【摘要】：枯草芽孢桿菌(B.subtilis)具有維持腸道微生態(tài)平衡、促進機體健康的功能,其飼喂效果受腸道環(huán)境影響較大,而抗生素的長期使用會影響腸道微生態(tài)平衡,而兩者聯(lián)用可能發(fā)揮協(xié)同作用。現(xiàn)階段枯草芽孢桿菌的添加主要集中于產(chǎn)蛋期,開產(chǎn)前的營養(yǎng)常常被忽略,因此本試驗將枯草芽孢桿菌與非治療劑量的桿菌肽鋅(Zinc Bacitracin,ZB)聯(lián)用并根據(jù)蛋雞開產(chǎn)前(0~16周齡)生理特點所分的四個階段(0~3、4~6、7~12和13~16周齡)進行混合階段性添加,探索其對蛋雞生長發(fā)育和腸道健康的影響以及是否能通過兩者聯(lián)用改善單獨使用抗生素造成的腸道微生態(tài)失調(diào),以期通過短期的聯(lián)用達到持續(xù)性的作用從而替代長期使用抗生素,為枯草芽孢桿菌在蛋雞生產(chǎn)中的應(yīng)用方式和添加階段提供理論依據(jù)。試驗包括三部分:試驗一B.subtilis和ZB階段性添加對0~16周齡蛋雞生長性能的影響本試驗將630只1日齡海蘭褐雛雞隨機分為5個處理,每處理7個重復(fù),每重復(fù)18只雞,試驗期16周。試驗共分為五個處理:1)AGP組:0~16周齡均飼喂基礎(chǔ)日糧+桿菌肽鋅(Zinc Bacitracin,20 mg/kg,下同);2)BA3組:0~3周齡飼喂基礎(chǔ)日糧+Zinc Bacitracin+B.subtilis(500 mg/kg,下同),4~16周齡飼喂基礎(chǔ)日糧;3)BA6組:0~6周齡飼喂基礎(chǔ)日糧+Zinc Bacitracin+B.subtilis,7~16周齡飼喂基礎(chǔ)日糧;4)BA12組:0~12周齡飼喂基礎(chǔ)日糧+Zinc Bacitracin+B.subtilis,13~16周齡飼喂基礎(chǔ)日糧;5)BA16組:0~16周齡飼喂基礎(chǔ)日糧+Zinc Bacitracin+B.subtilis。結(jié)果顯示:1)枯草芽孢桿菌和桿菌肽鋅在各階段的混合添加對0~16周齡蛋雞平均體重、平均日采食量、平均日增重和料重比均無顯著影響(P0.05);2)各處理對3、6周齡免疫和消化器官指數(shù)、十二指腸淀粉酶、脂肪酶活性無顯著影響(P0.05),對12周齡脛骨和龍骨長度無顯著影響(P0.05),但各組的脛骨長度基本達到標(biāo)準,對16周齡脂肪沉積也無顯著影響。本試驗結(jié)果表明:0~3周齡的階段性聯(lián)用可使12周齡青年蛋雞體尺和開產(chǎn)前體重達標(biāo),對0~16周齡蛋雞的生長發(fā)育有持續(xù)性效果。試驗二B.subtilis和ZB階段性添加對0~16周齡蛋雞腸道健康的影響本試驗分別于3、6、12、16周齡采集蛋雞十二指腸、空腸和回腸腸道黏膜和腸段樣品。腸段用來制作石蠟切片觀察腸道形態(tài),黏膜樣品通過RT-qPCR技術(shù)測定腸道二糖酶、緊密連接蛋白(ZO-1和Occludin)、黏蛋白(Mucin2)的mRNA表達水平,通過ELISA法檢測黏膜sIgA的含量。結(jié)果顯示:1)BA3組顯著降低了3周齡十二指腸和空腸隱窩深度(P0.05),且十二指腸絨毛高度/隱窩深度比值有升高的趨勢(P=0.058),但顯著降低了空腸和回腸絨毛高度(P0.05),而12周齡時,BA3組空腸絨毛高度顯著高于AGP組和BA6組(P0.05),而各階段添加組相比于AGP組回腸絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度比值均顯著升高(P0.05),且回腸隱窩深度顯著降低(P0.05),16周齡時,BA16組的絨毛高度顯著高于AGP組和BA6組(P0.05),而與BA3和BA12組無顯著差異(P0.05);2)BA3組蛋雞6周齡的十二指腸和回腸蔗糖酶基因表達相比于BA6組顯著上調(diào)(P0.05),而12周齡空腸蔗糖酶基因表達相比于AGP和BA6組顯著上調(diào)(P0.05);3)各組對0~16周齡蛋雞小腸ZO-1、Occludin、Mucin2 mRNA水平無顯著影響(P0.05);4)BA3組顯著提高了16周齡空腸黏膜sIgA含量(P0.05),其余組間均無顯著差異(P0.05)。