【摘要】：沙門菌(Salmonella)是一種重要的人畜共患病致病菌,主要可經(jīng)過消化道進行傳染,其宿主范圍廣。人、家畜、野生哺乳動物、爬行類動物、鳥類甚至昆蟲等均可感染發(fā)病,其感染人會導致傷寒、副傷寒、急性胃腸炎、敗血癥等疾病,感染幼年及青年動物,會使之產(chǎn)生敗血癥、胃腸炎及其他組織和局部炎癥,并且會導致懷孕母畜流產(chǎn)�？股氐氖褂门c耐藥性致病菌之間存在緊密關聯(lián),多重耐藥菌的出現(xiàn)對公共衛(wèi)生健康是個嚴重的威脅,尤其是對廣譜頭孢菌素和氟喹諾酮類抗生素有耐藥性的耐藥菌。隨著第三代和第四代頭孢菌素的廣泛使用,細菌的耐藥率也逐漸上升,主要出現(xiàn)一類能夠水解第三代、甚至第四代頭孢菌素的酶稱之為超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(Extended Spectrump-Lactamases,ESBLs)。產(chǎn)ESBLs的沙門菌通常把抗生素耐藥質(zhì)粒、整合子和轉座子攜帶的可轉移元件作為抗生素耐藥性傳遞的供體,參與發(fā)病機制的某些ESBLs基因通常與這些抗生素耐藥基因元件一起轉移,將編碼基因ESBLs轉移到細菌宿主的基因組或質(zhì)粒中促進了更具毒性和耐藥性的分離株的出現(xiàn),并因此導致更難以治療的感染。為了解重慶市部分地區(qū)動物源沙門菌的血清型流行情況、藥物敏感性情況以及ESBLs基因的流行情況。本研究試驗樣品為2014年3月至2019年1月采集于重慶市14個區(qū)縣的養(yǎng)殖場、屠宰場及動物醫(yī)院,包括北碚區(qū)、渝北區(qū)、涪陵區(qū)、南川區(qū)、江津區(qū)、大足區(qū)、璧山區(qū)、合川區(qū)、榮昌區(qū)、長壽區(qū)、豐都縣、墊江縣、萬州區(qū)和彭水縣。共采集豬、羊、犬、雞、牛、兔、鴨共7種動物的肛拭子或者心肺組織樣品1850份,并對其進行沙門菌的分離鑒定。通過緩沖蛋白胨水(BPW)、四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB)、木糖賴氨酸Tergitol-4(XLT-4)瓊脂培養(yǎng)基、沙門菌顯色培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng),再擴增沙門菌特異性基因invA已確定沙門菌。使用沙門菌診斷血清對鑒定為沙門菌的臨床分離株進行血清型鑒定,以確定重慶市部分地區(qū)動物源沙門菌的流行血清型。根據(jù)美國臨床實驗室標準研究所(Clinical and Laboratory Standards Lnstitute,CLSI)所推薦的沙門菌抗菌藥物敏感性試驗標準,采用K-B紙片擴散法進行27種藥物的敏感性試驗,以了解重慶市部分地區(qū)動物源沙門菌的耐藥情況。使用質(zhì)粒提取試劑盒提取細菌質(zhì)粒,使用PCR方法檢測臨床分離株中11種ESBL基因的攜帶情況。對PCR產(chǎn)物進行測序后,其結果經(jīng)BLAST分析比對來確定其ESBL亞型,以檢測重慶市部分地區(qū)動物源沙門菌的ESBL基因流行情況。結果從1850份樣品中分離到不同動物來源的沙門菌76株,其總分離率較低為4.1%。76株沙門菌有73株可以定型,其中3株為粗糙型產(chǎn)生自凝現(xiàn)象不能分型。已定型的沙門菌鑒定出4個血清群共12種血清型,其中優(yōu)勢血清型為德爾卑沙門菌、阿貢納沙門菌和鼠傷寒沙門菌,優(yōu)勢血清型均屬于B群。不同動物源性以及相同動物源的沙門菌顯示出對27種抗菌藥物的耐藥情況均不相同,但也顯示出一定的規(guī)律。本試驗分離菌株對氨芐西林耐藥最為嚴重,對四環(huán)素類、酰胺醇類藥物耐藥也較為嚴重,對磺胺類、氨基糖苷類、喹諾酮類也存在耐藥的情況,但對第四代頭孢菌素頭孢吡肟完全敏感。所有臨床分離株顯示出的多重耐藥情況從0-23種藥物不等,其中最高耐23種藥物的為1株雞源沙門菌,最低耐0種藥物的現(xiàn)象出現(xiàn)于豬源沙門菌中,占總分離率的6.6%�？傮w來看豬源沙門菌均表現(xiàn)出耐0-8種藥物的規(guī)律。76株沙門菌進行11種ESBL基因的檢測結果為68株攜帶至少1種ESBL基因,陽性率達89.5%。其中TEM、OXA-1、CTX-M、OXA-10、CMY檢出率分別為85.5%、25%、6.6%、5.3%、5.3%。本次試驗未檢測到SHV、VEB、PER、GES、OXA-2、PSE基因。其中TEM基因廣泛存在于每一類動物源沙門菌中,測序分析顯示65株TEM基因陽性菌株中其基因亞型以TEM-1和TEM-1a為主。不同沙門菌血清型攜帶ESBL基因的情況也不一樣,在優(yōu)勢血清型德爾卑沙門菌中,存在TEM、OXA-1、CTX-M、OXA-10、CMY共5種耐藥基因。在阿貢納沙門菌中存在TEM、OXA-1基因。通過對試驗菌株β-內(nèi)酰胺類藥物耐藥表型和ESBL基因攜帶情況進行比對發(fā)現(xiàn),其符合率為97%,具有很高的一致性。結論:本試驗從1850份樣品中分離到不同動物來源的沙門菌76株,其中73株可定型的沙門菌共分為12種血清型,重慶市部分地區(qū)動物源沙門菌優(yōu)勢血清型為德爾卑沙門菌、阿貢納沙門菌和鼠傷寒沙門菌。重慶市部分地區(qū)動物源沙門菌對氨芐西林耐藥最為嚴重,但對第四代頭孢菌素頭孢吡肟的耐藥率為0,且多重耐藥情況從0-23種藥物不等。本試驗共檢測出TEM、OXA-1、CTX-M、OXA-10、CMY共5種耐藥基因,其中TEM基因檢出率最高,其次為OXA-1,且ESBL基因攜帶與β-內(nèi)酰胺類藥物耐藥表型高度一致。
【圖文】：

3-1 沙門菌在 XLT-4 瓊脂培養(yǎng)基上的生長 Growth pattern of Salmonella on XLT-4 aga 3-2 沙門菌在 XLD 瓊脂培養(yǎng)基上的生長情 Growth pattern of Salmonella on XLD agar

擇性培養(yǎng)基的生長情況上形成黑色單菌落（圖 3-1）；在 X在沙門菌顯色培養(yǎng)基上形成紫色單-1 沙門菌在 XLT-4 瓊脂培養(yǎng)基上的生長rowth pattern of Salmonella on XLT-4 ag
【學位授予單位】：西南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S852.61

【參考文獻】

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