【摘要】：目的:鉬作為重金屬元素,是動(dòng)物體內(nèi)唯一的必需重金屬微量元素,鉬缺乏和過(guò)量均會(huì)引起動(dòng)物機(jī)體不良反應(yīng),基于近年來(lái)鉬礦的不斷增多,鉬過(guò)量導(dǎo)致中毒現(xiàn)象較為嚴(yán)重,本試驗(yàn)通過(guò)建立不同劑量鉬中毒模型來(lái)研究高劑量鉬對(duì)雄性大鼠生殖功能的影響及其作用機(jī)制。方法:將40只6-8周齡體重相近(190g左右)的健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組,每組10只。嚴(yán)格控制日糧中銅、鉬、硫、磷等元素含量比例,滿足機(jī)體正常需要即可,飲用去離子水,通過(guò)灌胃方式添加不同劑量的鉬,建立試驗(yàn)動(dòng)物組模型:正常對(duì)照組(0mg/kg Mo)、低劑量鉬組(80 mg/kg Mo)、中劑量鉬組(100mg/kg Mo)和高劑量鉬組(120 mg/kg Mo)。試驗(yàn)處理的第45天,采用摘眼球取血法處死各組實(shí)驗(yàn)大鼠,采集血液、睪丸、附睪等樣品,利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法(Elasa)、HE染色、熒光定量PCR等技術(shù),從顯微結(jié)構(gòu)、細(xì)胞、分子水平上研究高劑量鉬對(duì)雄性大鼠生殖功能的影響。結(jié)果:1.雄性大鼠體重的變化:試驗(yàn)各組在灌胃不同劑量鉬7d時(shí),低劑量鉬組大鼠體重增長(zhǎng)量最大,與對(duì)照組相比升高6.08%,差異極顯著(P0.01),其次較高的為中劑量鉬組和高劑量鉬組,其中高鉬組與低鉬組、中鉬組相比,分別降低了4.44%、2.54%(P0.05);隨著染毒時(shí)間延長(zhǎng),實(shí)驗(yàn)組大鼠體重增幅明顯低于對(duì)照組(P0.05)。染毒42d后,與對(duì)照組相比,低鉬組、中鉬組、高鉬組體重分別降低10.09%、24.67%、29.11%,差異均極顯著(P0.01)。該結(jié)果表明攝入一定劑量鉬可促進(jìn)大鼠的生長(zhǎng),而隨著攝入時(shí)間增加,鉬在體內(nèi)過(guò)量蓄積導(dǎo)致鉬中毒,致使大鼠體重增長(zhǎng)緩慢。2.雄性大鼠睪丸系數(shù)的變化:與對(duì)照組相比,中鉬組、高鉬組睪丸系數(shù)分別降低8.02%、13.65%(P0.01);中鉬組、高鉬組睪丸系數(shù)比低鉬組分別降低4.57%、10.37%(P0.01);與中鉬組相比,高鉬組睪丸系數(shù)降低6.14%,差異極顯著(P0.01)。3.大鼠精子密度測(cè)定結(jié)果:大鼠附睪內(nèi)精子密度隨鉬濃度增加呈下降趨勢(shì)。與對(duì)照組相比,低鉬組大鼠附睪內(nèi)精子密度下降6.28%(P0.05),中鉬組、高鉬組則分別下降23.17%、51.95%(P0.01);與低鉬組相比,中鉬組和高鉬組分別下降18.02%和48.73%(P0.01);高鉬組比中鉬組下降37.46%(P0.01)。4.大鼠精子活力測(cè)定結(jié)果:與對(duì)照組相比,低鉬組下降6.34%(P0.05),而中鉬組、高鉬組分別下降19.99%(P0.05)、34.99%(P0.01),與中鉬組相比,高鉬組、低鉬組分別下降30.59%和18.75%(P0.01)。5.大鼠精子畸形率測(cè)定結(jié)果:低鉬組、中鉬組和高鉬組大鼠附睪內(nèi)精子畸形率比對(duì)照組分別升高26.92%、65.90%、101.28%(P0.01);高鉬組與低鉬組相比升高58.59%(P0.01);與中鉬組相比,高鉬組升高21.33%(P0.05)。6.睪丸組織HE染色切片顯示:正常對(duì)照組睪丸組織內(nèi),曲細(xì)精管排列整齊,基膜完整,各級(jí)精母細(xì)胞緊密排列,層次分明,睪丸間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)正常,官腔內(nèi)存在大量精子。低劑量鉬組睪丸組織曲細(xì)精管形態(tài)、結(jié)構(gòu)正常,與對(duì)照組相比無(wú)明顯形態(tài)學(xué)變化,僅存在少量生精細(xì)胞變性及凋亡的現(xiàn)象。中鉬組睪丸組織曲細(xì)精管形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯變化,睪丸生精上皮層數(shù)減少,各級(jí)精母細(xì)胞和支持細(xì)胞數(shù)量減少,細(xì)胞間隙增大,排列紊亂,細(xì)胞空泡化明顯,管腔內(nèi)只發(fā)現(xiàn)少量發(fā)育成熟的精子。高鉬組曲細(xì)精管結(jié)構(gòu)嚴(yán)重受損,生精細(xì)胞、支持細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞變性壞死明顯增多,空泡化及凋亡程度極為顯著。