【摘要】：雞大腸桿菌病是雞的常發(fā)病,每年都給養(yǎng)殖生產(chǎn)造成嚴(yán)重損失�？咕幬锸强刂齐u大腸桿菌病的重要手段之一。隨著細菌耐藥性、藥物殘留等問題在世界范圍內(nèi)日益嚴(yán)重,歐盟等發(fā)達國家已率先禁止使用抗菌素類飼料添加劑,我國也在逐步規(guī)范和限制抗菌藥物的使用,在食品動物中限制使用抗菌藥物在世界范圍內(nèi)將是必然趨勢。雞大腸桿菌病的主要病理變化為全身多器官炎癥,根據(jù)全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)理論,干預(yù)炎癥發(fā)生與發(fā)展是治療雞大腸桿菌病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。許多中藥通過干預(yù)炎癥、提高機體免疫力等多種方式對多種疾病表現(xiàn)出積極作用,且具有低殘留、不易耐藥等優(yōu)勢,是防治畜禽大腸桿菌病的有效方案之一。本論文結(jié)合文獻與生產(chǎn)實際需求,以抑菌、抗炎作用優(yōu)良的中藥組成復(fù)方中藥制劑,以雞大腸桿菌病模型為研究對象,評價復(fù)方中藥治療效果,探討治療機制,研究結(jié)果將對臨床防治雞大腸桿菌病具有重要的理論與實踐指導(dǎo)意義。1、采用紙片法和試管二倍稀釋法分析O_2型雞大腸桿菌臨床分離株對青霉素類藥物(阿莫西林、阿莫西林/克拉維酸)、頭孢菌素類藥物(頭孢噻呋)、氨基糖苷類藥物(慶大霉素)、四環(huán)素類藥物(四環(huán)素、多西環(huán)素)、喹諾酮類藥物(環(huán)丙沙星、恩諾沙星)等5類8種抗菌藥物的敏感性,并采用紙片擴散法分析O2型雞大腸桿菌臨床分離株的ESBLs屬性。8種抗菌藥物抑菌圈直徑和最小抑菌濃度分別為阿莫西林(16.4±2.1mm、64μg/mL)、阿莫西林/克拉維酸(19.8±1.39mm、4μg/mL)、頭孢噻呋(22.9±0.56mm、1μg/mL)、慶大霉素(15.3±0.22mm、32μg/mL)、四環(huán)素(12.3±1.42mm、32μg/mL)、多西環(huán)素(10.9±0.9mm、32μg/mL)、環(huán)丙沙星(13.2±1.3mm、8μg/mL)、恩諾沙星(25.1±1.64mm、0.25μg/mL)。兩對檢測底物抑菌圈直徑相差均大于5mm。結(jié)果表明該O_2型雞大腸桿菌臨床分離株對阿莫西林、四環(huán)素、慶大霉素、多西環(huán)素和環(huán)丙沙星呈現(xiàn)高度耐藥,對阿莫西林/克拉維酸、頭孢噻呋和恩諾沙星敏感,為產(chǎn)ESBLs多重耐藥菌;2、采用PCR法擴增O_2型雞大腸桿菌臨床分離株質(zhì)�？赡軘y帶的耐藥基因。結(jié)果表明該O_2型雞大腸桿菌臨床分離株攜帶一種AmpC基因(CMY),兩種ESBLs基因(CTX-M、TEM),兩種氟喹諾酮類耐藥基因(qnrC、qepA),兩種氨基糖苷類耐藥基因(armA、rmtB),兩種四環(huán)素類耐藥基因(tetA、tetB),該結(jié)果與其耐藥表型基本一致,提示O_2型雞大腸桿菌臨床分離株的耐藥性可能是其質(zhì)粒攜帶的耐藥基因介導(dǎo)的;3、采用平板打孔法和試管二倍稀釋法分析10味中藥對O_2型雞大腸桿菌臨床分離株的抗菌作用,采用二甲苯致小鼠耳腫脹法分析10味中藥的抗炎作用。10味中藥最小抑菌濃度、抑菌圈直徑以及對腫脹鼠耳的腫脹抑制率結(jié)果分別為魚腥草(62.5mg/mL、9.8±0.15mm、31.19±0.06%)、黃連(7.81mg/mL、18.3±0.04mm、22.1±0.04%)、黃芩(62.5mg/mL、14.4±0.12mm、42.29±0.05%)、穿心蓮(31.25mg/mL、14.6±0.17mm、56.3±0.04%)、苦參(15.63mg/mL、13.6±0.15mm、39.49±0.09%)、金銀花(31.25mg/mL、12.8±0.16mm、28.4±0.06%)、蒼術(shù)(0.5g/L、6.8±0.22mm、36.19±0.1%)、甘草(62.5mg/mL、7.4±0.13mm、33.8±0.13%)、連翹(15.63mg/mL、16.5±0.24mm、47.49±0.05%)、板藍根(31.25mg/mL、12.4±0.1mm、33.5±0.1%)。