發(fā)布時間：2020-04-28 08:03

【摘要】：�；蛆Z去氧膽酸(Taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)作為膽汁酸的主要活性成分之一,不僅對急、慢性炎癥均有抑制作用,而且還能調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能。為了深入揭示TCDCA的抗炎免疫調(diào)節(jié)作用,本研究開展了下列主要內(nèi)容的研究:(1)采用實時熒光定量PCR檢測了TCDCA作用于AA模型大鼠成纖維滑膜細(xì)胞(Fibroblast-like synoviocytes,FLS)的時效關(guān)系曲線;(2)采用轉(zhuǎn)錄組測序(RNA-seq)技術(shù)對TCDCA作用于AA模型大鼠FLS細(xì)胞進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測序;(3)采用實時熒光定量PCR技術(shù)驗證差異表達(dá)基因GAPDH、GPX3、SRSF9、CTGF及CSTB的表達(dá);(4)采用免疫熒光術(shù)檢測NR8383細(xì)胞內(nèi)糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoid receptor,GR)的表達(dá)及不同濃度TCDCA對NR8383細(xì)胞核移位的影響;(5)采用實時熒光定量PCR法檢測了TCDCA對AA模型大鼠FLS細(xì)胞中VCAM-1和COX-2基因的表達(dá);(6)采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測了TCDCA對AA大鼠FLS細(xì)胞中VCAM-1蛋白的表達(dá)。結(jié)果表明:TCDCA作用于FLS細(xì)胞最佳作用時間為12 h;應(yīng)用RNA-seq技術(shù)對4個實驗組的12個樣本進(jìn)行測序后篩選出24個差異基因;從初篩的差異基因中,挑選出與抗炎免疫相關(guān)的差異基因共5個,分別為GAPDH、GPX3、SRSF9、CTGF、CSTB;TCDCA可以上調(diào)SRSF9、GPX3、CSTB mRNA的表達(dá)量。結(jié)果還證明1×10~(-5)mol/L濃度的TCDCA可顯著的(p0.05)上調(diào)CTGF mRNA的表達(dá)量;10~(-5)、10~(-7)mol/L的TCDCA可極顯著的(p0.01)上調(diào)GAPDH mRNA的表達(dá)量;TCDCA可以極顯著性(p0.01)的激活NR8383細(xì)胞內(nèi)的GR受體,且在加入GR的特異性抑制劑RU486之后,GR受體的熒光值顯著下降;而TCDCA組和DEX組間無顯著性差異(p0.05);TCDCA可以抑制VCAM-1及COX-2的表達(dá)量。本試驗研究的主要結(jié)論:(1)TCDCA促進(jìn)FLS中TGR5及GR受體表達(dá)的最佳時間為12h;(2)TCDCA作用于FLS后,經(jīng)RNA-seq測序共篩選出24個差異表達(dá)基因,其中與抗炎免疫相關(guān)的差異基因為GAPDH、GPX3、SRSF9、CTGF及CSTB;(3)經(jīng)實時熒光定量PCR法驗證,GPX3、SRSF9與轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果相一致;CTGF、GAPDH與轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果則不相一致;CSTB與轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果雖不相一致,但與文獻(xiàn)報道一致;(4)TCDCA能夠上調(diào)AA模型大鼠FLS中GPX3、SRSF9及CSTB的表達(dá)量;(5)TCDCA能夠使NR8383內(nèi)的GR受體發(fā)生核移位,顯著抑制VCAM-1、COX-2的表達(dá)量。綜上所述,TCDCA抗炎免疫調(diào)節(jié)作用與其上調(diào)GPX3、SRSF9和CSTB的表達(dá)量以及激活糖皮質(zhì)激素受體,繼而抑制VCAM-1、COX-2的表達(dá)量有關(guān)。
【圖文】：

內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 研究概況 的理化性質(zhì)氧膽酸（taurochenodeoxycholic acid，TCDCA）是膽汁酸（性成分之一，其化學(xué)名稱為 3α，7α-二羥基-5β-24-膽烷酰鵝去氧膽酸（Chenodeoxycholic acid，CDCA）的氨基之為一種結(jié)合型膽汁酸。主要存在于雞、鴨、牛、羊、蛇膽汁中含量最高[1]。其分子式為 C23（OH）2H37CONHCH 499.69。圖 1 為 TCDCA 的分子結(jié)構(gòu)。