本試驗結(jié)果表明,0~3周齡的階段性聯(lián)用改善7~12周齡小腸形態(tài)和蔗糖酶基因的表達以及13~16周齡黏膜免疫功能,從而維持蛋雞全期的生長發(fā)育。試驗三B.subtilis和ZB階段性添加對0~16周齡蛋雞盲腸微生物的影響本試驗分別于3、6、12、16周齡采集蛋雞盲腸內(nèi)容物樣品,針對16s rDNA V4區(qū)進行高通量測序,檢測盲腸菌群結(jié)構(gòu)和群落演替規(guī)律,同時篩選出四種菌進行絕對定量。結(jié)果顯示:1)3周齡時,BA3組優(yōu)勢菌門為厚壁菌門(91.6%)和柔膜菌門(5.7%),AGP組優(yōu)勢菌門為厚壁菌門(81.9%)、擬桿菌門(10.0%)和柔膜菌門(5.3%),而到6周齡時,BA3組優(yōu)勢菌門仍為厚壁菌門(85.8%)和柔膜菌門(9.9%),擬桿菌門比例僅占2.6%,而AGP組和BA6組優(yōu)勢菌門均為厚壁菌門(67.1~68.1%)、擬桿菌門(26.7~28.8%)和柔膜菌門(2.2~2.3%),但到7~16周齡,菌群結(jié)構(gòu)趨于穩(wěn)定,優(yōu)勢菌門穩(wěn)定為厚壁菌門和擬桿菌門;2)3周齡時,BA3組Anaerotruncus屬相對豐度均顯著低于AGP組(P0.05);6周齡時BA3組Alistipes、Bacteroides、Odoribacter、Dehalobacterium等屬的相對豐度最低(P0.05),而Lactobacillus、Dorea、Oscillospira、Ruminococcus、Anaeroplasma等屬的相對豐度均最高(P0.05),而Sutterella相對豐度顯著低于BA6組(P0.05),但與AGP組無顯著差異(P0.05);12周齡時,BA12組厚壁菌門[Ruminococcus]的相對豐度顯著高于ZB組和BA6組(P0.05),而BA6組Oscillospira的相對豐度顯著低于其他組(P0.05),Bilophila的相對豐度顯著高于其他組(P0.05);16周齡時,大部分菌群結(jié)構(gòu)趨于穩(wěn)定,該階段僅BA3組變形菌門的Sutterella相對豐度顯著高于其他組(P0.05),各處理對其余菌屬均無顯著影響(P0.05);3)PCoA分析結(jié)果顯示,蛋雞0~16周齡盲腸微生物的發(fā)育和演替也具有階段性,且混合添加比單獨添加桿菌肽鋅具有明顯的調(diào)控和改善作用;4)6周齡時,BA6組盲腸大腸桿菌的數(shù)量顯著低于BA3組(P0.05),但與桿菌肽鋅組無顯著差異(P0.05);12周齡時,各階段混合添加組盲腸脆弱擬桿菌的數(shù)量均顯著升高(P0.05),而BA3和BA6組盲腸柔嫩梭菌的數(shù)量均顯著高于桿菌肽鋅組(P0.05),但盲腸大腸桿菌和沙門氏菌數(shù)量無明顯變化(P0.05);16周齡時,短期和長期的混合添加對盲腸脆弱擬桿菌、柔嫩梭菌、大腸桿菌和腸炎沙門氏菌的數(shù)量均無顯著影響(P0.05)。本試驗結(jié)果表明,枯草芽孢桿菌和桿菌肽鋅在0~3周齡短期的階段性聯(lián)用能夠通過改善0~6周齡微生物結(jié)構(gòu)和維持后期微生態(tài)平衡,進而改善腸道健康,維持蛋雞各階段器官系統(tǒng)的發(fā)育和全期的生長發(fā)育,從而在不影響蛋雞生長發(fā)育基礎(chǔ)上減少了桿菌肽鋅的使用周期,部分替代桿菌肽鋅的使用。綜上所述,桿菌肽鋅的添加通過減少總菌的數(shù)量對機體發(fā)揮促生長作用,且可能引起腸道微生物失調(diào)和炎癥的發(fā)生。而0~3周混合添加枯草芽孢桿菌和桿菌肽鋅在前期主要調(diào)節(jié)腸道微生物區(qū)系的平衡,尤其在6周齡,促進Lactobacillus、Oscillospira和Ruminococcus等有益厭氧菌的生長,雖然延緩了擬桿菌門的發(fā)育,但改善了腸道炎癥相關(guān)菌群,從而維持了腸道健康,保證各階段器官和系統(tǒng)的正常發(fā)育。由于腸道微生物發(fā)育和成熟的階段性,早期的聯(lián)用在微生物建立和發(fā)育的階段發(fā)揮了重要作用并能夠持續(xù)影響后期,因而在7~12周齡微生物已趨于穩(wěn)定的階段,主要發(fā)揮了促進腸道健康、改善小腸消化吸收和黏膜免疫功能的作用,使得機體在全期均能維持正常的生長發(fā)育,從而達到開產(chǎn)前的標(biāo)準。
【圖文】：

