發(fā)布時(shí)間：2020-04-04 23:08

【摘要】：犢牛腹瀉是造成奶牛養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟(jì)損失的原因之一。本試驗(yàn)前期通過(guò)體外抑菌和小鼠體內(nèi)抗菌試驗(yàn)初步確定了酸馬奶源乳酸桿菌代謝物(MLP)的作用效果,為后期研究犢牛腸黏膜屏障的作用提供參考依據(jù)。試驗(yàn)1,通過(guò)分離鑒定、體外抑菌和SPF小鼠抗菌試驗(yàn)證明了酸馬奶源乳酸桿菌具有抑菌效果,并測(cè)定其分子量大小和氨基酸組成。試驗(yàn)2,選取60 只 SPF小鼠,隨機(jī)分為健康組、腹瀉組、氨芐青霉素組、環(huán)丙沙星組、Nisin組和MLP組。除健康組外,其余5組分別灌胃滅菌生理鹽水、氨芐青霉素(0.001 g/kg)、環(huán)丙沙星(0.13 g/kg)、Nisin(0.002 g/kg)和 MLP(0.125g/mL),連續(xù) 15d,2 次/d,并于第 5d末次給藥30 min后腹腔注射濃度為0.5× 10~9 CFU/mL的致病性EcoliO1,再繼續(xù)灌胃10 d。試驗(yàn)結(jié)束后,采集樣品,進(jìn)行微生物-腦-腸軸相關(guān)指標(biāo)檢測(cè),研究MLP對(duì)感染致病性EcoliO1小鼠微生物-腦-腸軸的作用。試驗(yàn)3,選取20頭荷斯坦?fàn)倥?除自然組外,其余3組犢牛經(jīng)口服接種致病性E.coli O1(2.50 × 10~11 CFU/mL,100 mL/頭)建立腹瀉模型,造模3 d后,將滅菌生理鹽水、0.5 mg/kg環(huán)丙沙星和200 mL MLP試驗(yàn)樣品混于酸化奶中連續(xù)飼喂15 d,2次/d。試驗(yàn)結(jié)束后,采集血液分離血清,收集回腸、瘤胃液、盲腸、結(jié)腸樣品進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè),研究MLP對(duì)感染致病性E.coliO1犢牛腸黏膜屏障的作用機(jī)制。研究結(jié)果表明,試驗(yàn)1:從酸馬奶中分離鑒定出4株乳酸桿菌,在屬的水平上與乳酸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株相似度達(dá)到97.80%,確定為乳酸桿菌并命名為:Lactobacillus.P。通過(guò)體外試驗(yàn)確定MLP的最小抑菌濃度(MIC)為62.50mg/mL。MLP中含有豐富的脯氨酸,并測(cè)得MLP的分子量在1000 Da以下占到76.46%,確定為細(xì)菌素。試驗(yàn)2:MLP使空腸中血小板反應(yīng)蛋白1和總膽固醇的濃度顯著增加,使回腸中胰島素含量顯著降低(P0.05)。MLP可顯著增加Lactobacillus的豐度,顯著降低Proteobacteria的豐度(P0.01),對(duì)調(diào)節(jié)腸道菌群的動(dòng)態(tài)平衡具有一定的作用。試驗(yàn)3:①腹瀉組犢�；啬c絨毛變短、水腫、斷裂脫落、肌層厚度減少;而MLP組犢牛腸絨毛排列整齊、緊密,腸黏膜完整,更加接近于自然組。②與自然組、腹瀉組和環(huán)丙沙星組相比,MLP顯著增加血清中IgA、IgG、CD4、IFN-γ的水平,顯著增加回腸組織中adamtsl、TC和INS以及犢牛體重,顯著增加結(jié)腸中Claudin-1、Occludin和JAM-1的濃度;顯著降低TNF-α和IL-6的水平,從而增強(qiáng)腸黏膜免疫屏障和機(jī)械屏障功能。③通過(guò)16S rDNA對(duì)瘤胃液、盲腸和結(jié)腸微生物測(cè)序表明:MLP和環(huán)丙沙星一方面增加盲腸、降低結(jié)腸中OTUs數(shù)量;另一方面,顯著增加Porphyronzonas的豐度,顯著降低瘤胃液中Helicobacter、盲腸中Faecalibacterium和結(jié)腸中Fusobacterium的豐度;從而提高胃腸道黏膜微生物屏障功能。綜上所述,MLP可有效改善致病性E.coli O1腹瀉性犢牛的免疫力和胃腸道微生物菌群。MLP在改善動(dòng)物健康和增強(qiáng)免疫力上與動(dòng)物菌群豐富度有關(guān),口服益生菌代謝物是通過(guò)調(diào)節(jié)胃腸道微生物群來(lái)增強(qiáng)腸黏膜免疫屏障的有效途徑之一,我們的工作為益生菌代謝物以改善動(dòng)物和人類健康提供了理論依據(jù)。
【圖文】：

圖１技術(shù)路線圖逡逑Ｋｉｇ．邋Ｉ邋Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ邋ｄｒａｗｉｎｇ逡逑

具有代表性的細(xì)菌ＯＴＵｓ序列。通過(guò)ＲＤＰ和Ｇｒｅｅｎｇｅｎｅｓ數(shù)據(jù)庫(kù)同源性比對(duì)發(fā)現(xiàn)約逡逑有５．６７％無(wú)法鑒定到屬的水平，約有７．８３％無(wú)法確定到種的水平。在屬的水平上，，逡逑分離株與乳酸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株相似度達(dá)到９７．８０％邋（圖２）�；冢郑澹睿顖D分析表明，逡逑標(biāo)準(zhǔn)菌株（ＬＰ１）有１０１個(gè)特有ＯＴＵｓ序列，酸馬奶中分離的乳酸桿菌組（ＬＰ２）有逡逑１０８?jìng)�(gè)特有ＯＴＵｓ序列，而所有樣本中所共有４０１個(gè)ＯＴＵｓ序列（圖３），從而確定逡逑試驗(yàn)所分離的菌株為乳酸桿菌，命名為：心ｃ／／／ｗ．ｖ．Ｐ。逡逑表４疑似乳酸桿菌分離株的１６Ｓ邋ｒＤＮＡ鑒定逡逑Ｔａｂｌｅ．４邋Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋１６Ｓ邋ｒＤＮＡ邋ｏｆ邋ｓｕｓｐｅｃｔｅｄ邋Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ邋ｉｓｏｌａｔｅｓ逡逑樣品編號(hào)邋序列（條）邋ＯＴＵ邋（個(gè)）門(mén)（個(gè)）綱（個(gè)）目（個(gè)）科（個(gè)）屬（個(gè)）種（個(gè)）逡逑ＬＰ１－１邐７１９８２邐１９２邐１０邐３邐４７邐８０邐８４邐２２逡逑ＬＰ１－２邐７０３４０邐１９２邐１０邐１邐４７邐８０邐８４邐２２逡逑ＬＰ２－１邐６９８３６邐１９２邐１０邐１邐４７邐８０邐８４邐２２逡逑ＬＰ２－２邐７１６３３邐１９２邐１０邐３邐４７邐８０邐８４邐２２逡逑ｉｎ逡逑Ｉ邐＿＿ｌ逡逑■邋Ｆｕｓｉｃａｔ？ｎｉ0ａｃｔｃｒ逡逑■邋Ｆ＊ｅｃ＊ｌｉｂ？ｃｔｅ
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S858.23

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2614183