【摘要】：彎曲菌(Campylobacter)是一種重要的人獸共患食源性病原菌,可以引起人類細(xì)菌性胃腸炎以及一系列的并發(fā)癥。其中格林-巴利綜合征(Guillain-Barresyndrome,GBS)是最為嚴(yán)重的并發(fā)癥,而且特定血清型空腸彎曲菌引起的腸炎被認(rèn)為是重要的前驅(qū)因子。彎曲菌廣泛存在于許多溫血動物的腸道和自然界中,畜禽是彎曲菌重要的貯存宿主,感染動物通常無明顯病癥,呈隱性帶菌狀態(tài),但可持續(xù)向外界排菌,通過排泄物或分娩污染食物和飲水,進而引起人類以及其他動物感染。因此,控制或消減畜禽源彎曲菌,減少人們暴露于這種病原菌的風(fēng)險是預(yù)防和控制彎曲菌病的重要前提。本文研究的主要目的是:(1)較為系統(tǒng)地調(diào)查與分析家禽和家畜中彎曲菌的流行現(xiàn)狀與特點以及患病畜禽體內(nèi)臟器及腸道等組織感染分布情況;(2)應(yīng)用MLST分子分型技術(shù)對畜禽源不同組織彎曲菌分離株進行分子亞分型研究,以期探明宿主間、宿主體內(nèi)不同組織彎曲菌分布特征、種群結(jié)構(gòu),揭示不同宿主間、同一宿主體內(nèi)不同組織彎曲菌的遺傳關(guān)系以及可能的傳播規(guī)律,為有效防控彎曲菌病提供數(shù)據(jù)支撐。1彎曲菌在患病畜禽體內(nèi)組織分布特征的調(diào)查與分析自2016年10月至2017年9月,于揚州市某動物醫(yī)院畜禽門診采集送檢畜禽病料835例并詳細(xì)記錄病例信息如畜禽不同種類、臨診是否患有不同疾病、有無腹瀉癥狀等。其中家禽796例,共5885份樣品,包括雞475例、鴨78例、鵝235例。家畜病例39例,共275份樣品。以國標(biāo)方法作對照,應(yīng)用本實驗室已建立的多重PCR方法,對上述病例不同組織進行空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌的分離和鑒定。家禽檢測結(jié)果顯示,不同種類家禽彎曲菌感染率懸殊較大,陽性率從48.72%到72.00%,雞、鴨、鵝陽性率分別為72.00%、48.72%、52.34%,雞彎曲菌感染陽性率極顯著高于鴨、鵝(P0.01),結(jié)果表明,患病家禽中,雞最為易感,其次是鵝。另外,送檢家畜39例,彎曲菌陽性18例,平均陽性率為46.15%,其中,送檢豬33例,17例呈結(jié)腸彎曲菌陽性,陽性率為51.52%。對畜禽體內(nèi)不同部位進行檢測,結(jié)果顯示,在雞心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、盲腸內(nèi)容物、肛拭樣和膽囊均有空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌檢出,同時檢出的檢出率分別為0.52%、2.32%、0.44%、0.85%、0.63%、3.17%、5.07%、0.30%。在鴨脾臟、肺臟、腎臟、盲腸內(nèi)容物、肛拭樣和膽囊部位檢出空腸彎曲菌,心臟和肝臟未檢出,結(jié)腸彎曲菌在肺臟、盲腸內(nèi)容物、肛拭樣樣品中檢出,而且在這三個部位同時檢出空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌,檢出率分別為2.67%、4.11%、1.33%。在在鵝心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、盲腸內(nèi)容物、肛拭樣和膽囊部位均檢出空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌,僅在腎臟和盲腸盲腸內(nèi)容物同時檢出,檢出率分別為0.43%和2.99%。在豬心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、盲腸內(nèi)容物、肛拭樣和膽囊部位檢出結(jié)腸彎曲菌,分離率分別為:7.14%、9.09%、6.45%、6.45%、9.68%、36.67%、41.94%和5.88%。