【摘要】：流感病毒現(xiàn)已遍布世界各地,因豬的種間屏障較低,易形成“人-豬-禽”的傳播鏈,并在此期間發(fā)生基因重配,產(chǎn)生新的基因型,威脅公共衛(wèi)生安全。本研究通過應(yīng)用RT-PCR和雞胚接種的方法,對2011年從廣西百色市樂業(yè)縣豬場中分離到的2株H9N2亞型流感病毒進(jìn)行了生物學(xué)特性、分子遺傳規(guī)律、對小鼠的致病性等方面的研究。根據(jù)在NCBI上BLAST的結(jié)果確定這2株分離株為H9N2亞型流感病毒,本實(shí)驗(yàn)室參考國際命名規(guī)則進(jìn)行,簡稱為SW/GX/P2/2011和SW/GX/P3/2011。其中,PB2、PB1、PA、 HA、MP、NA、M和NS的核苷酸ORF分別為2280bp、2274bp、2151bp、 1683bp、1497bp、1410bp、982bp和838bp。這2株分離株與近年來廣西分離株A/Canine/Guangxi/1/2011和A/Equine/Guangxi/3/2011的核苷酸及氨基酸同源性都在99.0%以上。根據(jù)獲得的氨基酸序列分析,2株分離株的HA蛋白上第109、161、163、202和203位均高度保守,第234位為亮氨酸L,具有SAa-2,6Gal受體結(jié)合特異性,HA裂解位點(diǎn)為-RSSRGLF-,沒有多個(gè)氨基酸插入,屬于低致病性毒株；NA蛋白的第63～65位無缺失,而有的研究認(rèn)為這3個(gè)氨基酸的缺失對于增加病毒的神經(jīng)氨酸酶活性有幫助,同時(shí)也有利于病毒從被感染細(xì)胞中釋放,其次NA在119、151、276、292以及294等位點(diǎn)沒有發(fā)生變異,說明SW/GX/P2/2011和SW/GX/P3/2011分離株仍對神經(jīng)氨酸酶類藥物敏感；M2蛋白上的第31位發(fā)生了由S→N的突變,表明這兩株毒對金剛烷胺類藥物產(chǎn)生耐藥性；在內(nèi)部基因中,與致病力有關(guān)的基因位點(diǎn)PB2的627、701位,PB1的622、709位,PA的315、515位,NS的92位以及NP的319位與參考毒株相比均保守。通過2株分離株分子進(jìn)化樹和同源性分析顯示,HA來源于Y280-like亞系,NA來源于G9-like亞系,M和PB2來源于G1-like亞系,PB1、PA、NS和NP來源于F98-like亞系。對這2株進(jìn)行雞胚半數(shù)感染量(EID50)試驗(yàn)得出SW/GX/P2/2011和SW/GX/P3/2011的其LgEID50/0.1mL分別為5.02以及5.23。小鼠致病性結(jié)果顯示,小鼠出現(xiàn)了以肺臟為主的病理變化,病毒能夠在肺臟以及鼻甲中復(fù)制,但復(fù)制水平有一定差異,上呼吸道的鼻甲的復(fù)制能力比下呼吸道的肺臟高。2個(gè)毒株最低均可使小鼠體重下降6%,但并未能致死小鼠,之后至第8天后逐漸恢復(fù)正常體重。
【圖文】：

圖１－２重組病毒的產(chǎn)生Ｆｉｇ．邋１－２邋Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ邋ｖｉｒｕｓ逡逑言，從一個(gè)種族傳到另一個(gè)種族是相當(dāng)困難的，因?yàn)榱鞲胁《揪吣甑南愀哿鞲写蚱屏诉@一常規(guī)，禽流感直接跨越了種族屏障感染不及。通過相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)Ａ型流感病毒多基因覺得其宿主特異性，性左右的是宿主表面的病毒受體和血凝素基因序列上的受體結(jié)合酸ａ－２，邋３半乳糖巧（ＳＡ邋ａ－２，邋３－Ｇａｌ）和唾液酸ａ－２，邋６半乳糖巧種受體，前一種可Ｗ與禽流感病毒結(jié)合，后者則與人流感病毒存在于不同的宿主的呼吸道或消化道上皮細(xì)胞，禽類和馬的消化，３－Ｇａｌ受體，而人類的呼吸道上皮細(xì)胞中有ＳＡ邋ａ－２，６－Ｇａｌ受ＨＡ蛋白上第２２６位氨基酸；禽流感病毒的ＨＡ蛋白第２２６位氨，２２８位為甘氨酸（Ｇｌｙ），易與ＳＡａ－２，３－Ｇａｌ結(jié)合，人流感病毒（Ｌｅｕ），２２８絲Ｓｅｒ，ＳＡａ－２，６－Ｇａｌ

：ｍｎ＾５ｍｉｎ一８５％酒精邋５ｍｉｎ一７５％酒精邋５ｍｉｎ一蒸饋水邋５ｍｉｎ。逡逑：蘇木素６ｍｉｎ－＾蒸饋水洗至不脫色一＾１％鹽酸酒精５ｓｉｎ一蒸饋水清洗至不脫色。逡逑片：八％酒精５Ｓ一８５％酒精５Ｓ一９０％酒精５Ｓ一％％酒逡逑邋Ｉ邋５ｍｉｎ一邋１００％酒精Ｉｌ５ｍｉｎ一二甲苯邋Ｉ邋ｌＯｍｉｎ一二甲苯Ｉｌ定結(jié)果逡逑經(jīng)接種雞胚后，采集尿囊液并用本實(shí)驗(yàn)室流感病毒經(jīng)過電泳后，樣品出現(xiàn)片段大小為６８４ｂｐ的條帶，，與收并送測，測序結(jié)果與ＮＣＢＩ上傳結(jié)果比對，鑒定為Ｈ９
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 陳義鋒;金寧一;賈雷立;魯會軍;南文龍;田明堯;陳曉月;馬海利;馬鳴瀟;劉成宏;;H3、H5、H7、H9亞型流感病毒通用多表位重組雞痘病毒構(gòu)建[J];免疫學(xué)雜志;2007年05期

2 汪思鈞;廖明;任濤;張春紅;黃忠;曹漢威;;表達(dá)豬流感病毒血凝素基因的重組腺病毒的構(gòu)建及免疫原性分析[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2007年01期

3 吳華;郭萬柱;;豬流感病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2006年02期

4 段廷云,桑傳印;豬流感的分子流行病學(xué)規(guī)律及免疫預(yù)防研究進(jìn)展[J];河南畜牧獸醫(yī);2005年11期

5 李海燕,于康震,華英佐;豬流感病毒的種間傳播及分子進(jìn)化[J];中國獸醫(yī)學(xué)報(bào);2004年03期

本文編號：2578264