【摘要】：萊姆病(Lyme disease)是由媒介蜱傳播的伯氏疏螺旋體(Borrelia burgdorferi sensu lato)感染所引起的一種自然疫源性疾病,是由蟲媒介蜱傳播的人獸共患病,該病發(fā)生和流行的時間與蜱蟲活躍時間一致。萊姆病對人類、動物的健康構(gòu)成了嚴重的危害,主要波及野生動物及寵物的健康養(yǎng)殖,已成為全球嚴峻的公共衛(wèi)生問題。1986年,自艾承緒等首次在黑龍江省海林縣發(fā)現(xiàn)本病以來,我國目前已有30個省(市、區(qū))經(jīng)確認為萊姆病自然疫源地,主要分布在華北、西北和東北林區(qū),分布呈現(xiàn)地域聚集的趨勢,該病的發(fā)生依賴于其媒介蜱以及宿主動物的分布,但由于蜱蟲叮咬時無痛感,且該病的早期癥狀不明顯,常與風濕性關(guān)節(jié)炎等疾病、發(fā)燒等現(xiàn)象混淆導致錯過最佳治療時間。早在1993年,于美國紐約25個城鎮(zhèn)采集的1446份犬血液樣本中,犬萊姆病陽性率介于6.5%至85.2%之間。該數(shù)據(jù)表明由于人類與寵物犬關(guān)系密切,導致人感染萊姆病的機率增加。隨著我國經(jīng)濟快速發(fā)展與人民生活水平的提高,寵物逐漸成為了人們生活中不可或缺的一部分。然而,我國對于犬萊姆病的血清學檢測方法尚未報道,因此建立快速準確的犬萊姆病診斷方法迫在眉睫。本研究在國家十三五重點研發(fā)項目“寵物細菌與真菌傳染病診療與防控新技術(shù)研究”(項目編號:2016YFD0501005)支持下,建立伯氏疏螺旋體SYBR Green I熒光定量PCR方法和犬萊姆病間接ELISA診斷方法,為寵物與人類的健康安全提供技術(shù)支持與保障。主要研究內(nèi)容如下:I.伯氏疏螺旋體SYBR Green I熒光定量PCR檢測方法的建立本研究基于國內(nèi)外主要流行的伯氏疏螺旋體菌株的3個基因型:嘎氏疏螺旋體(B.garinii)、阿氏疏螺旋體(B.afzelii)、狹義伯氏疏螺旋體(B.burgdorferi sensu stricto)中的16S rRNA基因片段為模板,針對伯氏疏螺旋體的保守區(qū)域設計Real-time PCR特異性引物,建立熒光定量方法。其中該方法標準曲線的相對系數(shù)R~2為0.99,擴增效率為98.217%。特異性試驗結(jié)果表明,所建立的方法只特異的檢測出伯氏疏螺旋體,而與其它病原無交叉反應。敏感性試驗結(jié)果表明此方法比普通PCR靈敏10~4倍,能夠檢測到的最小拷貝數(shù)為4.72 copies/μL。應用該方法對采自吉林省四平市的25只蜱蟲樣本進行檢測,樣品陽性率為40.00%。II.伯氏疏螺旋體OspC的克隆表達及抗原性分析選取伯氏疏螺旋體外膜蛋白C(OspC),經(jīng)過生物信息學分析,利用原核表達載體對B31菌株的OspC基因進行表達、純化和Western-blot分析,表明該蛋白具有良好的免疫原性。III.犬萊姆病間接ELISA診斷方法的建立與應用本研究建立了一種用于犬萊姆病診斷和血清流行病學調(diào)查的ELISA方法。以OspC蛋白為包被抗原,建立了用于犬萊姆病抗體檢測的間接ELISA方法。應用該方法對所采集到的309份犬血清臨床樣品進行應用檢測,平均抗體陽性率達20.71%。結(jié)果表明本研究所建立的ELISA方法可用于臨床血清樣本的檢測,檢測結(jié)果說明萊姆病在我國的犬群中感染率較高。
【圖文】：

圖 1.1 PCR 擴增電泳圖Fig.1.1 PCR amplification electrophoresisM：DNA 分子質(zhì)量標準；1-3 16S rRNA 基因擴增產(chǎn)物M：2000bp DNA Marker；1-3：PCR products of 16S rRNA質(zhì)粒 PCR 鑒定5.2 方法，對重組菌進行 PCR 鑒定，目的片段為 13片段克隆入 pEASY-T1 連接載體，測序結(jié)果顯示 T

圖 1.1 PCR 擴增電泳圖Fig.1.1 PCR amplification electrophoresisM：DNA 分子質(zhì)量標準；1-3 16S rRNA 基因擴增產(chǎn)物：2000bp DNA Marker；1-3：PCR products of 16S rRN粒 PCR 鑒定 方法，對重組菌進行 PCR 鑒定，，目的片段為 段克隆入 pEASY-T1 連接載體，測序結(jié)果顯示
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S858.292

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前8條

1 崔宇暉;郭美華;寶福凱;柳愛華;;伯氏疏螺旋體外膜蛋白OspA研究進展[J];中國熱帶醫(yī)學;2015年02期

2 寶福凱;Erol Fikrig;;伯氏疏螺旋體傳播過程中病原體、媒介、宿主間的相互作用(英文)[J];中國媒介生物學及控制雜志;2008年03期

3 寶福凱;柳愛華;;伯氏疏螺旋體與萊姆病研究進展[J];熱帶醫(yī)學雜志;2007年11期

4 李永學,王樹聲;萊姆病的實驗室診斷[J];廣西預防醫(yī)學;2005年05期

5 李新軍,張啟恩,張泮河,張習坦,劉雪林,劉京梅,張伶,莊英杰;重組伯氏疏螺旋體鞭毛抗原用于萊姆病血清學診斷方法的研究[J];中國公共衛(wèi)生;2000年11期

6 萬康林;中國萊姆病的研究現(xiàn)狀與展望[J];中國媒介生物學及控制雜志;1998年06期

7 張哲夫,萬康林,張金聲,朱桂鳳,竇桂蘭,李牧青,鄭理,梁軍鋼,侯學霞,王宏英;我國萊姆病的流行病學和病原學研究[J];中華流行病學雜志;1997年01期

8 艾承緒;溫玉欣;張永國;王紹山;邱貴城;史志學;陳忠權(quán);李得友;劉曉東;;黑龍江省海林縣林區(qū)萊姆病的流行病學調(diào)查[J];中國公共衛(wèi)生;1987年02期

相關(guān)博士學位論文 前1條

1 于東冬;萊姆病分子生物學和診斷新技術(shù)的研究[D];吉林大學;2008年

相關(guān)碩士學位論文 前1條

1 于東冬;吉林地區(qū)萊姆病伯氏疏螺旋體分子流行病學研究[D];吉林大學;2004年

本文編號：2600344