【摘要】：目前,包括細(xì)胞培養(yǎng)在內(nèi)的細(xì)胞工程技術(shù)已成為畜禽遺傳資源活體保護(hù)強(qiáng)有力的輔助手段。皖東牛是新發(fā)現(xiàn)的國(guó)家級(jí)地方黃牛資源,適應(yīng)性強(qiáng)、肉用性能佳,但現(xiàn)存群體數(shù)量較少,亟待保護(hù)。本試驗(yàn)采用組織塊貼壁法對(duì)兩頭皖東牛種公牛皮膚成纖維細(xì)胞進(jìn)行建系與生長(zhǎng)特性鑒定,嘗試了從冷凍精液中分離體細(xì)胞,旨在為建立皖東牛細(xì)胞庫(kù),豐富皖東牛種質(zhì)資源保護(hù)手段奠定基礎(chǔ)。取得主要結(jié)果如下:(1)培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)為長(zhǎng)梭形成纖維狀,生長(zhǎng)曲線呈“S”型,符合成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)規(guī)律;(2)皖東牛34115053(后文簡(jiǎn)稱為A)凍存前和復(fù)蘇后第二代(Passge 2,簡(jiǎn)稱P2)細(xì)胞平均活率分別為99.75%、91.82%,皖東牛34114125(后文簡(jiǎn)稱為B)(P2)分別為97.88%、92.90%,表明該細(xì)胞可適應(yīng)常規(guī)凍存;(3)對(duì)A(P5)、B(P11)成纖維細(xì)胞各70個(gè)分裂相的染色體分析,2N=60比重為91.43%(64/70)、82.86%(58/70),可穩(wěn)定遺傳;(4)添加15%的Gibco胎牛血清時(shí),細(xì)胞增殖速率優(yōu)于15%四季青胎牛血清組,而與10%的Gibco血清組相近,表明10%的Gibco血清濃度更適用;(5)A(P2、P5、P8)和B(P3、P6、P9)不同代次間,細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)和倍增時(shí)間無(wú)明顯差異,為體細(xì)胞克隆選擇最佳供體細(xì)胞代次奠定基礎(chǔ)。成功建立了兩頭皖東牛種公牛成纖維細(xì)胞系,可作為皖東牛遺傳資源保護(hù)的材料,為建立皖東牛細(xì)胞庫(kù)奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
【圖文】：

圖 1- 1 皖東牛公牛（左上）；皖東牛母牛（右上）；皖東牛母牛群（左下）Fig1 Wandong bull (top left ), Wandong cow (top right) and Wandong cows (bottom left )2.3 皖東牛遺傳資源保護(hù)現(xiàn)狀2011 年底，皖東牛存欄量在 7000 頭左右，其中鳳陽(yáng)縣飼養(yǎng)量最大，達(dá) 1530 頭遠(yuǎn)縣次之，為 1480 頭[9]，總存欄量不足上世紀(jì) 90 年代皖東牛存欄量的 1/10。尤其指出的是，近年來(lái)在對(duì)皖東牛進(jìn)行遺傳資源調(diào)查時(shí)發(fā)現(xiàn)，皖東牛數(shù)量仍處于驟減的總存欄量?jī)H維持在 3000 頭左右，形勢(shì)并不樂觀。皖東牛的飼養(yǎng)多為散戶飼養(yǎng)模式，不科學(xué)的飼養(yǎng)管理手段無(wú)法滿足皖東牛正常需求，也無(wú)法繁育出優(yōu)秀的牛只，不能保證高品質(zhì)牛肉的獲得；其次，在農(nóng)耕機(jī)械役用牛只的時(shí)代，大多數(shù)養(yǎng)殖戶將役用牛只變賣、屠宰，品種保護(hù)意識(shí)薄弱；此外為人們對(duì)皖東牛的特性認(rèn)識(shí)不全面，試圖引進(jìn)外來(lái)品種替代或盲目雜交改良來(lái)提高效益，，這也導(dǎo)致皖東牛數(shù)量的大幅降低[63]。為此，安徽省政府針對(duì)皖東和其他畜禽的情況采取相應(yīng)補(bǔ)救措施，加大畜禽保護(hù)的經(jīng)濟(jì)投入，開展“資源保護(hù)利用 9動(dòng)”[11]，編制了《皖東牛地方標(biāo)準(zhǔn)(草案)》、《皖東牛保種方案》及《皖東牛遺傳資

2 結(jié)果2.1 成纖維細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察原代培養(yǎng)后，第五天（圖 2-1）可見少量細(xì)胞沿組織塊外周貼附遷出，空白處許細(xì)胞貼附于皿底，細(xì)胞主要聚集在培養(yǎng)皿邊緣，多為短小、纖細(xì)的三角形狀態(tài)。養(yǎng)時(shí)間增加，細(xì)胞數(shù)量增多，沿組織塊向外伸展，呈放射樣或漩渦樣生長(zhǎng)暈（圖細(xì)胞立體飽滿，為典型的紡錘形形態(tài)，向外延伸 2-4 個(gè)突起，20×10 倍鏡下可觀察質(zhì)中央的圓形細(xì)胞核。除成纖維細(xì)胞外，組織塊周圍也有呈多邊形緊密排列的上皮（圖 2-3），上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞間有明顯的細(xì)胞界限。在培養(yǎng) 10-11 d，可進(jìn)行或凍存。
【學(xué)位授予單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S823

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2645459