發(fā)布時(shí)間：2020-04-24 06:39

【摘要】：豬流行性腹瀉(Porcine epidemic diarrhea,PED)是一種由豬流行性腹瀉病(PEDV)引起的高度接觸性腸道傳染病,其臨床表現(xiàn)為病豬嘔吐、腹瀉、脫水、嚴(yán)重者會(huì)導(dǎo)致死亡。本病從原來(lái)的主要發(fā)生季節(jié)(當(dāng)年11月至次年3月)發(fā)展成全年均可發(fā)生的現(xiàn)象,豬場(chǎng)抗原陽(yáng)性率達(dá)52.24%,屠宰場(chǎng)病原陽(yáng)性率1.87%,各階段的豬均可感染,其中新生仔豬最易感,發(fā)病率高達(dá)100%,病死率可達(dá)80%-100%,給生豬養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。由于目前吉林地區(qū)疫苗免疫無(wú)法有效控制PED的流行,認(rèn)為該地區(qū)PEDV新的變與國(guó)內(nèi)PED疫苗毒株差異較大。為更好地揭示吉林地區(qū)PEDV的遺傳變異及流行規(guī)律,對(duì)吉林地區(qū)PED的防控工作提供更為全面的理論依據(jù),并研究緊急防治措施,減少該病導(dǎo)致的直接經(jīng)濟(jì)損失,規(guī)避養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)。本研究?jī)?nèi)容包括:根據(jù)GenBank公布的PEDV基因序列,應(yīng)用Primer 5.0設(shè)計(jì)特異性引物,對(duì)2016年2月至2018年2月期間采自吉林市及舒蘭、蛟河、永吉、樺甸、磐石6個(gè)縣46個(gè)豬場(chǎng)的310份病料進(jìn)行了RT-PCR檢測(cè),PCR產(chǎn)物經(jīng)克隆后,送上海生工測(cè)。檢測(cè)結(jié)果表明,46個(gè)豬場(chǎng)有19個(gè)豬場(chǎng)為PEDV帶毒豬場(chǎng),陽(yáng)性率為41.3%,310份病料中有80份病料為PEDV陽(yáng)性,陽(yáng)性率為25.8%;其中以永吉的豬場(chǎng)陽(yáng)性率最高,為58.33%,樺甸最低為16.67%;不同季節(jié)中以冬季的豬場(chǎng)陽(yáng)性率居高。經(jīng)分析證明,PED發(fā)病率與地區(qū)、豬場(chǎng)免疫程序、季節(jié)、溫度變化情況關(guān)系顯著,該地區(qū)PEDV與國(guó)內(nèi)多數(shù)流行毒株關(guān)系較近。結(jié)合上述檢測(cè)數(shù)據(jù)對(duì)吉林市某未免疫豬場(chǎng)進(jìn)行PED抗體水平評(píng)估并通過(guò)制定免疫程序、接種方案、生物安全等方案進(jìn)行防控,通過(guò)試驗(yàn)期間3個(gè)階段即2017年5月、2017年12月和2018年2月進(jìn)行的3次PED-ELISA監(jiān)測(cè)結(jié)果表明,按照T-P二聯(lián)弱毒疫苗的免疫程序進(jìn)行全群接種、消毒及生物安全條件下PDE的抗體保護(hù)率呈平穩(wěn)升高趨勢(shì),該方案可為吉林市地區(qū)PED的防控提供參考。
【圖文】：

將吸附柱放入同一個(gè)收集管中，將空吸附柱和收集管放入離心機(jī)，，9 000 g 離心 1min，向吸附膜中央加入預(yù)熱到 60 ℃的 Elution Buffer 共計(jì) 40 μL，室溫孵育 2 min（為提高 DNA 回收濃度，離心后的溶液重新加到吸附柱，再次離心），將所得 DNA 溶液置于-20 ℃保存以備后續(xù)試驗(yàn)使用。1.2.6 克隆與測(cè)序?qū)?2.2.5 步得到的純化基因連接到 pMD18-T 載體，連接后的產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入感受態(tài)細(xì)胞，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物在 170 r/min、37 ℃條件下恒溫?fù)u床內(nèi)擴(kuò)增 2 h，將培養(yǎng)產(chǎn)物仔細(xì)涂布于含AMP、ITPG、X-gal 的培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選，挑取白斑菌落 PCR 再次鑒定，陽(yáng)性菌株送上海生工測(cè)序。測(cè)序結(jié)果應(yīng)用 DNASTAR 軟件進(jìn)行比對(duì)分析。1.3 結(jié)果1.3.1 PCR 鑒定結(jié)果病料經(jīng) RNA 提取、反轉(zhuǎn)錄，PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳結(jié)果如圖 2-1 所示，樣品 3-5、7-14 中的 223bp 出檢測(cè)到清晰的陽(yáng)性條帶，說(shuō)明 PEDV 陽(yáng)性感染。

圖 1-2 基因進(jìn)化樹(shù)Figure 1-2 The phylogenetic tree1.4 討論檢測(cè)結(jié)果表明，在 6 個(gè)市的取樣實(shí)驗(yàn)調(diào)查中，46 個(gè)豬場(chǎng)中有 19 個(gè)豬場(chǎng)為陽(yáng)陽(yáng)性率為 41.30%，310 份病料中有 80 份陽(yáng)性，陽(yáng)性率為 25.80%，通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分吉林市地區(qū)規(guī)�；i場(chǎng) PED 感染嚴(yán)重，其中永吉市、舒蘭市、吉林市這三個(gè)市相嚴(yán)重，樺甸最輕，結(jié)合當(dāng)?shù)氐牡乩砦恢脷夂�，山地氣候此相�?duì)爆發(fā)該種病的幾率比建議盡量保持圈舍采光充足，降低空氣濕度，改善通風(fēng)速率以確保豬群處于優(yōu)良的境中，以提高豬群整體健康狀況從而減輕 PED感染壓力。不同縣市仔豬病料 PCR 試驗(yàn)結(jié)果表明，吉林地區(qū) 6 個(gè)縣市的豬場(chǎng)陽(yáng)性百16.67%～58.33%之間，而病料陽(yáng)性百分比達(dá)到 6.12%～34.92%，這表明吉林市各PED 流行相對(duì)普遍。不同季節(jié)仔豬病料 PCR 試驗(yàn)結(jié)果表明，豬場(chǎng)陽(yáng)性百分比為 14.28%～55.56%，性百分比為 10.71%～37.20%，這表明 PEDV 在吉林省一年四季均可發(fā)生，沒(méi)有明
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S858.28

【參考文獻(xiàn)】

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