【摘要】：共軛亞油酸(CLA)具有抗癌、預(yù)防肥胖癥、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力和預(yù)防心血管疾病等功效,如何提高反芻動(dòng)物肉中CLA含量已經(jīng)成為科研工作者的研究熱點(diǎn)。動(dòng)物品種、生理狀況和日糧組成都可能影響動(dòng)物CLA含量,日糧作為生長(zhǎng)代謝的物質(zhì)直接提供合成CLA的重要原料亞油酸(LA),部分LA在瘤胃內(nèi)直接合成CLA被小腸吸收,另一部分LA在瘤胃內(nèi)進(jìn)行一系列的生化反應(yīng)生成TVA,被瘤胃壁和小腸吸收,在體內(nèi)與有關(guān)酶反應(yīng)最終形成CLA。本試驗(yàn)通過(guò)在生長(zhǎng)階段黑山羊日糧中添加大豆油的方式調(diào)節(jié)LA含量,旨在探索貴州黑山羊以大豆油作為飼料LA的主要來(lái)源,研究對(duì)其生長(zhǎng)性能、屠宰性能、肉品質(zhì)和CLA含量的影響。此外,溶纖維丁酸弧菌作為反芻動(dòng)物中重要的脂肪酸代謝細(xì)菌,會(huì)間接影響反芻動(dòng)物CLA的合成。本試驗(yàn)還通過(guò)對(duì)貴州黑山羊體內(nèi)分離的溶纖維丁酸弧菌進(jìn)行體外添加LA培養(yǎng),探索LA對(duì)丁溶纖維酸弧菌生長(zhǎng)和代謝的影響。觀測(cè)丁酸弧菌在不同含量水平LA的培養(yǎng)基中顯微結(jié)構(gòu)、脂肪酸代謝、核苷酸含量和LA利用率等的變化。試驗(yàn)一:日糧不同LA添加水平對(duì)生長(zhǎng)期貴州黑山羊生長(zhǎng)性能和共軛亞油酸沉積量的影響。試驗(yàn)選用健康、體重基本一致(18.3±2.5kg)的5-6月齡貴州黑山羊(公羊)24只,隨機(jī)分為4組(對(duì)照組、試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組、試驗(yàn)3組),每組6只。以大豆油作為L(zhǎng)A含量的調(diào)控物質(zhì),飼喂不同大豆油添加水平精料和全株青貯玉米進(jìn)行飼養(yǎng)對(duì)比試驗(yàn)。試驗(yàn)羊日糧大豆油的添加水平分別為試驗(yàn)1組添加2%,試驗(yàn)2組添加3%,試驗(yàn)3組添加4%,對(duì)照組不添加,大豆油中LA的含量為50%。試驗(yàn)期為60天,包括預(yù)試期15天,正試期45天。試驗(yàn)結(jié)果如下:(1)對(duì)生長(zhǎng)性能的影響:各組試驗(yàn)羊之間精料干物質(zhì)采食量、青貯玉米干物質(zhì)采食量、干物質(zhì)總采食量差異不顯著(P0.05);平均日增重試驗(yàn)3組為63.1g/d顯著高于其他組(P0.05),試驗(yàn)2組顯著高于試驗(yàn)1組和對(duì)照組(P0.05),試驗(yàn)1組對(duì)照組之間差異不顯著(P0.05);料重比對(duì)照組顯著高于其他試驗(yàn)組(P0.05)。(2)對(duì)屠宰性能的影響:各組試驗(yàn)羊胴體重、屠宰率、背膘厚、眼肌面積等指標(biāo)差異不顯著(P0.05);KPHfat試驗(yàn)3組顯著高于其他試驗(yàn)組和對(duì)照組(P0.05),KPHfat百分比試驗(yàn)3組與試驗(yàn)2組差異不顯著(P0.05)但顯著高于試驗(yàn)1組和對(duì)照組(P0.05),試驗(yàn)1組合對(duì)照組差異不顯著(P0.05)。(3)對(duì)肉品質(zhì)的影響:各組羊肉pH、滴水損失和剪切力差異不顯著(P0.05),試驗(yàn)2組肉色L*值顯著高于試驗(yàn)3組合對(duì)照組(P0.05),試驗(yàn)1組與試驗(yàn)3組及對(duì)照組差異不顯著(P0.05);試驗(yàn)1組肉色a*值顯著高于其他組(P0.05),其他組之間差異不顯著(P0.05);肉色b*值各組之間差異不顯著(P0.05)。