【摘要】：水貂病毒性腸炎是由水貂腸炎病毒(Mink enteritis virus,MEV)引起的一種急性高度接觸性傳染病,是危害養(yǎng)貂業(yè)的主要病毒性傳染病之一,給世界水貂養(yǎng)殖業(yè)造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失。在固有免疫中,Ⅰ型干擾素(Type Ⅰ interferon,IFN-Ⅰ)是最重要的抗病毒細(xì)胞因子,它不僅可以誘導(dǎo)多種抗病毒基因的表達(dá),發(fā)揮抗病毒作用,還能調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫反應(yīng)。大多數(shù)病毒感染都能誘導(dǎo)IFN-Ⅰ的產(chǎn)生,但MEV感染卻抑制IFN-Ⅰ的表達(dá),其機(jī)制至今并不清楚。為了進(jìn)一步了解MEV與其宿主間的相互作用,本課題對MEV抑制IFN-Ⅰ的誘導(dǎo)產(chǎn)生的機(jī)制進(jìn)行了深入研究。本論文研究發(fā)現(xiàn),MEV感染CRFK細(xì)胞不能誘導(dǎo)產(chǎn)生IFN-Ⅰ。我們利用qPCR的方法檢測了 MEV感染CRFK細(xì)胞后不同時(shí)間點(diǎn)IFNα、IFNβ及其下游干擾素刺激基因(Interferon-stimulated genes,ISGs)的 mRNA 表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn) MEV 感染下調(diào)了 IFNα、IFNβ和ISGs的表達(dá);而且也抑制poly(I:C)誘導(dǎo)的IFNβ的表達(dá);用外源干擾素IFNα預(yù)先處理CRFK細(xì)胞6h,發(fā)現(xiàn)IFNα對MEV病毒的感染和復(fù)制都沒有影響。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),MEV的非結(jié)構(gòu)蛋白NS1能顯著下調(diào)IFNβ的表達(dá);經(jīng)對NS1結(jié)構(gòu)域的截短片段分析,發(fā)現(xiàn)NS1的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域發(fā)揮了主要抑制作用;應(yīng)用染色質(zhì)免疫共沉淀等技術(shù)證明,NS1直接結(jié)合在IFNβ的啟動子區(qū)域抑制其轉(zhuǎn)錄。IRF3和NF-κB信號通路對IFN-Ⅰ的誘導(dǎo)產(chǎn)生至關(guān)重要,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),NS1下調(diào)了信號分子STING、MAVS、TBK1和IKKβ誘導(dǎo)的IRF3和NF-κB信號通路的激活。通過Western blot和激光共聚焦實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),NS1通過抑制IRF3和TBK1的磷酸化來阻斷IRF3信號通路的激活,但并不影響IRF3的入核。同時(shí)還發(fā)現(xiàn),NS1也抑制IκBα的磷酸化降解和p65的磷酸化入核;免疫共沉淀和激光共聚焦實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明NS1與IKKβ結(jié)合干擾IKKβ-IKKα和IKKβ-NEMO的相互作用,減弱IKK復(fù)合體的形成,阻斷NF-κB信號通路從而抑制IFNβ的轉(zhuǎn)錄激活。IKKβ的激酶結(jié)構(gòu)域(Kinasedomain)可促進(jìn)IκBα的磷酸化降解過程,對IKKβ結(jié)構(gòu)域的截短片段分析,證實(shí)了 NS1能夠與IKKβ的激酶結(jié)構(gòu)域結(jié)合。以上研究結(jié)果表明,MEV感染CRFK細(xì)胞既不能誘導(dǎo)IFN-Ⅰ的產(chǎn)生,對外源干擾素也不敏感,而且還能抑制IFN-Ⅰ的產(chǎn)生;MEV的非結(jié)構(gòu)蛋白NS1直接結(jié)合在IFNβ的啟動子區(qū)域抑制IFNβ的轉(zhuǎn)錄,或靶向IRF3和IKKβ分別抑制IRF3的磷酸化和干擾IKK復(fù)合體的形成,阻斷IRF3和NF-κB信號通路,從而抑制IFNβ的轉(zhuǎn)錄激活。本研究不僅探討了MEV抑制IFN-Ⅰ誘導(dǎo)產(chǎn)生的機(jī)制,同時(shí)對MEV的致病機(jī)理和新型弱毒疫苗的研發(fā)提供了新的理論基礎(chǔ)和思路。
【圖文】：

