【摘要】：我國(guó)現(xiàn)行的死宰豬肉鑒別方法主要是感官檢驗(yàn)和定性檢測(cè),其結(jié)果均不能提供準(zhǔn)確和定量化數(shù)據(jù),難以形成可靠的死宰豬肉鑒別標(biāo)準(zhǔn)。本研究以死宰豬肉為研究對(duì)象,通過(guò)建立豬血紅蛋白(Hemoglobin,Hb)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)方法,構(gòu)建了以豬肉中過(guò)氧化物酶(Peroxidase,POD)和Hb為雙檢測(cè)靶標(biāo)的死宰豬肉鑒別方法。本研究主要內(nèi)容如下:1.豬Hb單克隆抗體的制備及ELISA建立。以豬Hb為抗原,免疫BALB/c小鼠,利用雜交瘤技術(shù),經(jīng)4次亞克隆及篩選,獲得11株可穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交細(xì)胞瘤株,經(jīng)Western Blot鑒定11株單抗均具有良好的特異性;其中4株(G、H、Z4、Z5)單克隆抗體效價(jià)為6.4×10~5;利用單抗Z4為包被抗體,單抗G為酶標(biāo)抗體,建立了豬肉Hb雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法。2.幾種死宰豬肉鑒別方法的研究分析。肉樣經(jīng)手剪法和機(jī)攪法處理后,通過(guò)測(cè)定死宰豬肉相關(guān)指標(biāo)pH、POD、Hb,研究4種方法的準(zhǔn)確性,結(jié)果表明,機(jī)攪法處理的肉樣檢測(cè)結(jié)果優(yōu)于手剪法;其中POD檢測(cè)法和血紅蛋白ELISA檢測(cè)法的符合率高于另外兩種方法,然而單一的檢測(cè)方法均不能作為鑒別死宰豬肉的判定標(biāo)準(zhǔn)。3.以POD和Hb雙靶標(biāo)檢測(cè)鑒別死宰豬肉方法的建立。確定了肉浸液10倍稀釋、浸泡10 min為樣本最佳前處理?xiàng)l件,建立了以豬肉POD和Hb濃度為雙檢測(cè)靶標(biāo)的鑒別死宰豬肉方法,鑒別準(zhǔn)確率可達(dá)到95.5%;研究分析符合率,確定了死宰豬肉和健康豬肉的判定標(biāo)準(zhǔn)R值,即R≤300時(shí)為健康豬肉,R≥400時(shí)為死宰豬肉。綜上所述,本研究建立豬血紅蛋白ELISA檢測(cè)方法,構(gòu)建了以豬肉POD和Hb為雙檢測(cè)靶標(biāo)的死宰豬肉鑒別方法,為臨床死宰豬肉鑒別提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。
【圖文】：

表 2-7 豬血紅蛋白單克隆抗體亞類測(cè)定Table.2-7 Determination of porcine hemoglobin monoclonal antibody subclass序號(hào) 名稱 重鏈 輕鏈1# 1H9-F11-A3 IgG2a Kappa2# 1A12-F4-B10-H7 IgG2a Kappa3# 3B10-G3-E11-A7 IgG1 Kappa4# 3B8-C12-H3-H10 IgG1 Kappa5# 3B8-A8-D5-A4 IgG1 Kappa6# 4D8-H1-A7-G2-A1 IgG1 Kappa7# 4D8-E3-H3-A10-H8 IgG1 Kappa8# 4H6-G8-D6-B2-B4 IgG1 Kappa9# 4H6-H9-G12-G5-G9 IgG1 Kappa10# 4F6-F6-G8-H12 IgG1 Kappa11# 4F6-F5-A10-H12 IgG1 Kappa2.3.5 Western Blot 鑒定單克隆抗體Western Blot 檢測(cè)結(jié)果顯示，，篩選出的 11 株抗豬血紅蛋白單克隆抗體豬血紅蛋白發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)，結(jié)果表明 11 株單抗均有較好的特異性（圖25kD
【學(xué)位授予單位】：河北工程大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S851.43

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本文編號(hào)：2623593