【摘要】：牛卵母細(xì)胞體外成熟是體外獲得牛胚胎的重要一步,而體外成熟環(huán)境因素(如活性氧)制約著牛卵母細(xì)胞成熟的質(zhì)量�；⒄溶�(Polydatin,PD)是植物虎杖的提取物,也稱為白藜蘆醇苷,是白藜蘆醇與葡萄糖的結(jié)合物�；⒄溶站哂锌寡趸芰捅Ｗo(hù)線粒體的作用。目前,虎杖苷對(duì)卵母細(xì)胞體外成熟的研究鮮有報(bào)道。本研究探討了虎杖苷對(duì)牛卵母細(xì)胞體外成熟的影響,為進(jìn)一步優(yōu)化卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)體系提供一定的理論基礎(chǔ)。具體研究結(jié)果如下:1.探討了不同濃度的虎杖苷對(duì)牛卵母細(xì)胞體外成熟影響。在牛卵母細(xì)胞體外成熟液中添加不同濃度(0、0.5、1.0、2.0μumol/L)的PD,觀察牛卵母細(xì)胞成熟效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組(0 μmol/L)相比,各處理組(0.5、1.0、2.0μumol/L)PD顯著提高第一極體率(P0.05)。將各組卵母細(xì)胞進(jìn)行體外受精(IVF),結(jié)果顯示,胚胎分裂率差異不顯著(P0.05),而1.0 μmol/LPD處理組與對(duì)照組相比囊胚率顯著提高(32.17±2.50%vs 24.01±2.27%,P0.05)。與對(duì)照組相比,1.0、2.0 μmol/LPD處理組顯著增加了囊胚期的細(xì)胞數(shù)(101.5±3.41%vs 94.7士1.78%,100.67±0.57%vs 94.7±1.78%,P0.05),以上結(jié)果顯示,1.0μmol/LPD為添加到成熟液的最佳濃度。2.探討了虎杖苷提高牛卵母細(xì)胞體外成熟質(zhì)量的作用機(jī)制。(1)1.0μumol/L PD顯著降低了牛成熟卵母細(xì)胞活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平(29.95±1.53 vs 35.18±1.01,p0.05)(2)熒光定量結(jié)果顯示,1.00μmol/LPD顯著提高了卵母細(xì)胞內(nèi)GPX4、SOD1基因的表達(dá)水平(P0.01)。(3)1.0 μmol/LPD顯著提高卵母細(xì)胞內(nèi)總谷胱甘肽的量(3.365±0.21 vs 2.172±0.14 pmol/oocyte,P0.01)。3.探討了虎杖苷對(duì)牛卵母細(xì)胞線粒體的影響。(1)1.0 μmol/LPD顯著提高了牛成熟卵母細(xì)胞線粒體均勻分布率(70.39±0.34%vs 63.32±0.28%,P0.01)。(2)1.00μmol/LPD顯著提高了牛成熟卵母細(xì)胞內(nèi)ATP水平(0.4793±0.037μmol/L vs 0.3603±0.032 μmol/L,P0.05)。(3)1.0 μmol/L PD處理組與對(duì)照組卵母細(xì)胞線粒體膜電位沒有顯著差異(2.075±0.10 vs 1.675±0.16),(P0.05)。(4)熒光定量結(jié)果顯示,1.00μmol/LPD 顯著提高SIRT1、TFAM、PGC-1α基因的表達(dá)水平(P0.01)。以上結(jié)果表明,在體外成熟培養(yǎng)液中添加1.0 μmol/L虎杖苷有利于牛卵母細(xì)胞的體外成熟效果及其隨后早期胚胎的發(fā)育。1.0 μuml/L虎杖苷降低細(xì)胞內(nèi)的ROS水平,提高了細(xì)胞內(nèi)的抗氧化能力,增強(qiáng)了線粒體的功能,從而促進(jìn)卵母細(xì)胞體外成熟的質(zhì)量。
【圖文】：