(4)對(duì)血漿、肌肉及皮下脂肪中脂肪酸含量的影響試驗(yàn)結(jié)果表明:(1)血漿中C18∶c9,t11含量各試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P0.05),但各試驗(yàn)組之間差異不顯著(P0.05);C18∶t10,c12含量試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組之差異不顯著(P0.05),但顯著高于試驗(yàn)1組和對(duì)照組(P0.05);共軛亞油酸總量試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P0.05),但試驗(yàn)組之間差異不顯著(P0.05)。各試驗(yàn)組和對(duì)照組之間飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸含量差異不顯著(P0.05)。(2)肌肉中C18∶c9,t11含量試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P0.05),但各試驗(yàn)組之間差異不顯著(P0.05);C18∶t10,c12含量試驗(yàn)組均顯著高于對(duì)照組(P0.05),試驗(yàn)3組顯著高于其他試驗(yàn)組(P0.05),試驗(yàn)1組和試驗(yàn)2組含量差異不顯著(P0.05)。共軛亞油酸總量各試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P0.05),但各試驗(yàn)組間差異不顯著(P0.05)。各試驗(yàn)組和對(duì)照組之間飽和脂肪酸和單不飽和脂肪酸含量差異不顯著(P0.05);多不飽和脂肪酸含量試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P0.05),試驗(yàn)2組含量顯著高于其他試驗(yàn)組(P0.05),試驗(yàn)1組和試驗(yàn)3組含量差異不顯著(P0.05)。(3)皮下脂肪中C18∶c9,t11含量含量各試驗(yàn)組均顯著高于對(duì)照組(P0.05),試驗(yàn)3組顯著高于試驗(yàn)1組和試驗(yàn)2組(P0.05);C18∶t10,c12含量試驗(yàn)3組試驗(yàn)2組試驗(yàn)1組對(duì)照組(P0.05)。共軛亞油酸含有總量各試驗(yàn)組均顯著高于對(duì)照組(P0.05),試驗(yàn)3組顯著高于試驗(yàn)1組和試驗(yàn)2組(P0.05)。各試驗(yàn)組和對(duì)照組之間飽和脂肪酸和單不飽和脂肪酸含量差異不顯著(P0.05);多不飽和脂肪酸含量試驗(yàn)3組和試驗(yàn)2組顯著高于試驗(yàn)1組和對(duì)照組。試驗(yàn)二:溶纖維丁酸弧菌添加~(13)C標(biāo)記LA體外厭氧培養(yǎng)。貴州黑山羊瘤胃中分離純化溶纖維丁酸弧菌菌株體外培養(yǎng),將12個(gè)培養(yǎng)基隨機(jī)分為4組,每組3個(gè)培養(yǎng)基,試驗(yàn)1組培養(yǎng)基中添加2.5mg~(13)C標(biāo)記的LA;試驗(yàn)2組添加5mg~(13)C標(biāo)記LA;試驗(yàn)3組添加7.5mg~(13)C標(biāo)記的LA;空白組不添加LA,培養(yǎng)24h后,收集細(xì)菌用于檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)果如下:(1)對(duì)溶纖維丁酸弧菌顯微結(jié)構(gòu)的影響:各組培養(yǎng)基中溶纖維丁酸弧菌在掃描電子顯微鏡下為3微米左右略微彎曲(部分直立)的桿菌,均為單個(gè)細(xì)胞,可見(jiàn)絲狀體,與伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)(第八版)描述符合,各試驗(yàn)組細(xì)菌之間形態(tài)差異不明顯。各組培養(yǎng)基中溶纖維丁酸弧菌在透射電子顯微鏡下能正常識(shí)別各細(xì)胞結(jié)構(gòu),各試驗(yàn)組溶纖維丁酸弧菌之間細(xì)胞細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和核質(zhì)體差異不明顯,與對(duì)照組相比形態(tài)差異也不明顯。