發(fā)布時(shí)間：2020-04-11 05:26

【摘要】：海南霉素是一種聚醚類抗生素,是用于防治雞球蟲病的原創(chuàng)性專用藥物。目前海南霉素主要用于防治畜禽球蟲病,特別是在雞場(chǎng)球蟲對(duì)現(xiàn)有抗球蟲藥存在抗藥性的情況下,海南霉素的效果尤為顯著。本試驗(yàn)旨在通過(guò)對(duì)海南霉素鈉預(yù)混劑在雞體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)和生物利用度研究,了解海南霉素鈉預(yù)混劑口服給藥在雞體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征。該研究對(duì)豐富和完善國(guó)產(chǎn)一類新獸藥的臨床藥理學(xué)資料具有重要現(xiàn)實(shí)意義。1.建立血漿中海南霉素的HPLC-MS/MS測(cè)定方法選擇ESI+電離模式,將制備好的質(zhì)譜調(diào)諧溶液通過(guò)質(zhì)譜儀針泵恒流方式進(jìn)樣,先進(jìn)行Q1掃描(Q1 Scan),首先確定海南霉素的母離子。然后通過(guò)產(chǎn)物離子掃描方式(Product Ion Scan),掃描范圍為m/z 600-1000,確定海南霉素母離子的子離子質(zhì)荷比。根據(jù)定量分析流程,確定海南霉素的母離子為m/z907.6,子離子為m/z863.6和m/z845.6,優(yōu)化得到碰撞能(CE)值為32.0eV,碰撞室射出電壓(CXP)為12.0V,攝入電壓(EP)為 10.0 V。雞血漿中的海南霉素以液液萃取法提取,采用Ultimate UHPLC XB-C18(1.8 lμm,2.1×100 mm)色譜柱和等度洗脫分離待測(cè)樣品中的各組分;使用三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式進(jìn)行定量分析,外標(biāo)法定量。流動(dòng)相A是乙腈,B是0.1%甲酸水溶液(含5 mmol/L乙酸銨),流速為0.4 mL/min,進(jìn)樣量為5μL。在選定的色譜條件下,海南霉素在1-500 ng/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)大于0.999。本方法的檢測(cè)限(LOD)和定量限(LOQ)分別為0.5 ng/mL和1 ng/mL。高、中、低三個(gè)濃度空白血漿添加樣品(1、100、500 ng/mL)的批間回收率分別為95.6±6.36%、101.6±5.78%、94.0±5.88%,日內(nèi)變異系數(shù)分別為 5.42-7.65%、4.94-6.22%和 5.44-6.80%,日間變異系數(shù)在5.70-6.66%之間。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和待測(cè)樣品中的待測(cè)物在給定條件下均具有較高的穩(wěn)定性,基質(zhì)效應(yīng)不明顯。方法學(xué)研究結(jié)果表明,本試驗(yàn)建立的雞血漿中海南霉素含量HPLC-MS/MS測(cè)定方法適用于雞血漿中海南霉素含量的測(cè)定。2.海南霉素在雞體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)及利用度研究16只健康A(chǔ)A雞(平均體重:3±0.51 kg)隨機(jī)分成2組,每組8只。采用平行試驗(yàn)設(shè)計(jì)分別進(jìn)行口服給藥和靜脈注射給藥藥動(dòng)學(xué)研究。第1組1-8號(hào)雞單劑量經(jīng)口灌服1.5 mg/kg bw的海南霉素鈉溶液,第2組9-16號(hào)雞單劑量靜脈注射1.5 mg/kg bw的海南霉素鈉注射液(相當(dāng)于7.5 mg/kg混飼),給藥前禁食12 h,給藥2 h后恢復(fù)正常飲水。在預(yù)定時(shí)間點(diǎn)采集血樣,并通過(guò)HPLC-MS/MS三重四級(jí)桿檢測(cè)器分析血漿中海南霉素的含量,流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸水溶液(90:10,V/V)。實(shí)測(cè)血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)使用Winnonlin5.2藥動(dòng)學(xué)分析軟件擬合藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。結(jié)果顯示,口服給藥組的平均消除半衰期(T[/2)為28.07 h,平均滯留時(shí)間(MRT)為8.40h,在血漿中的達(dá)峰時(shí)間(Tmmax)為0.5 h,達(dá)峰濃度(Cmax)為68.88 ng/mL,0-24 h的平均藥時(shí)曲線下面積(AUC0-24h)為307.23 ng·h/mL,按AUC0-24h估算的平均生物利用度(F0-24h)為16.97%。單劑量靜脈注射組的平均消除半衰期(T1/2)為46.32 h,平均滯留時(shí)間(MRT)為3.31 h,平均血漿清除率(CL)為0.58 1/(kg·h),平均表觀分布容積(Vd)為35.52 L/kg。結(jié)果表明,口服海南霉素鈉預(yù)混劑吸收迅速,但吸收不完全;進(jìn)入雞體內(nèi)后海南霉素分布廣泛,消除緩慢,半衰期長(zhǎng)。
【圖文】：