結(jié)果表明,畜禽不同分離部位彎曲菌檢出結(jié)果不同,在家禽尤其在雞各個分離部位均同時檢出空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌,但檢出率均不高。另外發(fā)現(xiàn),雞膽囊彎曲菌檢出率較高于鴨和鵝。對陽性家禽個體體內(nèi)彎曲菌檢出情況進行統(tǒng)計,1-6個分離部位有彎曲菌檢出的家禽占比存在顯著性差異(P0.05),而且約有87.77%的家禽在1-3個分離部位檢出彎曲菌,僅少數(shù)家禽在4-6個分離部位檢出彎曲菌,占陽性家禽的12.23%。研究也發(fā)現(xiàn),在呈彎曲菌陽性的319例家禽中,僅臟器呈彎曲菌陽性的病例有22例,占比6.90%,腸道和臟器均呈陽性的家禽有102例,占比31.97%,僅腸道呈陽性的病例有195例,占比61.13%,僅臟器呈彎曲菌陽性的家禽占比極顯著低于腸道呈彎曲菌陽性的家禽(P0.01),而且腸道和臟器均呈彎曲菌陽性的家禽占比顯著低于僅腸道呈彎曲菌陽性的家禽(P0.05)。在腸道有檢出297例家禽中,各個臟器組織均有不同程度彎曲菌檢出,其中肺臟彎曲菌檢出率最高,為17.17%,其次是腎臟、脾臟、心臟和肝臟,檢出率分別為16.16%、11.11%、9.43%和8.75%。肺臟彎曲菌檢出率極顯著高于心臟和肝臟(P0.01),顯著高于脾臟(P0.05)。結(jié)果表明,彎曲菌更易定植于家禽的腸道,也可引起腸道外感染,在被侵襲的臟器組織中,更易侵襲家禽的肺臟或腎臟,其次是脾臟或肝臟。根據(jù)有無腹瀉癥狀對畜禽進行分類,檢測結(jié)果顯示,臨床表現(xiàn)腹瀉癥狀的雞彎曲菌檢出率極顯著高于無腹瀉癥狀的雞(P0.01),臨床表現(xiàn)腹瀉癥狀的鵝彎曲菌檢出率顯著高于無腹瀉癥狀的鵝(P0.05)以及臨床表現(xiàn)腹瀉癥狀的豬彎曲菌檢出率極顯著高于無腹瀉癥狀的豬(P0.01)豬,以上結(jié)果可以發(fā)現(xiàn),有腹瀉癥狀的畜禽彎曲菌檢出率顯著高于無腹瀉癥狀的畜禽(P0.05),說明彎曲菌可能和畜禽腹瀉有關(guān)。對臨診不同疾病情況下家禽彎曲菌檢出情況進行統(tǒng)計,寄生蟲組和病毒組彎曲菌檢出率顯著高于細(xì)菌組(P0.05)。其中,雞檢測結(jié)果顯示,細(xì)菌組彎曲菌檢出率極顯著低于病毒組和寄生蟲組(P0.01),其他組彎曲菌檢出率沒有顯著性差異(P0.05),但是可以發(fā)現(xiàn)寄生蟲組彎曲菌檢出率較高于病毒組,分別為90.11%(82/91)和86.75%(72/83)。鴨檢測結(jié)果表明,細(xì)菌組彎曲菌檢出率和病毒組沒有顯著性差異(P0.05),但可以發(fā)現(xiàn)細(xì)菌組極顯著低于寄生蟲組彎曲菌檢出率(P0.01),病毒組和寄生蟲組彎曲菌檢出率均較高,分別為60.00%(3/5)和88.89%(8/9),但沒有顯著性差異(P0.05)。鵝檢測結(jié)果表明,細(xì)菌組彎曲菌檢出率顯著低于病毒組(P0.05),而與其他組彎曲菌檢出率沒有顯著性差異(P0.05),病毒組彎曲菌檢出率顯著高于寄生蟲組(P0.05)。另外豬檢測結(jié)果顯示,不同組別間彎曲菌檢出率沒有顯著性差異(P0.05),但可以發(fā)現(xiàn)寄生蟲組彎曲菌檢出率高達58.82%(10/17)。以上結(jié)果表明,在不同疾病情況下,畜禽有著較高的檢出率,尤其在患有病毒病以及寄生蟲感染的畜禽,而患有細(xì)菌病的畜禽檢出率較低,可能與細(xì)菌之間的競爭排斥有關(guān)。2基于MLST的不同組織彎曲菌分離株流行特征分析本研究選取aspA、glnA、gltA、glyA、pgm、tkt和uncA 7對管家基因,對232株不同動物源彎曲菌及不同組織分離株進行MLST分型研究。MLST分型結(jié)果顯示:232株分離株被分為112種不同的序列型,分屬12種同源復(fù)合體和獨特型,其中105株空腸彎曲菌被分為66種ST型,分屬10種同源復(fù)合體和獨特型,127株結(jié)腸彎曲菌,被分為46種ST型,分屬2種主要的同源復(fù)合體和獨特型。