中國農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文邐第一章文獻(xiàn)綜述逡逑第一草文獻(xiàn)綜述逡逑１．１細(xì)小病毒科簡介逡逑細(xì)小病毒是一類古老的單鏈ＤＮＡ病毒，它的研究最早起始于１９５９年，Ｋｉｌｈａｍ和Ｏｌｉｖｉｅｒ從鼠逡逑的腫瘤裂解物中分離得到，并將其命名為大鼠Ｋｉｌｈａｍ病毒（ＦＣｉｌｈａｍ邋ｒａｔ邋ｖｉｒｕｓ，ＫＲＶ）邋（Ｋｉｌｈａｍ邋ａｎｄ逡逑Ｏｌｉｖｉｅｒ，邋１９５９；邋Ｍａｙ邋ａｎｄ邋Ｍａｙ，邋１９７０），之后這類病毒相繼被發(fā)現(xiàn)并被統(tǒng)一歸類為細(xì)小病毒科逡逑（Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ）。根據(jù)邋２０１４邋年國際病毒分類委員會（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ邋Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ邋ｏｎ邋Ｔａｘｏｎｏｍｙ邋ｏｆ邋Ｖｉｒｕｓ，逡逑ＩＣＴＶ）公布的結(jié)果，細(xì)小病毒科分為細(xì)小病毒亞科（Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｎａｅ）和濃核病毒亞科逡逑（Ｄｅｎｓｏｖｉｒｉｎａｅ）兩個(gè)亞科，其中細(xì)小病毒亞科包括細(xì)小病毒屬（Ｐｒｏｔｏｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、阿留申水}9病毒逡逑屬（Ａｍｄｏｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、紅病毒屬（Ｅｒｙｔｈｒｏｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、博卡病毒屬（Ｂｏｃａｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、依賴病毒屬逡逑（Ｄｅｐｅｎｄｏｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、Ａｖｅｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ、Ｃｏｐｉｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ邋和邋Ｔｅｔｒａｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ８邋個(gè)屬；濃核病毒亞科包逡逑括重復(fù)病毒屬（Ｉｔｅｒａｄｅｎｓｏｖｉｒｕｓ）、短濃核病毒屬（Ｂｒｅｖｉｄｅｎｓｏｖｉｒｕｓ）、濃核病毒屬（Ａｍｂｉｄｅｎｓｏｖｉｒｕｓ）、逡逑Ｈｅｐａｎｄｅｎｓｏｖｉｒｕｓ邋和邋Ｐｅｎｓｔｙｌｄｅｎｓｏｖｉｒｕｓ邋５邋個(gè)病毒屬，如圖邋１－１邋（Ｃｏｔｍｏｒｅ邋ｅｔａｌ．，２０１４）。逡逑

每個(gè)屬下至少有一個(gè)病毒株的序列被用來產(chǎn)生樹。標(biāo)度表示節(jié)點(diǎn)長度。逡逑１．２水貂腸炎病毒（ＭＥＶ）概述逡逑水貂病毒性腸炎又稱水貂傳染性腸炎或水貂泛白細(xì)胞減少癥，是由水貂腸炎病毒（ＭＥＶ）引逡逑起的水貂的一種急性高度接觸性傳染病，是危害水貂養(yǎng)殖業(yè)的主要病毒性傳染病之一。該病以劇逡逑烈腹瀉、腸黏膜炎癥、白細(xì)胞高度減少為特征，具有較氋的發(fā)病率和死亡率。１９４７年，加拿大首逡逑一ｔｅｉｎｅｌ邋ｅｔ邋ａｌ．２１Ｗｉｌｌｓ
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 孫文香;蔣爭凡;;病毒感染引發(fā)天然免疫細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)研究進(jìn)展[J];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2013年05期

2 王建科;程世鵬;閆喜軍;吳威;;水貂腸炎病毒分子檢測技術(shù)與基因工程疫苗研究進(jìn)展[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2008年10期

3 ;NF-κB and Its Regulation on the Immune System[J];Cellular & Molecular Immunology;2004年05期

4 姜廷秀,樸厚坤,王喜龍,王義;疑似水貂病毒性腸炎初報(bào)[J];毛皮動物飼養(yǎng);1981年02期

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本文編號：2646953