；TCDCA 能提高小鼠血清平均溶血素含量和血清中溶單核—巨噬細(xì)胞吞噬功能及抑制小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，β、IgG 含量以及脾細(xì)胞 IL- 2 基因表達(dá)[9]。此外，UchidaDCA 能減輕小腸炎癥，，減少由吲哚美辛誘發(fā)的急慢性小游走[10]。Funaoka M 等報道 TCDCA 能提高大鼠枯否氏A 抗炎免疫調(diào)節(jié)相關(guān)通路的研究概況證明，TCDCA 發(fā)揮抗炎免疫調(diào)節(jié)作用，一方面與糖oid receptor，GR）介導(dǎo)的基因組學(xué)信號通路有關(guān)，另一體 5（Gprotein coupled bile acid receptor 5，TGR5，GPBA 信號通路有關(guān)。糖皮質(zhì)激素（Glucocorticoid，GC）主學(xué)信號通路而發(fā)揮抗炎免疫調(diào)節(jié)作用[12-14]。如圖 2 所示/EP4-G 蛋白-AC-cAMP 信號通路發(fā)揮抗炎和免疫調(diào)節(jié)作
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S852.4

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張婷婷;李培鋒;何秀玲;;�；蛆Z去氧膽酸(TCDCA)對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠成纖維樣滑膜細(xì)胞EP_2受體mRNA表達(dá)的影響[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2015年11期

2 溫博;曾升平;;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的研究進(jìn)展[J];世界中西醫(yī)結(jié)合雜志;2014年09期

3 池里群;周彬;高文遠(yuǎn);劉振;;治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎常用藥物的研究進(jìn)展[J];中國中藥雜志;2014年15期

4 史琳凱;劉倩;張子英;劉暢;王旭東;丁月霞;李培鋒;;膽汁酸膜受體TGR5真核表達(dá)載體的構(gòu)建及在細(xì)胞中的表達(dá)[J];中國畜牧獸醫(yī);2014年05期

5 劉倩;史琳凱;李磊;張子英;王旭東;李培鋒;;RNA干擾抑制大鼠肺泡巨噬細(xì)胞NR8383 TGR5受體表達(dá)的研究[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年06期

6 沈磊;賀遠(yuǎn)龍;張巍巍;耿長新;;GPX3表達(dá)與消化系腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J];臨床與實驗病理學(xué)雜志;2014年06期

7 付國良;黃曉紅;;甘油醛-3-磷酸脫氫酶功能的研究進(jìn)展[J];生物物理學(xué)報;2013年03期

8 車麗雙;黃榮桂;;TGF-β_1與CTGF在腎間質(zhì)纖維化中的作用[J];醫(yī)學(xué)綜述;2013年04期

9 李培鋒;劉明強(qiáng);關(guān)紅;;�；蛆Z去氧膽酸對小鼠脾臟中白介素-2基因表達(dá)的影響[J];中國畜牧獸醫(yī);2009年03期

10 劉明強(qiáng);李培鋒;關(guān)紅;李成應(yīng);魏波;;�；蛆Z去氧膽酸對小鼠外周血和脾臟中T、B淋巴細(xì)胞的影響[J];中國畜牧獸醫(yī);2009年02期

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2 付育;SR蛋白調(diào)控Wnt信號的機(jī)制和功能研究[D];清華大學(xué);2013年

3 劉明強(qiáng);TCDCA對佐劑性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的治療作用及其作用機(jī)制研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

4 何國雄;痹腫消湯對膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜組織annexin 1、aldolase A表達(dá)的影響[D];中南大學(xué);2006年

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1 張婷婷;TCDCA對AA模型大鼠成纖維樣滑膜細(xì)胞EP_2/EP_4-G蛋白-cAMP信號通路的影響[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 史琳凱;TCDCA與TGR5相互作用的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 劉倩;TCDCA對TGR5介導(dǎo)的信號通路中cAMP含量的影響[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

本文編號：2643242