【摘要】：選用濃度為30,60,120,180,240μmol/L的氯化銅(CuCl_2)作用于原代大鼠腦微血管內(nèi)皮細胞(BMEC)12h,測定細胞活力、細胞內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)活性的變化。結(jié)果顯示:與對照組相比,細胞活力明顯降低,30μmol/L濃度組SOD的活性變化不明顯,60μmol/L和120μmol/L濃度組SOD的活性升高,而180μmol/L和240μmol/L濃度組SOD的活性降低,CAT的活性均明顯降低,iNOS的活性均明顯升高。結(jié)果表明:銅過量可致BMEC損傷,而氧化應(yīng)激是其中一個重要因素。
【圖文】：

線的回歸方程得到細胞數(shù)，細胞活力＝（試驗組細胞數(shù)／對照組細胞數(shù)）×１００％。１．５氧化應(yīng)激指標(biāo)的檢測ＢＭＥＣ經(jīng)不同濃度的ＣｕＣｌ２處理１２ｈ后，進行消化收集和超聲破碎，用ＢＣＡ法測定蛋白濃度，余下按ＳＯＤ、ＣＡＴ、ＮＯＳ分型試劑盒說明書操作檢測。１．６統(tǒng)計學(xué)分析數(shù)據(jù)用ｘ—±ｓ表示，應(yīng)用ＳＰＳＳ軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差統(tǒng)計分析。２結(jié)果２．１原代培養(yǎng)ＢＭＥＣ免疫熒光鑒定結(jié)果見圖１，Ⅷ因子陽性細胞百分數(shù)達到９８％。圖１原代培養(yǎng)ＢＭＥＣ免疫熒光鑒定圖（１００×）Ａ．明場視野；Ｂ．ＦＩＴＣ標(biāo)記的Ⅷ因子抗體在胞質(zhì)呈綠色熒光；Ｃ．ＤＡＰＩ襯染的胞核呈藍色熒光；Ｄ．同一視野熒光雙標(biāo)合并１４５中國獸醫(yī)學(xué)報２０１７年１月第３７卷第１期ＣｈｉｎＪＶｅｔＳｃｉＪａｎ．２０１７Ｖｏｌ．３７Ｎｏ．１

２．２銅對ＢＭＥＣ細胞活力的影響以細胞數(shù)目為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖２），，求得回歸方程ｙ＝７×１０－６ｘ＋０．１９（Ｒ２＝０．９９０）。經(jīng)不同濃度的ＣｕＣｌ２處理后的ＢＭＥＣ存活率變化見圖３，與對照組相比，隨著銅濃度的升高，ＢＭＥＣ的存活率均極顯著降低（Ｐ＜０．０１），且整體呈下降趨勢。圖２ＢＭＥＣ－ＭＴＳ標(biāo)準(zhǔn)曲線圖３ＢＭＥＣ的細胞活力變化（ｎ＝４，＊＊示與對照組相比Ｐ＜０．０１）２．３銅對ＢＭＥＣ氧化應(yīng)激的影響經(jīng)不同濃度的ＣｕＣｌ２處理１２ｈ后，ＢＭＥＣ的ＳＯＤ活力、ＣＡＴ活力和ｉＮＯＳ活力變化見表１。隨著Ｃｕ２＋濃度的升高，與對照組相比，細胞內(nèi)ＳＯＤ活力在６０μｍｏｌ／Ｌ和１２０μｍｏｌ／Ｌ濃度組均顯著升高（Ｐ＜０．０５），隨后均顯著降低（Ｐ＜０．０５），細胞內(nèi)ＣＡＴ活力均顯著降低（Ｐ＜０．０１），細胞內(nèi)ｉＮＯＳ活力均顯著升高（Ｐ＜０．０５）。表１不同銅濃度對ＢＭＥＣ氧化應(yīng)激的影響（ｎ＝４）Ｕ／ｍｇ組別ＳＯＤＣＡＴｉＮＯＳ對照組８６．０４±３．８０１４３．７４±４．７４７．７８±０．１４３０μｍｏｌ／ＬＣｕ２＋８８．３０±１．７９１２６．３８±８．０８＊＊７．９７±０．１１＊６０μｍｏｌ／ＬＣｕ２＋９３．７６±３．２８＊１０１．０４±８．３７＊＊８．３１±０．２４＊＊１２０μｍｏｌ／ＬＣｕ２＋１００．２２±６．１０＊＊１０４．５７±７．４１＊＊８．３６±０．２５＊＊１

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本文編號：2570933