有86株細(xì)菌屬于60個新序列型,屬于新序列型分離株占彎曲菌總分離株的37.07%,其中空腸彎曲菌54株,包含雞源肝臟、脾臟、膽汁以及盲腸內(nèi)容物和肛拭樣分離株各12、1、7、3、10株,包含鴨膽汁以及盲腸內(nèi)容物和肛拭樣分離株各1、3、2株,包含鵝心臟、肝臟、脾臟、肺臟以及盲腸內(nèi)容物和肛拭樣分離株各1、2、2、1、6、3株;結(jié)腸彎曲菌32株,包含雞心臟、肝臟、以及盲腸內(nèi)容物和肛拭樣分離株各1、7、13、4株,鴨盲腸內(nèi)容物分離株2株以及鵝肝臟、腎臟、膽汁和肛拭樣分離株以及豬肛拭樣分離株均分別有1株出現(xiàn)新序列型。雞源、鴨源、鵝源、鴿源、豬源彎曲菌分別分屬9、3、7、1、1種同源復(fù)合體和獨特型,不同來源的菌株同源復(fù)合體具有一致性,含兩種及兩種以上來源菌株的同源復(fù)合體有7種,其中含兩種來源菌株的同源復(fù)合體居多,其中有6種均含有鵝源分離株,5種均含有雞源分離株,3種均含有鴨源分離株。本研究所有彎曲菌分離株MLST分型結(jié)果所獲得序列型112種,有10種已知的序列型含有兩種或兩種以上不同來源的彎曲菌分離株,共包含分離株62株。其中序列型ST-828包含了三種不同來源的分離株,其余9種序列型均含有兩種不同來源的彎曲菌分離株,而且大多數(shù)包含雞源和鵝源兩種來源彎曲菌分離株。對多個組織檢出畜禽個體彎曲菌分離株MLST分型結(jié)果顯示:同一畜禽體內(nèi)不同組織分離株有相同的序列型,如170413J5、170504E2和170316Z2個體不同組織序列型分別為ST-860、ST-825、ST-828,較少個體含有2-3種序列型。結(jié)果表明,各組織彎曲菌親緣關(guān)系較近,而且同一個體可感染多種型別的彎曲菌。對揚州市及周邊地區(qū)彎曲菌分離株以及結(jié)合PubMLST數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn),我國揚州及揚州周邊地區(qū)部分分離株和國際菌株基因種群結(jié)構(gòu)相同,另外也發(fā)現(xiàn)部分序列型目前僅在中國被發(fā)現(xiàn),如序列型 ST-6077、ST-4259、ST-4265、ST-4268、ST-4324、ST-6521、ST-6914、ST-7268、ST-7469和ST-8089等,結(jié)果表明我國部分菌株與國際菌株之間之間遺傳關(guān)系較為密切,而且也可以說明彎曲菌的分布還具有地域性特征。PubMLST數(shù)據(jù)庫顯示,序列型ST-131與彎曲菌腸胃炎、格林-巴利綜合征(Guillain-Barre Syndrome,GBS)以及Fisher綜合癥等散發(fā)病例有關(guān),本研究在雞源彎曲菌分離株發(fā)現(xiàn)。臨診不同疾病家禽分離株MLST分型結(jié)果表明,這部分分離株序列型呈現(xiàn)復(fù)雜性和多樣性,如寄生蟲感染病例分離株所獲得序列型種類多樣,高達19種,還有部分序列型特定存在某一疾病病例的分離株中,如序列型ST-872在新城疫及馬立克氏病病例分離株中均有分布,總的來說不同疾病情況下家禽彎曲菌分離株序列型和疾病之間沒有明顯對應(yīng)的關(guān)系。不同動物源及其不同組織彎曲菌遺傳關(guān)系分析顯示:不同畜禽宿主之間以及宿主體內(nèi)不同臟器和腸道組織分離株序列型均呈一定的交叉分布,表明不同種家禽之間以及畜禽之間可能存在相同的傳染源,臟器組織和腸道組織也可能存在相同的傳染源,腸道感染是臟器感染的潛在因素。
【圖文】：

（Ｐ＞＜？．０５）。膽囊中彎曲菌檢出率較氋于肝臟，但二者檢出率差異不顯著（Ｐ＞０．０５）。在逡逑腸道樣品中，盲腸內(nèi)容物彎曲菌檢出率較高于肛拭樣，二者差異不顯著（Ｐ＞０．０５）（如表逡逑１－５，，圖１－３所示）》逡逑

其余各臟器間彎曲菌檢出率差異不顯著（尸＞０．仍）。在腸道樣品中，盲腸內(nèi)容物檢出率顯逡逑著高于肛拭樣（尸＜０．０５）。另外，肝臟、膽囊間彎曲菌檢出率差異不顯著（Ｐ＞０．0５）（如逡逑表１－５，圖１－４所不）。逡逑６０「逡逑？邋ｈｅａｒｔ逡逑５０邋■邐■邐ｌｉｖｅｒ逡逑ｉ邋４０－邐０邐▲邋ｓｐｌｅｅｎ逡逑Ｉ邐%煎危歟酰睿玨義希翦危常板�？逦？逦ｋｉｄｎｅｙ辶x希靛澹玻皴澹危板危板澹悖幔澹悖幔戾澹悖錚睿簦澹睿簦簀義稀輳

本文編號：2644034