用ＩｍａｇｅＪ軟件分析綠色熒光密度，熒光密度大小表示熒光的強(qiáng)弱并進(jìn)行統(tǒng)逡逑計(jì)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，，１．０邋ｐｍｏｌ／ＬＰＤ處理組與對(duì)照組相比ＲＯＳ水平顯著降低（２９．９５邋土邋１．５３逡逑ＶＳ３５．１８±１．０１，Ｐ＜０．０５），說明虎杖苷能顯著降低細(xì)胞內(nèi)的ＲＯＳ水平（圖２－２，圖２－３）。逡逑圖２－２牛卵母細(xì)胞ＲＯＳ染色熒光圖（ｌ0ｘ）逡逑注：ａ．對(duì)照組（Ｏｐｍｏｌ／ＬＰＤ）邋ｂ．處理組（１．０邋ｊｉｍｏｌ／Ｌ邋ＰＤ）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－２邋Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｏｆ邋ｂｏｖｉｎｅ邋ｏｏｃｙｔｅ邋ＲＯＳ邋（１邋0ｘ邋）逡逑Ｎｏｔｅ：邋ａ．邋Ｔｈｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｇｒｏｕｐ（０邋＾ｉｍｏｌ／Ｌ邋ＰＤ）邋ｂ．邋Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ邋ｇｒｏｕｐ（１．０邋｜ｉｍｏｌ／ＬＰＤ）逡逑２６逡逑

邐ｂ逡逑Ｉｔ逡逑０邐１．０邋／ｊｍｏｌ／ＬＰＤ逡逑圖２－３體外成熟牛卵母細(xì)胞ＲＯＳ的含量逡逑注：同一圖不同小寫字母表示差異顯著（Ｐ＜0．0５），下同。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－３邋ＲＯＳ邋ｃｏｎｔｅｎｔ邋ｏｆ邋ｂｏｖｉｎｅ邋ｏｏｃｙｔｅ邋ｉｎ邋ｖｉｔｒｏ邋ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ逡逑Ｎｏｔｅ：邋Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｌｏｗｅｒｃａｓｅ邋ｌｅｔｔｅｒｓ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｓａｍｅ邋ｆｉｇｕｒｅ邋ｉｎｄｉｃａｔｅ邋ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ，邋ｔｈｅ邋ｓａｍｅ邋ｂｅｌｏｗ逡逑２．５虎杖苷對(duì)牛卵母細(xì)胞抗氧化基因ＧＰＸ４，邋ＳＯＤ／基因表達(dá)水平的影響逡逑為了進(jìn)一步探討成熟液添加ＰＤ對(duì)卵母細(xì)胞抗氧化能力的影響。熒光定量ＰＣＲ測(cè)定逡逑細(xì)胞內(nèi)抗氧化基因Ｇ／ＩＷ，ＳＯＤ７的表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與對(duì)照組相比，ｌ．Ｏｐｍｏｌ／ＬＰＤ逡逑處理組卵母細(xì)胞抗氧化基因ＧＰＫ邋ＳＯＺ）／的表達(dá)水平有了顯著提高（圖２－４，邋ＰＯ．０１）。逡逑ＧＰＸ４邐Ｓ０Ｄ１逡逑ｓ，４ｌ邋＾邐Ａ邐４邋’邐Ａ逡逑�。篘襄巍觥鰣義匣嶠镥危齲儒危忮危懾義希洛巍鰣義希板危保板澹椋恚錚歟蹋校膩危板危保埃輳恚錚歟蹋校膩義賢跡玻矗禾逋獬墑炫Ｂ涯趕赴寡躉潁牽椋歟�，逦抵\澩鎪藉義獻(xiàn)ⅲ和煌疾煌笮醋幟副硎靜鉅旒災(zāi)ǎ校跡埃埃保

本文編號(hào)：2616666