更高效的系統(tǒng)，從而促進生長�？赡馨p少養(yǎng)分的競爭、抑制病原菌性地留下能從日糧中獲得更多能量的微生物（Gaskins et al. 2002；Dibner主中心假說則認為，這種促生長作用與腸道微生物無關(guān)。由于微生物、之間相互作用、相互影響，因此抗生素可能通過直接或間接的作用影響（Brown et al. 2017）。腸道不僅是消化器官，也是重要的免疫器官，腸的相互作用能控制腸道炎癥的發(fā)生，而這種免疫抑制假說則認為，，抗生腸黏膜炎癥，以減少用來維持免疫應(yīng)答的異化作用（分解代謝）的消耗養(yǎng)物質(zhì)參與到同化作用（合成代謝）中，如肌肉的發(fā)育（Costa et al. 201生長的作用。

圖 3-2 6 周齡蛋雞小腸黏膜蔗糖酶（左）和麥芽糖酶（右）mRNA 表達水平Fig. 3-2 Levels of transcripts of sucrase (left) and maltase (right) on intestinal mucosa of pullets in4~6 weeks蛋雞 12 周齡小腸黏膜蔗糖酶和麥芽糖酶 mRNA 水平見圖 3-3。如圖所示，枯草芽孢桿菌和桿菌肽鋅 0~3 周齡的混合添加顯著提高了空腸黏膜蔗糖酶基因的相對表達量（P<0.05），但與 0~12 周齡的混合添加相比無顯著影響（P>0.05），而在十二指腸和回腸黏膜對蔗糖酶基因的表達未產(chǎn)生顯著影響（P>0.05）�？莶菅挎邨U菌和桿菌肽鋅各階段的混合添加均未影響十二指腸、空腸和回腸麥芽糖酶基因的表達（P>0.05）。abababb0.00.51.01.52.0Duodenum Jejunum IleumelativeRSucrase0.00.51.01.52.0Duodenum Jejunum IleumelativeRMaltase
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S831.5

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 孫笑非;溫俊;;枯草芽孢桿菌對溫度、pH及抗生素耐受性的研究[J];飼料研究;2009年08期

2 潘康成 ,楊金龍 ,王振華 ,馮軾 ,張鈞利 ,莊俊峰 ,曾靜康;枯草芽孢桿菌制劑對肉雞生長、胴體和雞肉品質(zhì)的影響[J];中國飼料;2005年20期

3 趙智華;抗生素與益生素組合對肉鴨生產(chǎn)性能的影響[J];飼料工業(yè);2002年07期

本文編號：2621022