(2)對(duì)溶纖維丁酸弧菌中脂肪酸含量的影響:35種脂肪酸檢測(cè)中,C8:0、C11:0、C14:0、C15:0、C17:0、C17:1、C18:1n9、C18:2n6、C18:3n6、C20:0、C20:2、C20:3n3、C20:3n6、C20:5n3、C21:0、C22:0及C22:6n3等脂肪酸,隨著培養(yǎng)基中LA的濃度的提高,變化差異不顯著(P0.05);C10:0、C12:0、C16:0、C18:0、C20:4n6、C23:0、C24:1隨著LA加入量的增加合成量顯著減少(P0.05);C15:1、C18:3n3、C16:1在添加量為2.5mg水平時(shí)合成量較其他水平組顯著增加(P0.05);C14:1在實(shí)驗(yàn)1組合成量顯著高于其他實(shí)驗(yàn)組(P0.05),在添加LA的實(shí)驗(yàn)組中,隨著LA含量增加而增加;C24:0在添加量為7.5mg水平時(shí)合成量較其他水平組顯著增加(P0.05)。(3)對(duì)溶纖維丁酸弧菌中核苷酸含量的影響:不同LA濃度培養(yǎng)基對(duì)溶纖維丁酸弧菌合成的CMP、CMP和GMP3種核苷酸合成影響不顯著(P0.05)。(4)對(duì)溶纖維丁酸弧菌LA利用的影響:將~(13)C標(biāo)記的LA培養(yǎng)基培養(yǎng)所得溶纖維丁酸弧菌菌體進(jìn)行~(13)C豐度測(cè)定,結(jié)果顯示顯著高于對(duì)照組(P0.05),但是各~(13)C標(biāo)記的LA培養(yǎng)基之間差異不顯著(P0.05)。綜上所述,通過(guò)在生長(zhǎng)期貴州黑山羊飼糧中添加大豆油調(diào)控LA含量可以實(shí)現(xiàn)動(dòng)物肉產(chǎn)品CLA的增加,當(dāng)大豆油添加量3%是可以提高日增重,添加量4%時(shí)可以使山羊內(nèi)臟器官脂肪增加,同時(shí),LA含量的增加會(huì)使瘤胃溶纖維丁酸弧菌一定程度提高對(duì)LA的利用率及對(duì)某些脂肪酸合成造成影響,但是LA不會(huì)使細(xì)菌整體形態(tài)和內(nèi)部顯微結(jié)構(gòu)發(fā)生顯著變化,而且不會(huì)對(duì)其遺傳物質(zhì)合成有顯著影響。
【圖文】：

共軛亞油酸1 什么是共軛亞油酸共扼亞油酸（Conjugated linoleic acids）作為亞油酸（Linoleic acid）的同構(gòu)體，是一系列含有共扼雙鍵（碳 9，11 和碳 10，12）的幾何異構(gòu)的十八烯酸的總稱。值得注意的是天然存在的 CLA 主要以 c9，t11-CLA 異構(gòu)體為是共軛亞油酸在人和動(dòng)物體內(nèi)無(wú)法合成，需要從外界獲取。共扼亞油酸有十異構(gòu)體，然而具有生物活性的僅有兩種，即 cis9，trans11-CLA 和 trans112-CLA。工業(yè)上合成 CLA 的方法為使用紅花籽油或葵花籽油在丙二醇或乙中通過(guò)堿催化異構(gòu)化得到。各種共軛亞油酸結(jié)構(gòu)式如圖：

貴州大學(xué) 2019 屆碩士研究生學(xué)位論文存安瓿管開封，用浸過(guò) 70％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，之后用火焰將安瓿管頂端加熱，滴無(wú)菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開裂，，用挫刀或鑷子敲下已開裂的安瓿管的頂端。用移液槍，吸取 0.3～0.5ml 適宜的液體培養(yǎng)基，滴人安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍于菌體溶解呈懸浮狀。取 0.1～0.2ml 菌體懸浮液，移植于平板培養(yǎng)基上劃，用接種棒均勻的將菌液涂抹在平板培養(yǎng)基上，蓋上蓋子，動(dòng)作要快，放入經(jīng)過(guò)高溫滅菌的無(wú)菌袋，在袋內(nèi)放入撕開的產(chǎn)氣袋和美蘭指示條，將無(wú)菌袋密封，放入恒溫培養(yǎng)箱 37℃培養(yǎng) 24-36 小時(shí)。培養(yǎng)基接種前后如圖 3-1 和圖 3-2。
【學(xué)位授予單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S827.5

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本文編號(hào)：2617428