【摘要】：豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)感染引起的一種以懷孕母豬發(fā)生流產(chǎn)、早產(chǎn)和死胎等嚴(yán)重的繁殖障礙和仔豬與育肥豬的呼吸道癥狀為特征的傳染病,給全球養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此,建立有效的診斷PRRSV方法是非常重要的。PRRSV核衣殼蛋白N,是病毒主要的結(jié)構(gòu)蛋白,并且具有很強(qiáng)的免疫原性,是該病毒血清學(xué)診斷方法中應(yīng)用最多的靶抗原。PRRSV的非結(jié)構(gòu)蛋白Nsp9蛋白,即RNA依賴RNA聚合酶(RdRp),其僅在病毒的復(fù)制過程中產(chǎn)生,高度保守�；诖�,本研究就利用原核表達(dá)系統(tǒng)誘導(dǎo)表達(dá)PRRSV N和Nsp9蛋白為包被抗原,建立了檢測PRRSV抗體的兩種間接ELISA方法(N-iELISA和Nsp9-iELISA),用以診斷PRRSV的感染及區(qū)分PRRSV滅活疫苗和弱毒疫苗(或者野毒)的感染,在臨床上具有一定免疫監(jiān)控和疫病凈化的應(yīng)用。首先,建立檢測PRRSV N和Nsp9抗體的間接ELISA方法,即N-iELISA和Nsp9-iELISA。利用表達(dá)PRRSV的N和Nsp9蛋白的的原核表達(dá)菌株,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后,SDS-PAGE分析發(fā)現(xiàn)N和Nsp9蛋白分別以包涵體和可溶蛋白形式成功表達(dá)。Ni柱純化的兩種蛋白為包被抗原,建立間接ELISA,并利用PRRSV陰性血清,確定兩種間接ELISA方法陰陽性血清判斷臨界值分別為0.172和0.32。其次,計(jì)算建立的兩種間接ELISA的與Western blot、IDEXX ELISA的符合率。從PRRSV人工感染的豬血清中抽取62份豬血清,進(jìn)行Western blot檢測,其結(jié)果與N-iELISA和Nsp9-iELISA檢測結(jié)果的符合率分別為95.16%和87.10%。另外,用商品化的IDEXX ELISA抗體檢測試劑盒檢測送檢的37份臨床豬血清,結(jié)果與N-iELISA和Nsp9-iELISA檢測結(jié)果的符合率分別為91.89%和81.08%。最后,應(yīng)用建立的兩種間接ELISA。分別檢測攻毒不同PRRSV毒株后,收集的不同天數(shù)豬血清,分析針對N和Nsp9產(chǎn)生的抗體滴度的變化規(guī)律。結(jié)果表明,PRRSV感染后7天左右和14天(攻毒株為PRRSV CH-1R,或者21天攻毒株為PRRSV SD-16)全部豬只都可分別檢測到N和Nsp9蛋白的抗體,且攻毒后前30天內(nèi)Nsp9蛋白產(chǎn)生的抗體滴度隨著攻毒天數(shù)的逐漸升高,而N蛋白后期略微下降。同時,分別檢測臨床收集的陜西和山東不同地區(qū)的104份為免疫PRRSV滅活疫苗的豬血清,其陽性率分別為93.27%和2.88%;552份是免疫PRRSV弱毒疫苗的豬血清,其陽性率分別為89.85%和81.34%。綜上所知:本研究成功的建立檢測PRRSV抗體的兩種間接ELISA方法。應(yīng)用這兩種方法成功的診斷PRRSV的感染及區(qū)分PRRSV滅活疫苗和弱毒苗(或者野毒)的感染。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 李軍,林繼煌,姜平,何孔旺,倪艷秀,還紅華;用免疫金技術(shù)檢測豬繁殖與呼吸綜合征病毒[J];畜牧與獸醫(yī);2001年02期

2 顧小雪;姜平;韓研妍;李玉峰;;重組GP5AB蛋白間接ELISA檢測PRRSV抗體方法的研究[J];畜牧與獸醫(yī);2007年02期

3 孫淑芳;包振民;郭福生;鄭增忍;蔣正軍;王娟;李葳;;競爭ELISA檢測豬呼吸與繁殖綜合征病毒抗體研究[J];中國動物檢疫;2006年08期

4 張曉梅,楊漢春,任慧英,李華,陳艷紅,高齊瑜,王彩虹,崔尚金;用LSAB免疫組化染色法檢測豬生殖-呼吸道綜合征病毒抗原的研究[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);1999年06期

5 童武;周艷君;肖少波;童光志;陳煥春;;2010年國內(nèi)部分省份豬場常見病毒性疾病的病原學(xué)調(diào)查[J];中國動物傳染病學(xué)報(bào);2011年05期

6 任慧英,李文立,楊漢春,王金寶,孫月平;豬繁殖與呼吸綜合征病毒cDNA探針的制備及初步應(yīng)用[J];中國獸醫(yī)學(xué)報(bào);2000年05期

7 王云峰,周艷君,仇華吉,錢平,蔡雪暉,柴文君,童光志;應(yīng)用重組N蛋白-ELISA檢測豬繁殖與呼吸綜合征抗體的研究[J];中國獸醫(yī)雜志;2001年03期

，

本文編號：2566111