【摘要】：精氨酸(L-Arg)是哺乳動物必需或條件性必需氨基酸,在胚胎發(fā)育中起著關(guān)鍵作用,且L-Arg幼齡動物體內(nèi)是以必需氨基酸的功能存在的,具有重要的生物機體內(nèi)調(diào)節(jié)功能。眾所周知,動物在妊娠過程中,生理上發(fā)生改變,如血液粘稠度增加、血壓升高、某些凝血因子增加致血液呈高凝狀態(tài)等血液流變學(xué)改變以及機體免疫力降低等。L-Arg能夠擴張血管,并且能明顯增加子宮胎盤血流量、改善血漿粘度和提升紅細胞數(shù)量及變形能力,從而優(yōu)化胚胎生長發(fā)育環(huán)境,而Ca~(2+)在其代謝調(diào)控中發(fā)揮重要作用。Ca~(2+)作為機體的第二信使,并且是各項生命活動中必不可少的物質(zhì),如參與神經(jīng)傳導(dǎo)、胚胎的著床與發(fā)育、能量的傳遞以及基因的表達調(diào)控等,在胚胎正常發(fā)育中起著重要作用。維拉帕米作為常規(guī)的Ca~(2+)阻滯劑能夠高效地抑制胞外Ca~(2+)內(nèi)流,從而降低胞內(nèi)Ca~(2+)濃度,因此在確定精氨酸能夠有效緩解IUGR(intrauterine growth retardation,宮內(nèi)發(fā)育遲緩)的基礎(chǔ)上探究Ca~(2+)在此過程中的影響機制,本試驗通過在添加最適濃度精氨酸的前提下補充添加維拉帕米作為實驗對照研究胚胎的發(fā)育情況,并通過測定不同發(fā)育日齡胚胎的體重、相對應(yīng)胎盤重以及母鼠子宮重來判斷L-Arg和維拉帕米對胚胎IUGR的影響、運用常規(guī)石蠟切片進行巨噬細胞和肥大細胞(MC)的觀察計數(shù)、運用免疫組化方法對微血管內(nèi)皮細胞和鈣調(diào)蛋白陽性細胞進行觀察計數(shù)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)探究鈣依賴型一氧化氮合酶(e NOE和n NOS)的變化量、原位雜交方法探究m RNA的表達量等試驗方案,來闡述Ca~(2+)在緩解IUGR中的作用并篩選出最優(yōu)化結(jié)合蛋白。研究結(jié)果如下:1、精氨酸組胎鼠數(shù)量、胎鼠存活率、胎鼠體重、母鼠子宮重等IUGR指標(biāo)顯著高于對照組(P0.05),維拉帕米組顯著降低(P0.05)或極顯著低于精氨酸組(P0.01)。2、精氨酸組子宮MC數(shù)顯著(P0.05)或極顯著(P0.01)低于對照組及維拉帕米組;精氨酸組子宮巨噬細胞數(shù)較對照組顯著(P0.05)增多,維拉帕米組對對照組顯著(P0.05)減少,精氨酸組與維拉帕米組差異極顯著(P0.01);精氨酸組子宮微血管(MVD)數(shù)對照組顯著增多(P0.05)維拉帕米組顯著(P0.05)減少。3、L-Arg能夠使子宮胎盤中Ca~(2+)依賴型e NOS和n NOS的含量整體趨勢增多(P0.05),而添加維拉帕米后會使e NOS和n NOS的含量整體趨勢減少(P0.05),但在不同的日齡中會存在小幅度的波動性,且胎盤中e NOS和n NOS的含量顯著低于子宮中(P0.05)。4、對五種優(yōu)化Ca~(2+)結(jié)合蛋白運用免疫組化分析篩選,測定陽性細胞表達量以及變化率從而篩選出最優(yōu)結(jié)合蛋白,由高到低的順序依次為:鈣調(diào)蛋白(Ca M)、鈣磷脂結(jié)合蛋白AnnexinⅡ、蛋白激酶C(PKC)、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(Ca N)、Orail。并針對最優(yōu)選蛋白Ca M進行基因表達測定,發(fā)現(xiàn)維拉帕米組m RNA表達量顯著低于對照組(P0.05)或極顯著低于精氨酸組(P0.01)。綜上所述:精氨酸能夠從提高母畜產(chǎn)子數(shù)和增強子宮重、提高胎鼠重量、減少胎鼠死亡率等方面增強母畜的繁殖能力,并且能夠增加巨噬細胞和微血管內(nèi)皮細胞數(shù)量、增強子宮胎盤中e NOS和n NOS的含量以及增強Ca~(2+)結(jié)合蛋白及基因的表達,而維拉帕米能夠抑制這種促進作用,表明Ca~(2+)在妊娠期胎兒正常生長發(fā)育中起著關(guān)鍵性作用。
【學(xué)位授予單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S816;S814

【參考文獻】

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1 黎楊芬;周書進;王小娟;何s，

本文編號：2637666