【摘要】：囊型包蟲病(CE)是由細粒棘球絳蟲(Echinococcus granulosus,E.g)引起的廣泛的人畜共患寄生蟲病。CE是一種復(fù)雜的疾病,其致病機理和免疫反應(yīng)等方面的問題還待解決。原頭蚴(Protoscoleces,PSC)是E.g的幼蟲階段的一種形態(tài),可以與中間宿主發(fā)生免疫反應(yīng)。PSC如何通過破壞宿主的免疫反應(yīng),產(chǎn)生病灶,其致病機制尚不清楚。本研究通過對PSC的體外培養(yǎng)觀察以及PSC侵染小鼠巨噬細胞RAW264.7試驗,從細胞水平和轉(zhuǎn)錄組水平揭示宿主-寄生蟲互作機制。1.細粒棘球絳蟲原頭蚴(PSC)的體外培養(yǎng)及觀察:為了研究PSC在宿主體外環(huán)境的生長發(fā)育特征,本試驗建立了原頭蚴的體外培養(yǎng)體系。試驗結(jié)果表明,培養(yǎng)至第10d時,蟲體開始向成囊發(fā)育;第25d50%的原頭蚴已經(jīng)完全發(fā)育成囊;第35d90%的原頭蚴完全發(fā)育成微囊,囊泡內(nèi)的角質(zhì)層增厚,頂突處的頭溝完全消失;第50d時,微囊逐漸增大,囊壁逐漸增厚;第70d微囊破裂,囊壁角質(zhì)層內(nèi)陷,蟲體衰亡。本試驗成功建立細粒棘球絳蟲原頭蚴的體外培養(yǎng)體系,研究了原頭蚴在體外情況下的生長發(fā)育情況。2.PSC侵染RAW264.7細胞NO的變化規(guī)律研究:分別用PSC、包囊壁和囊液感染小鼠巨噬細胞RAW264.7,用Griess試劑檢測不同侵染時間段NO含量的變化。結(jié)果顯示,PSC可誘導(dǎo)巨噬細胞產(chǎn)生NO,巨噬細胞通過釋放NO來抵御原頭蚴的侵害;包囊壁既可以為蟲體的生存提供寄生環(huán)境,也可使宿主防御寄生蟲的侵害;包囊液對巨噬細胞的侵害不顯著,可能為原頭蚴的生長提供營養(yǎng)。本文通過研究NO在巨噬細胞抵抗棘球蚴感染時的變化規(guī)律,為揭示宿主在抵抗寄生蟲感染時的作用機制奠定基礎(chǔ)。3.PSC侵染RAW264.7細胞因子的變化規(guī)律研究:通過研究PSC侵染小鼠巨噬細胞RAW264.7后Th1和Th2型細胞產(chǎn)生的4種細胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ隨侵染時間的變化,探討Th1和Th2細胞在蟲體與宿主細胞直接接觸后再次免疫中的意義。結(jié)果表明,感染的初期,蟲體對細胞的損傷最嚴重,蟲體與宿主細胞相互作用的過程中免疫保護和免疫損傷同時進行,且主要以Th1型細胞因子分泌為主,Th2型細胞因子分泌為輔。4.PSC侵染RAW264.7基因差異表達分析:通過轉(zhuǎn)錄組測序和生物信息學(xué)分析等不同手段,對PSC侵染小鼠巨噬細胞RAW264.7不同時間段蟲體以及宿主細胞的轉(zhuǎn)錄組進行了分析。研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)PSC侵染RAW264.7細胞,PSC中顯著上調(diào)的基因包括Proteinase inhibitor、Serine proteases、Glycoside hydrolase、Phospholipase A2、MHC class I、Immunoglobulin、EF-Hand 1、Tumour necrosis factor、p53-like transcription factor等。對顯著上調(diào)的基因GO分析顯示其主要參與氧化、代謝等相關(guān)過程;KEGG分析顯示顯著上調(diào)的基因主要參與代謝及環(huán)境信息處理等過程。巨噬細胞中顯著上調(diào)基因有Antigen B、HSP70、FABP1、Proteinase inhibitor 12、BMTI6、Glutamate dehydrogenase等。GO富集主要為生物學(xué)過程和分子功能,主要參與氧化、代謝、免疫等相關(guān)生物學(xué)過程。KEGG分析顯示顯著上調(diào)的基因主要參與代謝等過程。通過分析蟲體及細胞的免疫因子和生物酶的功能,進一步揭示宿主-寄生蟲互作的生理機制,為抗蟲疫苗提供新靶標。
【圖文】：

2圖 1-2 細粒棘球絳蟲包囊結(jié)構(gòu)Fig.1-2 The Cyst structural of E.gadventitial layer：外膜層；laminated layer：肌層，LL；ost tissue; adventitial layer; laminated layer: LL; germinal l展抗外界感染的第一道防線，主要取決于宿的生理因素。對小鼠包蟲病體外及體內(nèi)的促進炎癥的發(fā)展。細粒棘球絳蟲六鉤蚴可成熟來逃避宿主的免疫反應(yīng)。有研究表明

圖 1-2 細粒棘球絳蟲包囊結(jié)構(gòu)Fig.1-2 The Cyst structural of E.gsue：宿主組織；adventitial layer：外膜層；laminated layer：肌層，，LL； germinal layer：生圖 1-1 細粒棘球絳蟲生活史Fig.1-1 The life cycle of E.g
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S852.734

【參考文獻】

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1 李晶;錢文;陳靠山;王國棟;;微生物多糖對巨噬細胞的激活作用及其機制[J];醫(yī)學(xué)理論與實踐;2014年13期

2 倪興維;賈萬忠;者永輝;金科;;棘球蚴體外培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2011年04期

3 袁麗英;張壯志;石保新;古努爾·吐爾遜;米曉云;王進成;張文寶;阿依努爾;阿布里克木;阿不都;阿布利茲;張玲;岳城;;細粒棘球蚴-原頭蚴體外培養(yǎng)成囊模型的建立[J];畜牧與獸醫(yī);2009年07期

4 王進成,由弘;棘球蚴病的免疫學(xué)研究進展[J];中國獸醫(yī)雜志;2004年06期

5 龍小純,李雍龍,方正明;一氧化氮對日本血吸蟲童蟲細胞毒作用的研究[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2002年06期

6 許隆祺;我國西部地區(qū)重大寄生蟲病的危害及對防治工作的反思[J];中國寄生蟲病防治雜志;2002年01期

7 傅小平,李銀,沈永林,楊廷桂,陳偉華;一氧化氮(NO)在雞感染柔嫩艾美球蟲中的作用[J];南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2001年03期

8 史大中;包蟲感染的免疫學(xué)新進展[J];中國寄生蟲病防治雜志;1999年03期

9 鄭春福,林建銀;L-精氨酸和L-瓜氨酸在體外活化巨噬細胞抗弓形蟲感染中的作用[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;1998年05期

10 賈萬忠,田廣孚;棘球蚴病防治技術(shù)研究概況[J];中國獸醫(yī)寄生蟲病;1998年04期

本文編號：2612069