圖１－１海南霉素化學(xué)結(jié)構(gòu)逡逑Ｆｉｇ．邋１－１邋Ｃｈｅｍｉｃａｌ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋Ｈａｉｎａｎｍｙｃｉｎ逡逑理逡逑素是一種羧酸類的離子載體類抗生素，其作用機(jī)理是與球蟲機(jī)體細(xì)胞子結(jié)合形成脂溶性絡(luò)合物，干擾細(xì)胞正常的離子轉(zhuǎn)運(yùn)，鉀離子、鈉離子聚，破壞滲透壓平衡。由于離子轉(zhuǎn)運(yùn)異常導(dǎo)致了細(xì)胞內(nèi)陽(yáng)離子過(guò)多，，胞以平衡滲透壓，細(xì)胞不斷耗能且出現(xiàn)腫脹，最終球蟲細(xì)胞過(guò)度腫脹，［２８１。逡逑究逡逑等＾研宄發(fā)現(xiàn)，在２１天飼喂試驗(yàn)中，肉雞連續(xù)食用含有５－２０邋ｍｇ／ｋｇ濃度飼料，沒有出現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng)癥狀，表明海南霉素混飼給藥的安全在飼料中的添加量超過(guò)３０邋ｍｇ／ｋｇ的濃度時(shí)，出現(xiàn)肉雞采食量減少的現(xiàn)在過(guò)高濃度時(shí)會(huì)對(duì)肉雞的采食產(chǎn)生抑制作用。急性毒性試驗(yàn)的結(jié)果表明，，組

邐顧夢(mèng)恬：海南霉素鈉預(yù)混劑在雞體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)及生物利用度研究邐１５逡逑分別制得３個(gè)濃度為１邋ｎｇ／ｍＬ、１００邋ｎｇ／ｍＬ和５００邋ｎｇ／ｍＬ的空白血i}添加樣品，每個(gè)逡逑濃度做６個(gè)平行樣品。按“２．２．１．２”項(xiàng)下血漿樣品預(yù)處理方法處理后，將濾液移至自動(dòng)進(jìn)樣逡逑瓶后放置于自動(dòng)進(jìn)樣器內(nèi)（４邋°Ｃ）約８邋ｈ，分別于０邋ｈ、８邋ｈ時(shí)按照“２．２．２”項(xiàng)下的色譜與質(zhì)逡逑譜條件進(jìn)行測(cè)定，考察提取液在樣品室內(nèi)短期放置的穩(wěn)定性。逡逑３結(jié)果逡逑３．１母離子與定性、定量子離子的確定逡逑針泵吸取海南霉素工作液，采用ＥＳＩ＋掃描模式，其母離子的質(zhì)荷比為［Ｍ＋Ｈ］＋９０７，結(jié)逡逑果見圖２－１。在確定海南霉素的母離子后，采用離子掃描模式（Ｐｒｏｄｕｃｔ邋Ｉｏｎ邋Ｓｃａｎ）進(jìn)行二逡逑級(jí)質(zhì)譜掃描，得到相應(yīng)子離子：ｍ／ｚ邋８４５．６和ｍ／ｚ邋８６３．６，子離子掃描圖見圖２－２。優(yōu)化碰逡逑撞能（ＣＥ），優(yōu)化后的參數(shù)見表２－１。海南霉素的母離子為ｍ／ｚ邋９０７．６，子離子為ｍ／ｚ逡逑８６３．６和ｍ／ｚ邋８４５．６，離子強(qiáng)度良好，質(zhì)譜圖滿足相關(guān)要求且結(jié)果與Ｗａｎｇｌ５５］等報(bào)道的結(jié)果逡逑相一致。逡逑
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S858.31

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8 Stevenson IH;張s鉈

本文編號(hào)：2623208