【摘要】：狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒(Rabies virus,RV)引起的一種致死性人畜共患傳染病,能引起人和哺乳動物的急性、漸進性致死性腦膜腦炎。全球每年約有59,000人以及數(shù)十萬的動物死于狂犬病,其中95%以上的死亡病例發(fā)生在亞洲和非洲,99%以上的人狂犬病死亡病例是由感染RV的犬舔舐或咬傷引起。減少和控制人感染狂犬病病例數(shù)最有效的方法是提高犬的免疫覆蓋率,當(dāng)犬的免疫覆蓋率達到70%便可從源頭上控制、消除狂犬病。目前,狂犬病弱毒活疫苗已禁止生產(chǎn)和使用;滅活疫苗雖安全有效,但成本高昂。因此,研制一種高效、安全、價格低廉的動物狂犬病疫苗仍具有較高的應(yīng)用價值和現(xiàn)實意義。犬瘟熱(Canine distemper,CD)是由犬瘟熱病毒(Canine distemper virus,CDV)引起的一種在犬科、鼬科、浣熊科以及其它肉食動物之間廣泛傳播的一種病毒性傳染病。該病呈季節(jié)性流行,且宿主范圍不斷擴大,呈世界性分布,嚴(yán)重威脅畜牧養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。CD弱毒疫苗能有效預(yù)防和控制該病在肉食動物之間的傳播,應(yīng)用廣泛。反向遺傳技術(shù)的發(fā)展和成熟使CDV作為疫苗載體成為可能。CDV也具備作為疫苗載體應(yīng)用的潛力,以CDV為載體構(gòu)建CDV/RV二聯(lián)活載體疫苗可實現(xiàn)一苗兩防、經(jīng)濟高效的提高狂犬病免疫覆蓋率。本研究以本實驗室分離的CDV Snyder Hill疫苗株為親本毒株,建立其反向遺傳操作系統(tǒng),拯救成功的病毒rCDV和野生型CDV Snyder Hill在Vero細胞上保持相似的生長特性,在感染后120 h病毒滴度達到最高1×10~6.1.1 TCID_(50)/mL。為探索CDV Snyder Hill株作為活病毒載體表達外源基因的潛力,在CDV基因組P、M之間插入外源基因EGFP構(gòu)建重組病毒rCDV-EGFP,經(jīng)生長曲線和遺傳穩(wěn)定性檢測,重組病毒與親本株rCDV的生長特性相似,且重組病毒在Vero細胞上連續(xù)傳18代仍能高效、穩(wěn)定表達EGFP,具有良好的遺傳穩(wěn)定性。在此基礎(chǔ)之上,構(gòu)建了重組病毒rCDV-RVG,經(jīng)IFA、Western Bloting鑒定分析,RVG蛋白在重組病毒感染的細胞中正確、穩(wěn)定表達,拯救的重組病毒與親本株病毒在Vero細胞上具有相似的生長動力學(xué)曲線,病毒滴度最高可達1×10~5.7.7 TCID_(50)/mL。犬免疫實驗證明,重組病毒rCDV-RVG以10~5.5.5 TCID_(50)/mL/只劑量免疫犬3 w后,犬體內(nèi)均可產(chǎn)生特異性CDV、RV中和抗體,其中RV中和抗體平均值為21.71 IU/mL,遠高于RV中和抗體保護臨界值0.5 IU/mL。本研究結(jié)果表明,表達RVG蛋白的重組犬瘟熱病毒rCDV-RVG具備作為狂犬病重組活載體疫苗的潛力。
【圖文】：

病病毒分子特征Rabies）是由狂犬病病毒（Rabies virus, RV）引發(fā)的人獸共患中樞神經(jīng)系率幾乎達 100%，是一種重要的人獸共患傳染病(扈榮良, 2007)。RV 為ae），屬于狂犬病病毒屬（Lyssavirus）(ChristianRupprecht, 2014; Walker e稱作彈狀病毒是因為 RV 病毒顆粒為子彈狀，病毒的一端半圓形，另一由外殼和核心兩部分組成，外被囊膜，囊膜上具有可與細胞受體結(jié)合, G），可形成三聚體突起，內(nèi)側(cè)主要是膜蛋白，即基質(zhì)蛋白。RV 內(nèi)部為 基因組 RNA、核蛋白、磷蛋白以及 RNA 大聚合酶蛋白相互結(jié)合而形核蛋白復(fù)合體（Ribonucleoprotein complexes, RNPs）(TordoKouknetzoff 復(fù)制過程中保護核酸免受核酸酶的降解(P. Liu et al., 2004)。為不分節(jié)段單股負鏈 RNA，全長約 12 knt，，含有 5 個由短調(diào)控序列間格保守有序地編碼相應(yīng)的核蛋白（N）、磷蛋白（P）、基質(zhì)蛋白（M）、大蛋白（L），其閱讀框大小依次為 1424 nt、991 nt、805 nt、1675 nt 和 6475ller et al., 2009)。狂犬病病毒根據(jù)血清型的不同可分為 5 種血清型，按照可分為 7 種基因型。

瘟熱病毒顆粒結(jié)構(gòu)模式圖（Fields virology,5th Edidel of canine distemper virus（Fields virology,5th E負鏈 RNA 病毒，其基因組大小為 15,690 n’端到 5’端可依次編碼 N、P、M、F、H 和碼結(jié)構(gòu)蛋白 P 的同時還可編碼 V、C 兩種 可與 N、P、L 三種蛋白組成 RNPs，在病小感染單元。分布，其宿主范圍逐年擴大且可跨種間傳播D 的特效治療藥物，依靠疫苗進行免疫接D 滅活疫苗、弱毒疫苗是目前國內(nèi)外通用 年將病犬的腦組織經(jīng)福爾馬林滅活制備的柱等用靜水壓高壓法滅活 CDV，并以蜂膠林制備的滅活疫苗獲得更高的中和抗體，Cirone 等應(yīng)用 CD 弱毒疫苗株 Onderstepo
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S852.65

【參考文獻】

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1 沈朝建;賈智寧;孫向東;楊楠;黃保續(xù);劉擁軍;;我國犬狂犬病流行與相關(guān)風(fēng)險因素調(diào)查分析[J];中國獸醫(yī)雜志;2011年10期

本文編號：2601940