【摘要】：極低密度脂蛋白受體(Very low density lipoprotein receptor, VLDLR)是低密度脂蛋白受體(Low density lipoprotein receptor, LDLR)家族的一員,能以高親和力結(jié)合富含ApoE的脂蛋白參與甘油三脂的代謝。VLDLR廣泛分布在心臟、骨骼肌、脂肪組織和腦等機體組織,但是在肝臟中表達較少。本實驗首先對高郵鴨VLDLR基因進行了克隆測序,并利用生物信息學(xué)方法對該基因的分子特征和結(jié)構(gòu)進行了分析和預(yù)測；然后對VLDLR基因序列進行多態(tài)性與生長及屠宰性狀的相關(guān)性分析,為高郵鴨的分子育種奠定理論和實踐基礎(chǔ)。1高郵鴨VLDLR基因的克隆及序列分析為探討高郵鴨VLDLR基因的生物信息學(xué)功能,本研究采用RT-PCR方法克隆高郵鴨肌肉組織中VLDLR基因的編碼區(qū)序列,并對其核苷酸序列和推導(dǎo)的氨基酸序列進行了分析。結(jié)果表明：高郵鴨VLDLR基因的編碼區(qū)含有2244個核苷酸,編碼747個氨基酸,Genbank登錄號為KP335149；高郵鴨與雜交鴨、雞、牛、人、小鼠、家兔、大鼠、野豬、斑馬魚的VLDLR基因編碼區(qū)核苷酸序列的同源性分別為90.9%、84.5%、71.3%、73.3%、71.8%、72.1%、72.1%、71.7%、63.2%,高郵鴨VLDLR基因編碼的氨基酸序列與雜交鴨、雞、牛、人、小鼠、家兔、大鼠、野豬、斑馬魚的同源性分別為93.7%、92.5%、77.9%、78.1%、78.7%、78.1%、77.9%、78.5%、65.9%。高郵鴨VLDLR蛋白質(zhì)是一個親水性跨膜蛋白,其二級結(jié)構(gòu)由α螺旋、β轉(zhuǎn)角和無規(guī)則卷曲構(gòu)成,在其胞外區(qū)有3個N-糖基化位點和8個O-糖基化位點。信號肽分析表明,VLDLR蛋白為分泌性蛋白,最有可能的切割位點位于第36位和37位氨基酸之間。本研究為進一步研究鴨VLDLR基因表達、生物學(xué)活性和應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。2高郵鴨VLDLR基因的多態(tài)性及其與生長和屠宰性狀的關(guān)聯(lián)分析為研究VLDLR基因多態(tài)性對高郵鴨生長發(fā)育和屠宰性狀的遺傳效應(yīng),本實驗以280只高郵鴨為實驗材料,采用DNA測序技術(shù)對VLDLR基因進行多態(tài)性檢測,共篩選出8個SNPs位點g.167GA, g.231CT, g.243GA, g.356-357 insCT, g.359delT, g.498CT,g.563-564 insGA和g.631 GA,其中g(shù).231 CT和g.243GA位點位于編碼區(qū)內(nèi),為同義突變,不引起氨基酸的改變。遺傳多態(tài)性分析結(jié)果表明：公鴨的g.231CT.g.356-357 insCT以及母鴨的g.631GA位點為低度多態(tài)(PIC0.25),其余位點均表現(xiàn)為中度多態(tài)(0.25PIC0.5)；x2適合性檢驗顯示,g.498CT和g.631GA顯著偏離了Hardy-Weinberg平衡(P0.05),而其它SNP位點服從Hardy-Weinberg平衡(P0.05)�；谶@8個SNPs位點,采用Phase軟件共組建了8個單倍型,其中H1單倍型在公母兩個群體中所占比例最高,均大于50%。最小二乘分析結(jié)果表明,公鴨群體中,H1H2組合的3～10周齡重、屠體重、半凈膛重、全凈膛重、肝重、腹脂重、半凈膛率、全凈膛率及腹脂率最高,H2H4組合最低；母鴨群體中,H3H4組合的3-7周齡重、屠體重、半凈膛重和全凈膛重最高,HIH2組合的9-10周齡重、肝重、腹脂重和腹脂率最高,H6H6組合最低。結(jié)果表明,VLDLR基因?qū)Ω哙]鴨生長發(fā)育和脂肪沉積起著重要作用,這是VLDLR基因作為影響鴨生長及屠宰性狀候選基因進行的首次研究。
【圖文】：

Ｊｏｋｉｎｅｎ等人在大腦的特定部位發(fā)現(xiàn)缺少了由第４外顯子編碼的ＶＩＸ＞ＬＲ－ｍ型受體ＰＧ］；邋２００４逡逑年，Ｖｅｒｄａｇｕｅｒ研究報道稱ＩＩＩ型受體可Ｗ與鼻病毒結(jié)合ＰＵ。同時，在小鼠腦部區(qū)域還發(fā)現(xiàn)逡逑了缺少第４外顯子和１６外顯子編碼的ＶＬＤＬＲ－ＩＶ型受體（圖２）。逡逑Ｋｅｉｋ0Ｐ２峰對不同類型受體與脂蛋白結(jié)合能力，Ｗ及ｍＲＮＡ在人類小腦和小鼠大腦的逡逑表達分析顯示：ＩＩＩ型受體結(jié)合Ｐ－ＶＬＤＬ的能力最強；在人的小腦部，ＩＩ型受體含量最多，逡逑其次是ＩＶ型，而Ｉ型則處于較低水平；在小鼠大腦的不同區(qū)域，ＶＬＤＬＲ缺少第４外盤子逡逑大約在３０％？４７％之間，缺少第１６外顯子大約是５１％？７６％。更重要的是，在小鼠小腦和逡逑大腦皮層發(fā)現(xiàn)了更高層次的ＶＬＤＬＲ，，在初級神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)可頻繁的發(fā)現(xiàn)缺少了第４和第逡逑１６外顯子的ＶＬＤＬＲ，表明在神經(jīng)細(xì)胞中ＩＶ型受體的表達相當(dāng)豐富；相反，在星形膠質(zhì)細(xì)逡逑

邐７００逡逑Ｐｏｓｉｔｉｏｎ逡逑圖１－５高郵鴨ＶＬＤＬＲ蛋白的疏水性分析結(jié)果逡逑Ｆｉｇ．１－５邋Ｐｒｅ出ｃｔｉｏｎ邋ｒｅｓ山ｔ邋ｏｆ邋ｈｙｄｒｏｐｒｏｂｉｌｉ巧邋ｏｆ邋Ｇａｏｙｏｕ邋ｄｕｃｋ邋ＶＬＤＬＲ邋ｐｒｏ化ｉｎ逡逑３．５．５糖基化位點預(yù)測逡逑
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S834

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本文編號：2573579