【摘要】：羊蜱蠅是一種以綿羊?yàn)橹饕纳拗鞯捏w外寄生蟲(chóng),當(dāng)其寄生于綿羊時(shí),會(huì)引起宿主貧血、消瘦以及羊毛,羊皮質(zhì)量和產(chǎn)量下降,造成直接的經(jīng)濟(jì)損失。此外,羊蜱蠅還可以傳播或貯存巴爾通體、綿羊無(wú)漿體和立克次體等多種病原,對(duì)畜牧養(yǎng)殖業(yè)和人的健康造成威脅,引起間接的經(jīng)濟(jì)損失。本試驗(yàn)從阿克蘇地區(qū)庫(kù)車縣、克州阿克陶縣、阿勒泰青河縣和甘肅武威市共采集羊蜱蠅731只,并從4個(gè)地點(diǎn)所采集的羊蜱蠅中分別挑選出形態(tài)完整的樣品88只(含13個(gè)蛹)、5只、5只和10只,共計(jì)108只樣品,通過(guò)形態(tài)學(xué)特征觀察初步確定為羊蜱蠅,隨后進(jìn)行12S rDNA、16S rDNA和18S rDNA基因的擴(kuò)增。進(jìn)一步對(duì)巴爾通體gltA、殺雄菌16S rDNA、無(wú)漿體屬msp4、綿羊無(wú)漿體GroEL、立克次體ompA以及立克次體17KDa等基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增,陽(yáng)性產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序,對(duì)試驗(yàn)得到所有序列進(jìn)行Blast在線分析,并從GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中下載相應(yīng)基因序列,利用MEGA5.0軟件進(jìn)行同源性和系統(tǒng)進(jìn)化分析,以確定病原的種類。結(jié)果表明,羊蜱蠅12S rDNA序列與云南2016年提交的羊蜱蠅序列同源性為100%;羊蜱蠅16S rDNA序列與丹麥2007年、捷克和新疆2017年提交的羊蜱蠅序列同源性均為99%;羊蜱蠅18S rDNA序列與新疆2016年提交的羊蜱蠅序列同源性為99%。病原檢測(cè)的結(jié)果如下:巴爾通體gltA基因陽(yáng)性率為95%(103/108),與已知Bartonella melophagus gltA的同源性介于99.3%~100%;殺雄菌16S rDNA基因陽(yáng)性率為6.4%(5/78,5份DNA來(lái)源均為羊蜱蠅蛹),與已知羊蜱蠅體內(nèi)檢測(cè)到的殺雄菌16S rDNA的同源性為100%;無(wú)漿體屬msp4基因陽(yáng)性率為39%(42/108,其中5份DNA樣品來(lái)源為羊蜱蠅蛹),與已知綿羊無(wú)漿體msp4序列同源性介于99.3%~99.8%;綿羊無(wú)漿體GroEL基因的陽(yáng)性率為50%(39/78),與已知綿羊無(wú)漿體GroEL序列同源性介于99.1%~100%;立克次體ompA和基因17KDa的陽(yáng)性率均為9%(10/108),與已知R.raoultii序列的同源性分別為99.4%~100%和99.7%~100%;沃爾巴克體16S rDNA基因的陽(yáng)性率為94%(102/108),與多種宿主體內(nèi)檢測(cè)到的沃爾巴克體的同源性為99.6%~100%,進(jìn)一步分析,確定為F超群沃爾巴克體。阿克蘇地區(qū)庫(kù)車縣、克州阿克陶縣、阿勒泰青河縣和甘肅武威市存在主要寄生于綿羊的體外寄生蟲(chóng)——羊蜱蠅,其體內(nèi)攜帶多種病原微生物,提示畜牧業(yè)應(yīng)防范羊蜱蠅可能帶來(lái)的危害,從而減少直接或間接的經(jīng)濟(jì)損失。
【圖文】：

a：雌性羊蜱蠅腹面 4x；b：雄性羊蜱蠅腹面 4x；c：羊蜱蠅的蛹 40x圖 2-1 羊蜱蠅體視顯微鏡觀察結(jié)果Fig. 2-1 Results of stereomicroscope observation of the Melophagus ovinus2.3.2 PCR 擴(kuò)增及測(cè)序?qū)π螒B(tài)學(xué)鑒定為羊蜱蠅的樣本（n=108）進(jìn)行 DNA 提取，用 PCR 的方法進(jìn)行 12SrDNA、16S rDNA 和 18S rDNA 基因片段的擴(kuò)增，PCR 產(chǎn)物經(jīng) 1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)均得到目的條帶，與預(yù)期片段大小一致，電泳圖見(jiàn)圖 2-2。試驗(yàn)所得 PCR 陽(yáng)性產(chǎn)物經(jīng)測(cè)序及 Blast 和 MEGA5.0 軟件分析，發(fā)現(xiàn)均為羊蜱蠅的基因序列，部分序列已上傳至 GenBank 數(shù)據(jù)庫(kù)，并獲得序列登錄號(hào)：MH102302、MH102303（12S rDNA）；MH102311、MH119054（16S rDNA）；MH119055－MH119058（18S rDNA）。

a：雌性羊蜱蠅腹面 4x；b：雄性羊蜱蠅腹面 4x；c：羊蜱蠅的蛹 40x圖 2-1 羊蜱蠅體視顯微鏡觀察結(jié)果Fig. 2-1 Results of stereomicroscope observation of the Melophagus ovinus2.3.2 PCR 擴(kuò)增及測(cè)序?qū)π螒B(tài)學(xué)鑒定為羊蜱蠅的樣本（n=108）進(jìn)行 DNA 提取，用 PCR 的方法進(jìn)行 12SrDNA、16S rDNA 和 18S rDNA 基因片段的擴(kuò)增，PCR 產(chǎn)物經(jīng) 1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)均得到目的條帶，，與預(yù)期片段大小一致，電泳圖見(jiàn)圖 2-2。試驗(yàn)所得 PCR 陽(yáng)性產(chǎn)物經(jīng)測(cè)序及 Blast 和 MEGA5.0 軟件分析，發(fā)現(xiàn)均為羊蜱蠅的基因序列，部分序列已上傳至 GenBank 數(shù)據(jù)庫(kù)，并獲得序列登錄號(hào)：MH102302、MH102303（12S rDNA）；MH102311、MH119054（16S rDNA）；MH119055－MH119058（18S rDNA）。
【學(xué)位授予單位】：塔里木大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S852.74

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2638023