7.大鼠血清睪酮測(cè)定結(jié)果:與對(duì)照組相比,低鉬組血清睪酮含量下降15.36%(P0.05);中鉬組、高鉬組大鼠血清睪酮含量分別下降48.89%、74.42%(P0.01);高鉬組大鼠血清睪酮含量比中鉬組下降49.94%(P0.01),比低鉬組下降69.77%(P0.01)。8.睪丸組織抗氧化酶及氧化產(chǎn)物ELISA測(cè)定結(jié)果:大鼠睪丸組織內(nèi)T-SOD的活性含量,低鉬組與對(duì)照組相比下降5.03%(P0.05);中鉬組、高鉬組分別下降35.07%、60.02%(P0.01);與低鉬組相比,中鉬組和高鉬組大鼠睪丸組織內(nèi)T-SOD的活性分別下降31.63%、57.75%(P0.01);高鉬組大鼠睪丸組織內(nèi)T-SOD比中鉬組下降38.43%(P0.01)。高鉬組大鼠睪丸組織內(nèi)MDA含量最高。與對(duì)照組相比,低鉬組大鼠睪丸組織內(nèi)MDA含量升高11.69%(P0.05);中鉬組、高鉬組大鼠睪丸組織內(nèi)MDA含量比對(duì)照組分別升高46.43%、90.24%(P0.01);中鉬組、高鉬組比低鉬組分別升高31.10%、70.29%(P0.01);高鉬組與中鉬組相比,大鼠睪丸組織內(nèi)MDA含量升高29.89%(P0.01)。9.睪丸組織抗氧化酶及氧化產(chǎn)物熒光定量PCR表達(dá)結(jié)果:與對(duì)照組相比,中鉬組、高鉬組大鼠睪丸組織內(nèi)SOD表達(dá)量分別下降63.07%、83.88%(P0.01);中鉬組比低鉬組下降46.47%(P0.01);而高鉬組與低鉬組、中鉬組相比,分別下降76.64%和56.35%(P0.01)。低鉬組與對(duì)照組相比,大鼠睪丸組織內(nèi)GSH-Px表達(dá)量下降34.21%(P0.05),中鉬組、高鉬組比對(duì)照組分別下降61.21%、75.76%(P0.01);高鉬組與低鉬組、中鉬組相比,分別下降63.16%、37.52%(P0.01)。大鼠睪丸組織內(nèi)LPO的表達(dá)量與對(duì)照組相比,低鉬組、中鉬組、高鉬組分別升高60.55%、120.94%、183.39%(P0.01);與低鉬組相比,中鉬組升高37.62%(P0.01),高鉬組升高76.51%(P0.01);與中鉬組相比,高鉬組升高28.26%(P0.05)。10.睪丸組織睪酮合成相關(guān)酶基因熒光定量PCR表達(dá)結(jié)果:低鉬組、中鉬組、高鉬組大鼠睪丸組織內(nèi)P450scc表達(dá)含量比對(duì)照組分別下降47.20%、64.94%、77.25%(P0.01);與低鉬組相比,中鉬組、高鉬組分別下降33.60%、59.92%(P0.01);高鉬組比中鉬組下降35.12%(P0.01)。與對(duì)照組相比,低鉬組大鼠睪丸組織內(nèi)P450c170表達(dá)含量下降29.05%(P0.05),中鉬組、高鉬組比對(duì)照組分別下降71.09%、86.45%(P0.01);高鉬組與低鉬組、中鉬組相比,分別下降80.90%、53.12%(P0.01)。大鼠睪丸組織內(nèi)17β-HSD表達(dá)含量低鉬組、中鉬組、高鉬組與對(duì)照組相比,分別下降34.58%、66.36%、88.79%(P0.01);與低鉬組相比,中鉬組、高鉬組有分別下降48.58%、82.86%(P0.01);高鉬組比中鉬組下降66.67%(P0.01)。大鼠睪丸組織內(nèi)3β-HSD表達(dá)量低鉬組與對(duì)照組相比,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;中鉬組比低鉬組升高11.33%(P0.01),高鉬組與對(duì)照組、中鉬組相比分別下降34.11%、37.05%(P0.01);高鉬組比低鉬組升高29.91%(P0.01)。結(jié)論:高劑量鉬(120mg/kg Mo)導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生大量的有害過(guò)氧化產(chǎn)物,嚴(yán)重消耗體內(nèi)抗氧化酶,使得抗氧化酶含量下降并對(duì)大鼠睪丸組織造成嚴(yán)重?fù)p傷,破壞了睪丸組織正常形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能,高劑量鉬同時(shí)抑制了睪酮合成相關(guān)基因的表達(dá),使睪酮水平顯著降低,嚴(yán)重破壞精液品質(zhì),最終影響了大鼠生殖功能。
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S859.8

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本文編號(hào)：2584742