根據(jù)該結(jié)果,擬選用抗菌、抗炎作用優(yōu)良的穿心蓮、黃連、連翹組成復(fù)方中藥展開進一步試驗;4、采用兩步法測定O_2雞大腸桿菌臨床分離株對試驗雞的ID_(50),并建立雞大腸桿菌人工感染模型。在此基礎(chǔ)上,采用正交試驗法,以治療雞大腸桿菌病的總有效率為考察指標(biāo),優(yōu)化穿心蓮、黃連、連翹的最佳配伍比例。結(jié)果表明穿心蓮和黃連對總有效率影響顯著(P0.05),連翹影響不顯著,三味中藥最優(yōu)劑量組合為穿心蓮70g、黃連70g、連翹50g;5、采用平板打孔法和試管二倍稀釋法檢測復(fù)方中藥對O_2型雞大腸桿菌臨床分離株的抗菌作用。結(jié)果顯示復(fù)方中藥對O_2型雞大腸桿菌臨床分離株的抑菌圈直徑和最小抑菌濃度分別為16.3±0.11mm和15.63mg/mL,提示O_2型雞大腸桿菌臨床分離株對復(fù)方中藥高度敏感;進一步研究的結(jié)果表明,復(fù)方中藥抗菌機制可能與其破壞菌體結(jié)構(gòu),抑制細菌呼吸代謝有關(guān);6、采用人工感染雞大腸桿菌病模型考察復(fù)方中藥的治療作用。結(jié)果顯示,高劑量復(fù)方中藥能夠提高試驗雞相對增重率(47.77%),提高雞大腸桿菌病的治愈率(62.5%)和總有效率(87.5%),降低雞大腸桿菌病的發(fā)病率(26.67%)。在上述方面,高劑量復(fù)方中藥組均極顯著(P0.01)或顯著(P0.05)地優(yōu)于攻毒對照組,與抗生素對照組差異不顯著;7、初步探討復(fù)方中藥對雞大腸桿菌病的治療機制。結(jié)果顯示,與對照組相比,復(fù)方中藥能不同程度降低外周血中轉(zhuǎn)錄因子TLR4、NF-κB,促炎因子TNF-α、IL-1,炎癥趨化因子IL-8、TGF-β4和免疫調(diào)節(jié)因子IFN-γ含量及其mRNA表達水平,提高外周血中IL-10含量及其mRNA表達水平;極顯著地提高或降低發(fā)病雞的免疫器官指數(shù)(P0.01),降低IFN-γ/IL-4比值。提示復(fù)方中藥是通過干預(yù)炎癥、提高雞體免疫水平以及糾正免疫平衡等方式抵抗雞大腸桿菌感染。結(jié)論:1、供試O_2型雞大腸桿菌臨床分離株為產(chǎn)ESBLs的多重耐藥菌株,對阿莫西林、四環(huán)素、多西環(huán)素、慶大霉素、環(huán)丙沙星等5種抗生素高度耐藥,耐藥表型與質(zhì)粒攜帶耐藥基因一致;2、O_2型雞大腸桿菌臨床分離株對復(fù)方中藥(穿心蓮70g、黃連70g、連翹50g)敏感,其機制可能與其破壞菌體結(jié)構(gòu),抑制細菌呼吸代謝有關(guān);3、復(fù)方中藥可顯著降低雞大腸桿菌病發(fā)病率,提高雞大腸桿菌病治愈率及總有效率,改善大腸桿菌病發(fā)病雞只相對增重率;高劑量組復(fù)方中藥治療效果與復(fù)方阿莫西林克拉維酸相當(dāng);4、復(fù)方中藥可影響炎癥因子的轉(zhuǎn)錄與表達,干預(yù)和調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng),改善發(fā)病雞的免疫功能;5、復(fù)方中藥對雞大腸桿菌病的治療作用可能與其抗菌、抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用有關(guān)。
【圖文】：

雞大腸桿菌臨床分離株麥康凱培養(yǎng)ken E. coli clinical isolates cultured i臨床分離株對抗菌藥物的稀釋法檢測 O2型雞大腸桿菌臨床、頭孢菌素類藥物（頭孢噻呋）、氨西環(huán)素）、喹諾酮類藥物（環(huán)丙沙星結(jié)果如圖 3-2 見表 3-1。法檢測 O2型雞大腸桿菌臨床分離

復(fù)壯菌株活力良好。2型雞大腸桿菌臨床分離株麥康凱培養(yǎng)基培養(yǎng)hicken E. coli clinical isolates cultured in MacC桿菌臨床分離株對抗菌藥物的敏感量稀釋法檢測 O2型雞大腸桿菌臨床分離株酸）、頭孢菌素類藥物（頭孢噻呋）、氨基糖苷多西環(huán)素）、喹諾酮類藥物（環(huán)丙沙星、恩諾試驗結(jié)果如圖 3-2 見表 3-1。
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S858.31

【參考文獻】

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本文編號：2642684