【摘要】：本研究從河南某發(fā)病豬場(chǎng)的發(fā)病仔豬腦組織中成功分離到一株偽狂犬病毒,對(duì)該病毒進(jìn)行了鑒定,確定為偽狂犬病毒變異株,命名為HN2012株,并對(duì)其進(jìn)行了gE基因組的擴(kuò)增以及遺傳進(jìn)化分析,同時(shí)對(duì)HN2012株基因缺失疫苗(gE~-、gE~-/gG~-)進(jìn)行了抗體檢測(cè)以及攻毒保護(hù)效果進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。1、偽狂犬病毒變異株的分離鑒定以及遺傳進(jìn)化分析將病料組織上清液接種到BHK-21細(xì)胞上,培養(yǎng)36h后,細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)腫脹、變圓、聚集、出現(xiàn)合胞體等明顯的病變。在經(jīng)過(guò)3次克隆純化的病毒液在BHK-21細(xì)胞上培養(yǎng)可以測(cè)得TCID_(50)為10~(-7.57)/0.1ml。將病毒液接種昆明小鼠、家兔、仔豬等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,均出現(xiàn)典型的偽狂犬癥狀。gE氨基酸序列分析對(duì)比結(jié)果表明,HN2012與其它毒株同源性為94.82%-99.83%。其中與國(guó)內(nèi)分離株同源性為97.07%-99.83%,與國(guó)外分離毒株同源性為94.82%-96.03%,2012年以后分離毒株同源性為99.14%-99.83%。HN2012與其它毒株序列出現(xiàn)1-30不等的變異。以上結(jié)果表明國(guó)內(nèi)分離的PRV毒株已經(jīng)明顯的劃分為兩個(gè)亞群:2012年前分離毒株亞群和2012年后分離毒株亞群。該結(jié)果為今后豬偽狂犬病毒疫苗株的選擇提供了有益的參考。2、疫苗效力的檢驗(yàn)疫苗效力實(shí)驗(yàn)通過(guò)免疫昆明小鼠后攻毒HN2012株來(lái)對(duì)三種疫苗效力進(jìn)行評(píng)價(jià),根據(jù)獸用生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)匯編(2011)中的豬偽狂犬病油乳劑滅活疫苗的效力檢驗(yàn)要求:對(duì)照組全部死亡,實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立,實(shí)驗(yàn)組二免保護(hù)率應(yīng)至少達(dá)到70%,該疫苗的效力檢驗(yàn)合格。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:這三種疫苗的二免保護(hù)率全部高于70%,所以三種疫苗效力檢驗(yàn)全部合格。根據(jù)《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》(2017年版)中豬偽狂犬病滅活疫苗效力檢驗(yàn)規(guī)定,檢驗(yàn)gE~-和gE~-/gG~-對(duì)靶動(dòng)物的效力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明兩種基因工程疫苗株免疫豬血清中和指數(shù)均大于316,結(jié)果判定合格,因此兩株基因缺失滅活疫苗效力檢驗(yàn)都符合國(guó)家《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。綜上所述,本研究檢驗(yàn)的豬偽狂犬病毒變異株HN2012的兩株基因工程疫苗株都具有良好的免疫保護(hù)效果,為我國(guó)豬偽狂犬病防控和疫苗株選擇提供積極的數(shù)據(jù)支持。
【圖文】：

又名豬皰疹病毒 I 型，是豬的皰疹病毒，屬于皰病毒甲亞科又可以分為單皰疹病毒屬，水痘病毒病毒屬等[5]。本亞科大多數(shù)具有細(xì)胞培養(yǎng)生長(zhǎng)迅特性[6],多數(shù)甲亞科皰疹病毒宿主單一，但 PRV 宿基本結(jié)構(gòu)完整的病毒粒子由核心、衣殼、皮層及脂質(zhì)雙層膜的病毒粒子直徑為 150-180nm[7]。核心內(nèi)包含護(hù)基因組 DNA 的核衣殼含有 162 個(gè)殼粒，呈正多糖蛋白。到目前為止，偽狂犬病毒中已發(fā)現(xiàn) gB、gC、gD、gE、gH、gI、gK、gL、gM、gN，其gH/gL，gM/gN 形成異源二聚體[8,9]。這些糖蛋白中L 區(qū)段編碼，，gD、gE、gG、gI 由 US 區(qū)段編碼。

HN2012株gE基因的擴(kuò)增片段Fig.2.1gEamplifiedfragmentsofHN2012strain
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：S852.651

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2639601