況。對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序后,其結(jié)果經(jīng)BLAST分析比對(duì)來(lái)確定其ESBL亞型,以檢測(cè)重慶市部分地區(qū)動(dòng)物源沙門(mén)菌的ESBL基因流行情況。結(jié)果從1850份樣品中分離到不同動(dòng)物來(lái)源的沙門(mén)菌76株,其總分離率較低為4.1%。76株沙門(mén)菌有73株可以定型,其中3株為粗糙型產(chǎn)生自凝現(xiàn)象不能分型。已定型的沙門(mén)菌鑒定出4個(gè)血清群共12種血清型,其中優(yōu)勢(shì)血清型為德?tīng)柋吧抽T(mén)菌、阿貢納沙門(mén)菌和鼠傷寒沙門(mén)菌,優(yōu)勢(shì)血清型均屬于B群。不同動(dòng)物源性以及相同動(dòng)物源的沙門(mén)菌顯示出對(duì)27種抗菌藥物的耐藥情況均不相同,但也顯示出一定的規(guī)律。本試驗(yàn)分離菌株對(duì)氨芐西林耐藥最為嚴(yán)重,對(duì)四環(huán)素類(lèi)、酰胺醇類(lèi)藥物耐藥也較為嚴(yán)重,對(duì)磺胺類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)、喹諾酮類(lèi)也存在耐藥的情況,但對(duì)第四代頭孢菌素頭孢吡肟完全敏感。所有臨床分離株顯示出的多重耐藥情況從0-23種藥物不等,其中最高耐23種藥物的為1株雞源沙門(mén)菌,最低耐0種藥物的現(xiàn)象出現(xiàn)于豬源沙門(mén)菌中,占總分離率的6.6%。總體來(lái)看豬源沙門(mén)菌均表現(xiàn)出耐0-8種藥物的規(guī)律。76株沙門(mén)菌進(jìn)行11種ESBL基因的檢測(cè)結(jié)果為68株攜帶至少1種ESBL基因,陽(yáng)性率達(dá)89.5%。其中TEM、OXA-1、CTX-M、OXA-10、CMY檢出率分別為85.5%、25%、6.6%、5.3%、5.3%。本次試驗(yàn)未檢測(cè)到SHV、VEB、PER、GES、OXA-2、PSE基因。其中TEM基因廣泛存在于每一類(lèi)動(dòng)物源沙門(mén)菌中,測(cè)序分析顯示65株TEM基因陽(yáng)性菌株中其基因亞型以TEM-1和TEM-1a為主。不同沙門(mén)菌血清型攜帶ESBL基因的情況也不一樣,在優(yōu)勢(shì)血清型德?tīng)柋吧抽T(mén)菌中,存在TEM、OXA-1、CTX-M、OXA-10、CMY共5種耐藥基因。在阿貢納沙門(mén)菌中存在TEM、OXA-1基因。通過(guò)對(duì)試驗(yàn)菌株β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物耐藥表型和ESBL基因攜帶情況進(jìn)行比對(duì)發(fā)現(xiàn),其符合率為97%,具有很高的一致性。結(jié)論:本試驗(yàn)從1850份樣品中分離到不同動(dòng)物來(lái)源的沙門(mén)菌76株,其中73株可定型的沙門(mén)菌共分為12種血清型,重慶市部分地區(qū)動(dòng)物源沙門(mén)菌優(yōu)勢(shì)血清型為德?tīng)柋吧抽T(mén)菌、阿貢納沙門(mén)菌和鼠傷寒沙門(mén)菌。重慶市部分地區(qū)動(dòng)物源沙門(mén)菌對(duì)氨芐西林耐藥最為嚴(yán)重,但對(duì)第四代頭孢菌素頭孢吡肟的耐藥率為0,且多重耐藥情況從0-23種藥物不等。本試驗(yàn)共檢測(cè)出TEM、OXA-1、CTX-M、OXA-10、CMY共5種耐藥基因,其中TEM基因檢出率最高,其次為OXA-1,且ESBL基因攜帶與β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物耐藥表型高度一致。
【圖文】：

3-1 沙門(mén)菌在 XLT-4 瓊脂培養(yǎng)基上的生長(zhǎng) Growth pattern of Salmonella on XLT-4 aga 3-2 沙門(mén)菌在 XLD 瓊脂培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情 Growth pattern of Salmonella on XLD agar

擇性培養(yǎng)基的生長(zhǎng)情況上形成黑色單菌落（圖 3-1）；在 X在沙門(mén)菌顯色培養(yǎng)基上形成紫色單-1 沙門(mén)菌在 XLT-4 瓊脂培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)rowth pattern of Salmonella on XLT-4 ag
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：S852.61

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2652288