【摘要】：急性肺損傷(acute lung injury,ALI)是由多種因素導(dǎo)致的上皮細胞及毛細血管內(nèi)皮細胞損傷,其典型的病理變化是彌漫性肺間質(zhì)和肺泡水腫,臨床癥狀主要表現(xiàn)為低氧性呼吸功能不全,病情嚴(yán)重時死亡率可達到50%。臨床上主要采用抑制炎癥因子、改善氧合、糾正缺氧等治療方案。近年來,也有研究表明中藥具有較好的緩解和治療ALI的作用,且治療效果較為理想。黃酮類化合物是一類廣泛存在于多種中藥中的活性成分,具有降壓、改善血管微環(huán)境、抗氧化、抗菌、抗炎等藥理作用。苘麻為錦葵科苘麻屬一年生草本植物,其葉中含有較豐富的黃酮類化合物。本研究將以苘麻葉總黃酮(Total flavonoids of Abutilon theophrasti Medic.Leaves,TFE)為試驗對象,采用LPS誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷炎癥模型,研究苘麻葉總黃酮的體內(nèi)抗炎作用。試驗中采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測小鼠肺組織勻漿上清液中PGE_2的含量及小鼠肺灌洗液(BALF)中TNF-α、IL-6、IL-10及IL-1β的含量,采用Griess法檢測小鼠肺組織勻漿上清液中NO的含量,評價TFE對炎癥因子和炎癥介質(zhì)分泌的影響;應(yīng)用熒光定量PCR法考察TFE對誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)、環(huán)氧合酶2(COX-2)及炎癥信號通路中ERK1/2、p38α、p65、JNK和IκB的mRNA水平的影響;應(yīng)用免疫蛋白印跡法(Western blot)檢測TFE對炎癥介質(zhì)和炎癥信號通路中iNOS、COX-2、ERK1/2、p38α、p65、JNK和IκB蛋白水平的影響。試驗結(jié)果表明,TFE極顯著地降低了LPS誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷產(chǎn)生的NO、PGE_2、TNF-α、IL-6及IL-1β的含量,同時極顯著增加了IL-10的含量;在基因水平上,TFE顯著地降低iNOS、COX-2、ERK1/2、p38α、p65、JNK的表達量,同時增加了IκB的表達量;在蛋白水平上,苘麻葉總黃酮顯著降低了COX-2的表達量并且極顯著抑制ERK1/2、p38α、p65、JNK蛋白的磷酸化。研究證實TFE通過降低LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷肺小鼠肺組織灌洗液中炎癥因子(TNF-α,IL-6和IL-1β)和炎癥介質(zhì)(NO、PGE_2)的含量直接發(fā)揮抗炎作用;同時還通過降低iNOS、COX-2 mRNA水平和蛋白水平發(fā)揮抗炎作用;在調(diào)控信號通路方面,通過調(diào)控IκB和p65的mRNA水平和蛋白磷酸化水平,從而抑制LPS誘導(dǎo)的NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活;應(yīng)一方面TFE也通過抑制ERK1/2、JNK和p38的mRNA水平和蛋白磷酸化水平,阻止MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活。綜上所述,本研究通過采用小鼠急性肺損傷模型,較為全面地評價了TFE的體內(nèi)抗炎作用,并進一步揭示了TFE可以通過調(diào)控NF-κB和MAPK兩條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制炎癥因子的表達,發(fā)揮抗炎效果,為獸醫(yī)臨床有效防治炎癥提供了參考,為綠色獸藥的研發(fā)提供了新的思路。
【圖文】：

圖 1-3 TFE 對 ALI 小鼠的最適作用濃度篩選結(jié)果Fig. 1-3 The result of the optimum concentration TFE in ALI mice3 可知，苘麻葉總黃酮提取物處理濃度為 250、500、1000mg/kg.b.w 時，TN量依賴性，隨著藥物濃度增加，TNF-α 含量降低。 HE 染色結(jié)果ikawar 等（Mikawar K.et al.，，2003）的方法對以下各組肺組織病理切片對照組小鼠肺組織形態(tài)完整，肺泡壁薄，有極少的炎癥細胞浸潤，肺泡 A）；LPS 對照組組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)模糊，肺泡腔內(nèi)可見大量炎癥細胞浸完整，肺部炎癥明顯為“+++”級（圖 B）；苘麻葉總黃酮高劑量組肺部炎少量炎癥細胞浸潤為“+”級（圖 C）；苘麻葉總黃酮中、低劑量組肺部炎顯為“++”級（圖 D 和 E）；陽性對照組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)完整，與空白對炎癥細胞為“一”（圖 F）。

圖 1-3 TFE 對 ALI 小鼠的最適作用濃度篩選結(jié)果Fig. 1-3 The result of the optimum concentration TFE in ALI mice3 可知，苘麻葉總黃酮提取物處理濃度為 250、500、1000mg/kg.b.w 時，TN量依賴性，隨著藥物濃度增加，TNF-α 含量降低。 HE 染色結(jié)果ikawar 等（Mikawar K.et al.，2003）的方法對以下各組肺組織病理切片對照組小鼠肺組織形態(tài)完整，肺泡壁薄，有極少的炎癥細胞浸潤，肺泡 A）；LPS 對照組組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)模糊，肺泡腔內(nèi)可見大量炎癥細胞浸完整，肺部炎癥明顯為“+++”級（圖 B）；苘麻葉總黃酮高劑量組肺部炎少量炎癥細胞浸潤為“+”級（圖 C）；苘麻葉總黃酮中、低劑量組肺部炎顯為“++”級（圖 D 和 E）；陽性對照組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)完整，與空白對炎癥細胞為“一”（圖 F）。
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S853.74

【參考文獻】

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1 李勇;魏彥明;許斌;;披針葉黃華堿對奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌增殖的影響[J];動物醫(yī)學(xué)進展;2015年12期

2 劉丹丹;曹綱;張琦;葉夷露;韓立凱;葛衛(wèi)紅;;三葉青黃酮經(jīng)p38MAPK和NF-κB途徑抑制老年小鼠急性肺損傷[J];中國藥理學(xué)通報;2015年12期

3 李劍霜;陳芝蕓;蔣劍平;何蓓暉;;胡柚皮黃酮對非酒精性脂肪性肝炎小鼠Th17/Treg平衡的調(diào)節(jié)作用[J];中國中藥雜志;2015年13期

4 宣國平;張琳;鐘明媚;;脂多糖致大鼠急性肺損傷模型取材時間選擇[J];中華實用診斷與治療雜志;2015年02期

5 馮偉;張p苊

本文編號：2639174