發(fā)布時間：2020-02-24 06:19

【摘要】：為表達并純化塞內(nèi)加谷病毒(Senecavirus A,SVA)的VP1蛋白,克隆SVA的VP1基因,測定其序列并構(gòu)建遺傳進化樹,分析VP1蛋白氨基酸突變位點并預(yù)測其二級結(jié)構(gòu)。然后將VP1基因克隆至載體pET-32a(+)中,IPTG誘導(dǎo)表達VP1重組蛋白,用Ni-NTA親和層析柱純化并用W estern-blot進行驗證。結(jié)果顯示,表達的VP1重組蛋白的大小為48 ku,主要以包涵體形式存在,能與抗His標簽的單克隆抗體發(fā)生特異性免疫反應(yīng)。結(jié)果表明成功表達并純化出VP1重組蛋白。
【圖文】：

甌ǖ賴?0株毒株、巴西2株、加拿大CAN-11-55910-3（KC667560）株基因序列的相似性較高，，為94.9％～97.0％，其中與美國US-15-40381IA（KU051393）株的相似性最高，與美國1989年報道的2株、1997年USA－1278（EU271763）株基因序列的相似性也高，為90.4％～92.0％（見表1）。通過對VP1氨基酸序列比對分析發(fā)現(xiàn)，從加拿大CAN-11-55910-3（KC667560）株開始，VP1蛋白有11處多肽位點相對穩(wěn)定遺傳（10、57、62、63、93、97、161、172、221、233、239），且地區(qū)差異不大（見表2）。用Gamier-Robson方法、Chou-Fasman方法預(yù)圖1SVA－CH－01－2015VP1基因的PCR擴增Fig.1PCRamplificationofVP1geneofSVA-CH-01-2015M：DNA分子質(zhì)量標準；1～3：SVA－VP1基因的PCR產(chǎn)物；4：陰性對照M：DL2000DNAMarker;1—3：PCRamplificationproductofSVA-VP1gene；4：NegativecontrolM12342000bp1000bp750bp500bp250bp100bp792bp502

63107）；3:BRA-MG2-2015（KR063108）；4：CAN-11-55910-3（KC667560）；5：US-15-398121A（KU051391）；6：US-15-40380IA（KU051392）；7：US-15-403811A（KU051393）；8：US-15-41901SD（KU051394）；9：USA-89-47752（EU271757）；10：USA-90-10324（EU271761）；11：USA-1278（EU271763）；12：USA-131395（EU271758）；13：USA-GBI30-2015（KT827252）；14：USA-IA46008-2015（KT757282）；15：USA-KS15-01（KX019804）；16：USA-MN15-84-22（KU359213）；17：USA-SD41901-2015（KT757281）；18：USA-SVA-OH2（KU05-8183）圖2SVAVP1基因的遺傳進化樹Fig.2PhylogenetictreeoftheVP1geneofSVA表1SVAVP1核苷酸序列的相似性Table1GenomesequencealignmentofSVAVP1％503

【參考文獻】

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本文編號：2582377