【摘要】：肌肉生長(zhǎng)抑制素(myostatin,MSTN)屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(transforming growth factor β, TGF-β)超家族成員,在骨骼肌中高表達(dá)。眾多研究表明,敲除MSTN后,肌肉質(zhì)量顯著增大,脂肪含量變少。但抑制MSTN表達(dá)后,如何影響脂肪沉積的過(guò)程,尚未研究清楚。為了探究MSTN抑制表達(dá)后對(duì)脂肪相關(guān)基因的表達(dá)影響,本研究利用反義RNA技術(shù),成功構(gòu)建了雙向表達(dá)載體pMSTN-CMV-CAG-antiMSTN,并通過(guò)Western blot篩選出抑制效果最佳的MSTN的反義載體。將最佳a(bǔ)ntiMSTN載體,RNAi926干擾載體,過(guò)表達(dá)MSTN載體分別轉(zhuǎn)染牛肌肉衛(wèi)星細(xì)胞48h后,Real-timePCR檢測(cè)10種脂肪酸相關(guān)基因相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果顯示,抑制MSTN表達(dá)后,脂肪合成相關(guān)基因：FASNC2.29, p0.05)、ACC (2.19,p0.01)、SCD-1 (1.29, p0.05)的表達(dá)量均上調(diào)；脂肪酸氧化相關(guān)基因：CPTI-B (4.68, p0.01)、ACOX-1(1.66,p0.01)的表達(dá)量上調(diào),ECHDC1 (0.83, p0.05)的表達(dá)量下調(diào)；脂肪分解相關(guān)基因：PPARg (2.26, p0.01)、LIPE (2.05,p0.01)的表達(dá)量上調(diào),LPL (0.79, p0.01)的表達(dá)量下調(diào)；脂肪轉(zhuǎn)運(yùn)基因：FATP (1.04, p0.05)表達(dá)量不變,無(wú)顯著性差異。總體來(lái)說(shuō),脂肪氧化和分解的變化(12.27)大于脂肪合成(5.77)。在牛肌肉衛(wèi)星細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因小鼠個(gè)體中,利用RNA干擾技術(shù)抑制MSTN表達(dá)后,脂肪合成和降解相關(guān)基因表達(dá)結(jié)果與此有一致的表達(dá)趨勢(shì)。在牛肌肉衛(wèi)星細(xì)胞中,過(guò)表達(dá)MSTN,脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)也有提升,但脂肪氧化和分解也大于脂肪合成,只是低于抑制結(jié)果的變化幅度。上述結(jié)果提示,1、在牛肌肉衛(wèi)星細(xì)胞中,利用反義RNA(M3)抑制MSTN表達(dá),可以得到與RNA干擾技術(shù)同樣的抑制靶基因表達(dá)的效果。2、在牛肌肉衛(wèi)星細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因鼠中MSTN敲減或過(guò)表達(dá)后脂肪相關(guān)基因的表達(dá)均顯示從脂肪合成與脂肪分解的平衡向脂肪分解方向移動(dòng)。3、抑制MSTN表達(dá)后,PPARg表達(dá)量均顯著提升,而在過(guò)表達(dá)中顯著下降,與MSTN呈負(fù)相關(guān),而CPTI-B基因與PPARg基因有相似的表達(dá)趨勢(shì)。提示這兩個(gè)基因可能是影響脂肪沉積的關(guān)鍵基因。
【圖文】：

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本文編號(hào)：2570077